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黑龙江八一农垦大学学报 2020年第4期32卷 15-19,46页

作者：于国伟刘行波倪宏波黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319

通过利用实验已经构建好的表达IBRVgB/gC/gD囊膜蛋白的真核表达质粒(pCDNA4-gB-His、pCDNA4-gC-His、pCDNA4-gD-His)为免疫原,以PEI磁珠为载体,PEG为保护层构建DNA疫苗。将构建好的真核表达质粒,通过鉴定、扩增、大提后,使PEI磁珠与其... 详细信息

通过利用实验已经构建好的表达IBRVgB/gC/gD囊膜蛋白的真核表达质粒(pCDNA4-gB-His、pCDNA4-gC-His、pCDNA4-gD-His)为免疫原,以PEI磁珠为载体,PEG为保护层构建DNA疫苗。将构建好的真核表达质粒,通过鉴定、扩增、大提后,使PEI磁珠与其吸附并转染至小鼠胚胎细胞(NIH/3T3)鉴定蛋白表达情况,此后进行疫苗制备并通过电镜观察其形态特征。结果表明:三种蛋白均能在小鼠细胞中表达,所制备DNA疫苗在电子显微镜下可观察到PEG包裹在最外层,粒径均在100 nm以内。成功构建了以PEI磁珠吸附IBRV gB gC gD基因并包裹PEG保护层的DNA疫苗,验证其在小鼠表达系统中可以成功表达,为后续对小鼠免疫效果的评价奠定了基础。

关键词：囊膜蛋白基因牛传染性鼻气管炎病毒 PEI磁珠 DNA疫苗 PEG600

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禽白血病病毒J亚群env基因的克隆和序列分析

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中国病毒学 2001年第1期16卷 68-73页

作者：秦爱建崔治中 Lucy Lee Aly Fadly 扬州大学兽医系江苏扬州225009 Aviandiseaseandoncologylaboratory

应用多聚酶链反应 (PCR)的方法扩增出ADOL 4817毒株的囊膜蛋白env基因 ,并克隆进大肠杆菌。经核酸序列分析证明 ,env基因的大小为 1746bp ,其中 gp85和gp37由 15 5 4bp组成 ,可翻译成 5 17个氨基酸 ,分子量为5 7.7kD。根据糖基化位点N X... 详细信息

应用多聚酶链反应 (PCR)的方法扩增出ADOL 4817毒株的囊膜蛋白env基因 ,并克隆进大肠杆菌。经核酸序列分析证明 ,env基因的大小为 1746bp ,其中 gp85和gp37由 15 5 4bp组成 ,可翻译成 5 17个氨基酸 ,分子量为5 7.7kD。根据糖基化位点N X S/T的特点 ,发现ADOL 4817的env蛋白有 15个潜在的糖基化位点。同源性分析证明 ,ADOL 4817的env基因与其它ALV J的env基因序列同源性为 88.8%～ 92 .4% ,而与外源性ALVs的相应序列的同源性仅为 40 .5 %～ 5 1.4% ,然而 ,与内源性的EAV HP毒株的类env基因的同源性高达 91.2 % ;另外 ,ADOL 4817毒株的 gp37在C末端多了 13个氨基酸。这些结果提示 ,ALV J的env基因存在广泛的变异性。

关键词：禽白血病病毒囊膜蛋白基因克隆定序鸡

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新城疫病毒HR09株囊膜蛋白耐热分子基础研究

新城疫病毒HR09株囊膜蛋白耐热分子基础研究

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作者：胡海扬州大学

学位级别：硕士

新城疫(Newcastledisease,ND)是严重危害家禽养殖业的烈性传染病,它的病原是新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)。该病的防控主要依靠接种疫苗,耐热的弱毒活疫苗便于贮存运输,对热带地区和偏远的乡村地区有重要应用价值。国外选... 详细信息

新城疫(Newcastledisease,ND)是严重危害家禽养殖业的烈性传染病,它的病原是新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)。该病的防控主要依靠接种疫苗,耐热的弱毒活疫苗便于贮存运输,对热带地区和偏远的乡村地区有重要应用价值。国外选育的耐热型V4、1-2等疫苗毒株已经在东南亚、非洲等热带地区的广大乡村使用,并且产生了很好的预防控制效果。我国虽然引进了 V4等耐热株,也通过进一步耐热筛选培育了适合我国使用的耐热弱毒株,但限于知识产权等因素,至今未在我国得到推广应用。本实验室早期分离到一株NDV耐热强毒HR09株,前期已鉴定了其生物学特性,建立了反向遗传学操作平台,但关于其耐热性的分子基础研究尚不全面。本研究在前期研究的基础上,通过耐热传代试验,测定不同代次毒株囊膜蛋白基因(F、HN基因)核苷酸序列,研究病毒在热压迫下其遗传变异规律;利用生物信息学分析方法,在核酸和氨基酸水平上研究NDV耐热性相关基因的特征,初步探明病毒囊膜蛋白耐热的分子基础。同时,以HR09株为骨架,将HR09株F蛋白基因替换为LaSota株F蛋白基因,构建嵌合病毒,进一步研究F蛋白对病毒耐热性的影响,并期望获得1株耐热的NDV弱毒株,为创制我国自主的NDV耐热弱毒疫苗打下基础。***09株囊膜蛋白基因遗传变异规律与序列比较对本实验室保存的耐热强毒株HR09在56℃热浴的环境下进行耐热传代,共传30代(前5代测定了该毒株的耐热极限,后25代对病毒进行105min耐热处理),分别对耐热处理的5代、20代和30代的F、HN基因进行扩增、序列测定及分析,研究病毒在热处理环境下F和HN基因的遗传变异情况。结果显示该毒株耐热极限为56℃ 120min,病毒第5、20和30代的F和HN基因均产生了一些同义和非同义的突变,以第30代毒株产生的突变为多,其中F基因上在第30代产生的同义突变有2个(A1071T、T1320C),非同义突变位点有3个(G311A、A1295T、A1476T),相应的F蛋白上氨基酸突变位点为G104E、K432I、K492N;HN基因第30代产生的核酸位点同义突变有3个(T748C、T1116C、G1122A),非同义突变有2个(T755C、C1368G),相应的HN蛋白氨基酸突变位点为F252S、H456Q。利用SMS在线序列分析工具(http://***/sms)、Megalign 和 MEGA7分析软件,将耐热HR09株第30代F、HN基因序列、HR09原代毒株F、HN基因序列和目前已知的5个耐热株(V4、1-2、NDV4-C、TS09-C、AF2240)及不耐热株LaSota的F和HN基因序列进行比较,结果显示,在核苷酸水平上,耐热株F基因的GC含量均比不耐热株LaSota要高(45.15%/44.46%);除AF2240和HR09两株基因Ⅷ型的耐热强毒株外,耐热株HN基因的GC含量也比不耐热株LaSota要高。经耐热处理传30代的HR09株HN基因的GC含量高于原代毒株(45.69%/45.57%);同源性分析显示,耐热HR09 30代株与原代毒株F、HN基因的同源性均为99.7%;在所有已经发现的耐热毒株中,HR09株与不耐热LaSota株的差异最大;F和HN基因系统进化分析显示,已经发现的耐热株分布在基因Ⅰ型和基因Ⅷ型。在氨基酸水平上,耐热HR09株与不耐热株的F蛋白同源性差异最大(10.90%),在氨基酸组成上,F蛋白的脯氨酸含量以不耐热株高,而HN蛋白的脯氨酸含量以耐热株的高(5.23%/5.00%);耐热毒株HN蛋白中酸性、疏水性氨基酸的含量普遍偏高(酸性氨基酸:7.00%/6.70%,疏水性氨基酸:40.89%/39.00%)。2.F、HN蛋白结构模拟与分析利用 PDB 结构自动模拟软件(https://***/和 https://***/),对HR09原代、HR09耐热处理第30代株、V4株和LaSota的F、HN蛋白分别进行二、三级结构模拟与比较分析。利用VMD、Discovery Studio 2.5等软件进行结构显示与分析。结构模拟结果显示,F、HN蛋白整体结构与同源蛋白模板一致,但存在一些内部结构差异。二级结构预测结果显示,在数量上,F蛋白中螺旋结构和折叠结构与耐热性无关、无规则卷曲含量越低,NDV的耐热性越强;在HN蛋白中螺旋结构也与耐热性无关、折叠结构含量越低、无规则卷曲含量越高,NDV的耐热性越强。就二级结构所处的位置而言,F蛋白34-38aa的螺旋结构,408aa、448-450aa位置的折叠结构,56-57aa、244-245aa之间的无规则卷曲,与NDV耐热性有关;HN

关键词：新城疫病毒耐热株囊膜蛋白基因生物信息学比较嵌合病毒构建

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禽白血病病毒J亚群env基因的克隆和序列分析

禽白血病病毒J亚群env基因的克隆和序列分析

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中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会

作者：秦爱建崔治中 Lucy Lee Aly Fadly 扬州大学兽医系 Avian disease and oncology laboratory USDAEast LansingMI 48823

应用多聚酶链反应（PCR）的方法扩增出ADOL-4817毒株的囊膜蛋白env基因,并克隆进大肠杆菌。经核酸序列分析证明,env基因的大小为1746 bp,其中gp85和gp37由1 554 bp组成,可翻译成517个氨基酸,分子量为57.7 kD。根据糖基化位点N-X-S/T的特... 详细信息

应用多聚酶链反应（PCR）的方法扩增出ADOL-4817毒株的囊膜蛋白env基因,并克隆进大肠杆菌。经核酸序列分析证明,env基因的大小为1746 bp,其中gp85和gp37由1 554 bp组成,可翻译成517个氨基酸,分子量为57.7 kD。根据糖基化位点N-X-S/T的特点,发现ADOL-4817的env蛋白有15个潜在的糖基化位点。同源性分析证明,ADOL-4817的env基因与其它ALV-J的env基因序列同源性为88.8%～92.4%,而与外源性ALVs的相应序列的同源性仅为40.5%～51.4%,然而,与内源性的EAV-HP毒株的类env基因的同源性高达91.2%;另外,ADOL-4817毒株的gp37在C末端多了13个氨基酸。这些结果提示,ALV-J的env基因存在广泛的变异性,env基因可能来源于内源性和外源性ALVs的重组。

关键词：禽白血病病毒囊膜蛋白基因克隆定序

来源： cnki会议评论

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