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固定化金属离子亲和发光二氧化硅纳米粒子的制备及其用于磷酸化蛋白免疫印迹标记

色谱 2021年第4期39卷 384-390页

作者：毛雨晓郑蒙蒙刘桂真安保礼康经武上海大学理学院化学系上海200444 中国科学院上海有机化学研究所生命有机化学国家重点实验室上海200032

发展了一种能够识别磷酸化蛋白的固定化金属离子亲和发光二氧化硅纳米粒子用于免疫印迹(Western Blot)磷酸化蛋白的标记。首先通过反相微乳液Stöber方法合成了掺杂异硫氰酸荧光素硅烷化衍生物的发光二氧化硅(FITC@SiO_(2))球形纳米粒子... 详细信息

发展了一种能够识别磷酸化蛋白的固定化金属离子亲和发光二氧化硅纳米粒子用于免疫印迹(Western Blot)磷酸化蛋白的标记。首先通过反相微乳液Stöber方法合成了掺杂异硫氰酸荧光素硅烷化衍生物的发光二氧化硅(FITC@SiO_(2))球形纳米粒子,粒子平均粒径为60 nm。然后通过共聚反应在FITC@SiO_(2)纳米粒子表面生成一层聚合物用于保护纳米粒子,并引入N,N-(双羧甲基)-L-赖氨酸功能基团用于螯合金属离子,从而实现固定化金属离子亲和作用。以α-酪蛋白作为实验模型,用高效液相色谱-质谱研究了螯合不同金属离子的发光纳米粒子对磷酸化蛋白的识别作用。结果表明,螯合了Ti^(4+)金属离子的发光二氧化硅FITC@SiO_(2)纳米粒子对α-酪蛋白酶解液中的磷酸化肽段的富集作用最强。利用这种发光二氧化硅FITC@SiO_(2)纳米粒子对磷酸化肽段的特异性识别性能,可用于Western Blot实验中标记磷酸化蛋白的条带。结果显示,α-酪蛋白的电泳条带可以被亲和发光二氧化硅FITC@SiO_(2)纳米粒子标记,而作为对照的牛血清白蛋白则没有被标记。

关键词：免疫印迹固定化金属离子亲和发光二氧化硅纳米粒子磷酸化蛋白标记

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磁性氮掺杂石墨烯和固定化金属亲和型磁性吸附剂的制备及应用

磁性氮掺杂石墨烯和固定化金属亲和型磁性吸附剂的制备及应用

引用

作者：魏彤西北大学

学位级别：硕士

样品前处理是复杂样品分析过程中的重要一环。在众多的样品前处理方法中,使用磁性粒子作为吸附剂的磁性固相萃取(MSPE),因为具有快的传质动力学且操作简便快捷而备受青睐。故而,新型磁性吸附剂的开发已经成为当前分析化学研究中的热点... 详细信息

样品前处理是复杂样品分析过程中的重要一环。在众多的样品前处理方法中,使用磁性粒子作为吸附剂的磁性固相萃取(MSPE),因为具有快的传质动力学且操作简便快捷而备受青睐。故而,新型磁性吸附剂的开发已经成为当前分析化学研究中的热点之一。近年来,石墨烯作为一种热点材料,已被广泛地用于各个化学研究领域。但是石墨烯容易发生不可逆的聚集,并且难以从液相中分离出来,这便限制了其在吸附分离中的发展。因此,人们开发了多种改性方法用于改善石墨烯的吸附性能。本文采用杂原子掺杂和表面修饰的方法合成了两种磁性吸附剂,将它们分别应用于对环境污染物和植物激素的检测。主要研究内容如下:(1)采用一步水热法高效地合成一种磁性的氮掺杂石墨烯(mag NG),并将其应用于对非甾体抗炎类药物(NSAIDs)的吸附研究中。由于石墨烯具有较大的比表面积,在掺杂了氮之后可通过强的疏水作用力、π-π相互作用以及氢键作用获得良好的吸附效果。采用透射电镜(TEM)、扫描电镜(SEM)、红外光谱(FT-IR)、元素分析仪、X-射线光电子能谱(XPS)、超导量子干涉磁测量系统(SQUID)等方法对所制备的吸附剂形貌、化学成分、磁性等进行表征。在对影响萃取效率的参数进行了详细优化后,将mag NG用于环境样品中NSAIDs的分离富集,结合高效液相色谱建立了NSAIDs的高灵敏分析方法,其检测限范围为1.07-1.53 ng/m L,加标回收率在81.2%-121.5%之间,日内和日间的相对标准偏差均小于10.8%。所建立的方法具有萃取过程高效、线性范围宽、精密度高等优点。(2)在磁性石墨烯(magGO)表面快速沉积稳定的聚多巴胺(PDA)和聚乙烯亚胺(PEI)层后,采用表面引发原子转移自由基聚合法(SI-ATRP),将聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)接枝到其表面形成主链,之后再通过开环反应,将亚氨基二乙酸(IDA)枝接在GMA链上,最后固定Cu,得到磁性石墨烯基固定化金属离子亲和吸附剂(mag GO@PDA/PEI@GMA@IDA-Cu),利用Cu与N的配位作用,达成对细胞分裂素(CKs)的选择性吸附。对mag GO@PDA/PEI@GMA@IDA-Cu的形貌、化学结构等进行了表征。优化了萃取条件后,将其用于植物样品中细胞分裂素的分析检测,样品加标回收率在84.2-120%之间,日内和日间相对标准偏差均小于11.0%。因此,该分析方法具有检测植物中痕量的CKs的能力,且萃取过程快速、高效。

关键词：磁性固相萃取氮掺杂石墨烯原子转移自由基聚合固定化金属离子亲和非甾体类抗炎药细胞分裂素分离富集

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