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结肠粘膜活检标本中固有层单个核细胞的分离及表型分析

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华西医科大学学报 2000年第1期31卷 116-118页

作者：刘小方欧阳钦黄丽彬马洪升胡仁伟张燕华西医科大学附属第一医院消化内科成都610041

为改进从粘膜活检标本中分离固有层单个核细胞的方法 ,并行初步表型分析 ,从 8例溃疡性结肠炎、5例正常人和 2 2例大肠癌患者各取 1 0块结肠粘膜进行活检 ,比较消化分离各因素对细胞产量的影响 ,并以双色荧光流式细胞术分析淋巴细胞各... 详细信息

为改进从粘膜活检标本中分离固有层单个核细胞的方法 ,并行初步表型分析 ,从 8例溃疡性结肠炎、5例正常人和 2 2例大肠癌患者各取 1 0块结肠粘膜进行活检 ,比较消化分离各因素对细胞产量的影响 ,并以双色荧光流式细胞术分析淋巴细胞各亚群的变化。结果显示 :溃疡性结肠炎组固有层单个核细胞产量达 1 0 6 个 ,为正常人组及大肠癌组的 2倍 ,各组细胞活力均 >95 % ;其中 T、B细胞百分比在三组间无统计学上的差异 ,而溃疡性结肠炎组 CD3+ CD4+ 、CD3+ CD8+ T细胞百分比与后两组比较则有显著不同 (P固有层单个核细胞进行表型或功能研究。

关键词：固有层单个核细胞溃疡性结肠炎流式细胞术

IL-18对炎症性肠病患者外周血和肠黏膜固有层淋巴细胞增殖和炎症介质分泌的影响

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郑州大学学报（医学版） 2006年第5期41卷 828-830页

作者：刘占举吴国华张炳勇徐刚崔静赵治国唐芙爱徐志林郑州大学第二附属医院消化内科郑州450014 郑州大学护理学院郑州450052 河南省人民医院消化内科郑州450003

目的:分析IL-18对炎症性肠病患者外周血和肠黏膜固有层T淋巴细胞增殖和促炎症细胞因子分泌的影响。方法:收集12例克罗恩病(CD)、25例溃疡性结肠炎(UC)患者和15例结肠镜检查正常者(对照)的肠黏膜组织,分离外周血单个核细胞(PBMC)和肠黏... 详细信息

目的:分析IL-18对炎症性肠病患者外周血和肠黏膜固有层T淋巴细胞增殖和促炎症细胞因子分泌的影响。方法:收集12例克罗恩病(CD)、25例溃疡性结肠炎(UC)患者和15例结肠镜检查正常者(对照)的肠黏膜组织,分离外周血单个核细胞(PBMC)和肠黏膜固有层单个核细胞(LPMC),体外培养并用IL-18刺激,48h后,利用ELISA检测上清液中干扰素(IFN)-γ、IL-2、IL-4、IL-5和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,采用3H-胸腺嘧啶掺入法检测LPMC的增殖情况。结果:IL-18刺激后,CD患者PBMC和LPMCIFN-γ、IL-2和TNF-α分泌水平高于UC和对照(P<0.05);CD患者的LPMC增殖率亦高于UC和健康对照。结论:IL-18可激活CD患者淋巴细胞的增殖,PBMC和LPMC分泌大量促炎症细胞因子,可能参与了CD的发病过程,体内阻断IL-18可能对CD患者免疫治疗有帮助。

关键词：白细胞介素-18 淋巴细胞外周血淋巴细胞固有层炎症细胞因子炎症性肠病

丝素蛋白支架构建组织工程化口腔黏膜固有层修复颊粘膜缺损的实验研究

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丝素蛋白支架构建组织工程化口腔黏膜固有层修复颊粘膜缺损的实验...

作者：高秀品苏州大学

学位级别：硕士

目的: 探讨应用丝素蛋白支架材料构建组织工程化口腔黏膜固有层修复颊粘膜缺损的可行性。方法: 1、采用匀浆法分离成单细胞悬液再贴壁培养的方法培养大鼠口腔黏膜成纤维细胞,传代至第3代细胞时行波形蛋白鉴定,荧光染料染色后... 详细信息

目的: 探讨应用丝素蛋白支架材料构建组织工程化口腔黏膜固有层修复颊粘膜缺损的可行性。方法: 1、采用匀浆法分离成单细胞悬液再贴壁培养的方法培养大鼠口腔黏膜成纤维细胞,传代至第3代细胞时行波形蛋白鉴定,荧光染料染色后接种到孔径为265μm的多孔丝素蛋白支架材料上,24小时检测细胞粘附率;分别对培养1、4、7天行激光扫描共聚焦显微镜观察细胞粘附增殖情况;4、7天行细胞支架复合物行扫描电镜观察。 2、雄性SD清洁级大鼠48只,随机分为3组。A组:实验组即口腔黏膜固有层组,n=16,以丝素蛋白支架构建的口腔黏膜固有层修复大鼠口腔颊黏膜圆形缺损（直径10㎜）;B组:阴性对照组即丝素蛋白支架组,n=16,以丝素蛋白支架组修复大鼠口腔颊粘膜圆形缺损（直径10㎜）;C组:空白对照组,n=16,以凡士林油纱覆盖大鼠口腔颊粘膜圆形缺损（直径lO mm）。术后7、14、21及28天分别行大体观察、创面直径测量、组织学、免疫组织化学检测。结果: 1、大鼠口腔黏膜成纤维细胞培养:①光镜下观察细胞形态大多数完整、分散度好及细胞增殖快,波形蛋白检测三代细胞时阳性率为99﹪。细胞材料复合培养24小时后细胞粘附率为（97.76±1.34）﹪。②激光共聚焦显微镜观察第1天细胞呈圆形或椭圆形沿着支架及孔的边缘呈现散在的、单一的分布;第4天支架上细胞数量显著增多,细胞融合、粘附。第7天支架及孔径内部细胞呈团簇状、片状生长,呈现长梭形、椭圆形细胞覆盖了材料的大部分。③扫描电镜观察第1、4天大鼠口腔黏膜成纤维细胞呈梭形或多角形在材料上粘附伸展;第7天细胞表面有细小绒毛和褶皱形成,与接触部位伸伪足形成,呈（鸭蹼）状粘附和包绕纤维并可见细胞分泌的基质沉积于细胞周围和表面,细胞数量增多,细胞在支架材料上生长旺盛。 2、创面观察:①创面大体观察:术后3组创面直径收缩率为C组﹥B组﹥A组,其中A组及B组创面呈现逐渐收缩,C组呈现先慢后快的收缩。术后7天A组及B组创面均被黄色薄膜覆盖,C组创面被浅黄色伪黏膜覆盖。②组织学显示:HE染色示术后C组在各个时间点创面炎性细胞密度及数量均大于A组及B组。③免疫组化显示:术后7天三组新生黏膜广谱角蛋白（cytokeration ,CK）表达均阳性。A组可见上皮层数明显多于B、C两组, C组最少,钉突粗大。A、B组新生上皮与正常口腔黏膜相似,上皮化程度方面A组明显优于B组;C组口腔黏膜上皮厚薄不一,上皮下炎性细胞多。CD31染色显示:术后A组在各个时间点新生毛细血管数量最多,且分布均匀。结论: 1、大鼠口腔黏膜成纤维细胞可以在孔径为265μm的丝素蛋白支架材料粘附、生长、增殖,成功构建大鼠口腔黏膜固有层,为修复大鼠口腔颊黏膜缺损创造了条件。 2、丝素蛋白支架材料构建的大鼠口腔黏膜固有层能促进口腔黏膜上皮生长,加速创面愈合,抑制口腔黏膜创面的收缩,减轻疤痕挛缩。 3、应用丝素蛋白支架材料构建组织工程化口腔黏膜固有层修复颊粘膜缺损是可行的,有一定临床应用价值。

关键词：丝素蛋白口腔黏膜固有层修复组织工程

两种丝素蛋白体外构建口腔黏膜固有层的初步研究

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两种丝素蛋白体外构建口腔黏膜固有层的初步研究

作者：丁云林苏州大学

学位级别：硕士

目的：研究含纳米纤维支架和盐析法制备的丝素蛋白支架体外分别构建口腔黏膜固有层可行性，为丝素蛋白组织工程化口腔黏膜提供实验依据。方法：采用组织块法原代培养SD大鼠口腔黏膜成纤维细胞（oral fibroblast cellOFC），细胞传至... 详细信息

目的：研究含纳米纤维支架和盐析法制备的丝素蛋白支架体外分别构建口腔黏膜固有层可行性，为丝素蛋白组织工程化口腔黏膜提供实验依据。方法：采用组织块法原代培养SD大鼠口腔黏膜成纤维细胞（oral fibroblast cellOFC），细胞传至第3代时进行波形蛋白（Vimentin）鉴定，DiI和DAPI染色并观察细胞形态后，分别接种于两种丝素蛋白支架上，24h监测细胞的粘附率，1-7d分别测定两种丝素蛋白支架材料收缩率，分别于第1d、4d、7d、10d、14d行DNA含量的测定;同时在4d、7d、10d、14d行激光共聚焦显微镜观察三维结构，在第4d、7d行细胞支架复合物环境扫描电镜观察。将培养第14天的细胞支架复合物经4%多聚甲醛固定后，DAPI染色细胞核，鬼笔环肽（phalloidin）进行肌动蛋白的检测。结果：口腔黏膜成纤维细胞组织块原代培养的细胞9天后爬出，光镜下观察细胞形态多呈长梭形、扁平状，核呈椭圆形，细胞结构完整。第三代的OFC行波形蛋白鉴定，阳性率达99%，DiI和DAPI染色后观察细胞细胞形态更清晰，细胞膜示橙红色，细胞核呈蓝色。纳米纤维丝素蛋白支架24小时细胞粘附率为（95%±1.2%）,盐析法制备的丝素蛋白24小时细胞粘附率约为（86±1.2%），纳米型丝素蛋白1-7天收缩不明显，盐析法制备的丝素蛋白厚度稍增加。激光共聚焦显微镜发现含纳米纤维支架上细胞明显较盐析法制备的丝素蛋白上细胞多，随时间的推移，含纳米纤维的丝素蛋白上细胞逐渐增多，并且向内部生长，呈团簇状聚集;盐析法制备的丝素蛋白细胞随时间推移细胞也逐渐增多，也向内部生长，但细胞数量较少，生长速度较慢，形态比较分散。扫描电镜发现含纳米纤维丝素蛋白表面有小绒毛及褶皱形成，接触部位有伪足，周围有大量的细胞分泌物，盐析法制备的丝素蛋白表面细胞特征不明显，细胞分泌物较少。14d时含纳米纤维丝素蛋白DAPI和Phalloidin染色后，荧光显微镜发现有大量的绿色荧光,细胞核染色不明显，而盐析法制备的丝素蛋白荧光显微镜下绿色荧光较少，细胞核呈蓝色也不明显。结论：两种丝素蛋白均具有良好的生物相容性，但含纳米纤维丝素蛋白支架明显优于盐析法制备的丝素蛋白支架，但两种材料在组织工程领域的有待进一步研究。

关键词：丝素蛋白成纤维细胞固有层组织工程

烫伤延迟复苏后小肠固有层和上皮内淋巴细胞凋亡率及凋亡相关基因表达的变化

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中国危重病急救医学 2003年第5期15卷 284-287页

作者：张诚盛志勇吕艺胡森孙晓庆刘毅张世范兰州军区兰州总医院烧伤整形科甘肃兰州730050 解放军第三○四医院烧伤研究所北京100037 兰州军区兰州总医院胸外科甘肃兰州730050

目的 :探讨延迟复苏对烫伤大鼠小肠固有层淋巴细胞 ( L PL)和上皮间质淋巴细胞 ( IEL)凋亡率及凋亡相关基因表达的影响。方法 :Wistar大鼠 30只 ,单盲法随机分为立即复苏组 ( ER,n=12 )和延迟复苏组( DR,n=12 ) ,30 %体表面积度烫伤... 详细信息

目的 :探讨延迟复苏对烫伤大鼠小肠固有层淋巴细胞 ( L PL)和上皮间质淋巴细胞 ( IEL)凋亡率及凋亡相关基因表达的影响。方法 :Wistar大鼠 30只 ,单盲法随机分为立即复苏组 ( ER,n=12 )和延迟复苏组( DR,n=12 ) ,30 %体表面积度烫伤合并延迟复苏模型 ;6只作为假伤对照。采用 DNA电泳、片段百分率测定及逆转录聚合酶链反应 ( RT PCR)观察伤后 L PL、IEL凋亡百分率 ( ap%)及 ICE、bcl 2基因 m RNA表达变化。结果 :伤后 L PL、IEL的 ap%均显著高于伤前 ( P均 <0 .0 1) ;伤后 12 h DR组 L PL、IEL的 ap%显著高于ER组 ( P均 <0 .0 1)。伤后 6 h L PL、IEL基因组 DNA电泳均可见凋亡特征性梯形条带。烫伤后 L PL、IEL ICE基因表达均明显增强 ,且 DR组显著高于 ER组 ( P<0 .0 5或 P<0 .0 1)。L PL、IEL 伤前 bcl 2 m RNA强表达 ,伤后极弱表达 ;DR组相同时间点表达显著弱于 ER组 ( P<0 .0 5或 P<0 .0 1)。结论 :促凋亡基因 ICE表达增强而抑凋亡基因 bcl 2表达减弱 ,可能是烫伤延迟复苏后 L PL、IEL 凋亡剧增的重要原因之一。

关键词：烫伤延迟复苏细胞凋亡大鼠上皮间质淋巴细胞固有层小肠基因表达

中药复方肠安泰对肠癌肺转移模型小鼠肠黏膜固有层B细胞及IL-12的影响

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世界华人消化杂志 2003年第4期11卷 478-480页

作者：王文萍王垂杰姜良铎飯郷正明辽宁中医学院附属医院肿瘤内科辽宁省沈阳市110032 辽宁中医学院附属医院消化内科辽宁省沈阳市110032 北京中医药大学东直门医院内科北京市100029 日本国立癌中心细胞增生实验室

目的:探讨中药复方肠安泰对肠管绒毛黏膜固有层B细胞及IL-12的影响及其与肺转移的关系。方法:经皮下植入大肠癌高度肺转移细胞(Co26Lu),建立大肠癌肺转移小鼠动物模型,采用ABC免疫染色及免疫荧光染色方法做相关分析。结果:荷瘤治疗组与... 详细信息

目的:探讨中药复方肠安泰对肠管绒毛黏膜固有层B细胞及IL-12的影响及其与肺转移的关系。方法:经皮下植入大肠癌高度肺转移细胞(Co26Lu),建立大肠癌肺转移小鼠动物模型,采用ABC免疫染色及免疫荧光染色方法做相关分析。结果:荷瘤治疗组与荷瘤对照组相比IgA、IgM及IL-12阳性细胞在小肠绒毛黏膜固有层均有显著意义的增加,两组数值依次为172.3±6.7,59.2±5.3,79.6±4.1;131.2±5.3,45.1±4.3,24.4±2.5(P固有层B细胞的活化及IL-12的诱导有关。

关键词：中药复方肠安泰肠癌肺转移小鼠转移细胞 IL-12 固有层 B细胞小肠绒毛黏膜

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胎喉声带固有层的组织结构

国外医学.耳鼻咽喉科学分册 1986年第2期 116-117页

作者：陈占功

现已证实人类声带固有层的组织结构与年龄有关。本文研究胎儿声带固有层的发育和组织结构特性,仅为人胎全喉研究的一部分。标本选自13、16、18和23周龄的人胎喉和下咽部,用10%福尔马林固定后,以石蜡包埋,从会厌基底到声门下作水平切片... 详细信息

现已证实人类声带固有层的组织结构与年龄有关。本文研究胎儿声带固有层的发育和组织结构特性,仅为人胎全喉研究的一部分。标本选自13、16、18和23周龄的人胎喉和下咽部,用10%福尔马林固定后,以石蜡包埋,从会厌基底到声门下作水平切片。每个标本切片300张(切片厚度10μm)。选出声带水平切片50张,用HE和Mallory-Azan联合法、Van Gieson和PafHalmi等方法染色。在光学显微镜下对声带固有层结构形态进行观察。将声带分为前、中、后

关键词：声带固有层

白介素-15和其受体可能参与增强炎性肠病患者肠固有层B细胞的活化和分化

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世界核心医学期刊文摘（胃肠病学分册） 2005年第8期1卷 55-56页

作者： Nishiwaki T Ina K Goto H. K. Kusugami 杨雪娟 Department of Therapeutic Med icine Nagoya Univ. Grad. Sch. of Medicine 65 Tsurumai-cho Showa-ku Nagoya 4 66-8550Japan

Background. We investigated the possible roles of the interleukin(IL)-15 and IL-15 receptor (IL-15R) system in a heightened state of B-cell activation and differentiation in intestinal mucosa with inflammatory bowel disease (IBD).Meth ods. The expression of IL-15 and IL-15RαmRNA and protein in inflamed colonic mucosal tissues with IBD, and in control tissues was examined by reverse transcr iptase-polymerase chain reaction and immunohistological methods. The effects of recombinant(r)IL-15 on the expression of IL-15Rαon lamina propria B cells an d the production of immunoglobulin G (IgG) were analyzed in vitro, using lamina propria mononuclear cells (LPMCs)isolated from control tissues. Results. The int ensity of IL-15 and IL-15RαmRNA was greater in the mucosal tissues of patient s with IBD, especially in those of patients with ulcerative colitis (UC), than i n control tissues. Compared to control tissues, mononuclear cells positive for I L-15Rαprotein were observed in greater proportions in tissue sections from pat ients with IBD, especially in those from patients with UC, where IL-15Rαprotei n was localized to CD20-positive B cells to a significant degree. There were in creases in the proportions of IL-15Rα-positive B cells and IgG-producing cel ls in rIL-15-or rCD40L-stimulated cultures of LPMCs, with stimulatory effects being greater in the presence of their ***. These data sugg est that the IL-15 and IL-15R system may play important roles in the activatio n and differentiation of lamina propria B cells in patients with IBD, especially in those with UC.

关键词：炎性肠病 B细胞固有层细胞活化肠黏膜溃疡性结肠炎 α蛋白结肠黏膜组织肠组织免疫球蛋白

出血性休克时小肠固有层内血管、间质、淋巴管间的液体流动

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中国病理生理杂志 1992年第5期 551-551页

作者：田牛刘凤英眭翔解放军总医院微循环研究室

以大鼠为对象,剖腹,暴露肠粘膜。由颈动脉放血约3.5～4.5ml,血压维持在40mmHg,处于休克状态。由静脉快速注射荧光素钠0.25ml,在荧光显微镜下观察弥散(通过微血管弥散至整个绒毛固有层)、集中(弥

关键词：淋巴管淋巴系统出血性休克血源性休克固有层间质