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绵羊肺腺瘤病毒NM株囊膜基因的定向克隆与融合表达

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中国兽医科技 2005年第3期35卷 177-180页

作者：刘淑英马学恩内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018

　　根据绵羊肺腺瘤病毒(SJRV) NM株基因组全序列,设计了 1 对包含囊膜(env)基因在内的引物,并在5′端分别设计了HindⅢ和 BamHⅠ酶切位点,利用 PCR技术扩增 env基因,通过连接反应将其克隆于pET 30b表达载体上。序列分析表明,env基因全... 详细信息

　　根据绵羊肺腺瘤病毒(SJRV) NM株基因组全序列,设计了 1 对包含囊膜(env)基因在内的引物,并在5′端分别设计了HindⅢ和 BamHⅠ酶切位点,利用 PCR技术扩增 env基因,通过连接反应将其克隆于pET 30b表达载体上。序列分析表明,env基因全长 1 836 bp,编码 612 个氨基酸残基;构建表达重组质粒env pET 30b,转化大肠埃希氏菌 BL21,经 IPTG于 37 ℃诱导培养,SDS PAGE电泳分析表明,表达的env基因融合蛋白分子质量约为69 ku。

关键词：绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因定向克隆融合表达

囊膜基因多样性组成是慢病毒疫苗免疫保护的关键因素

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中国预防兽医学报 2020年第7期42卷 744-744页

作者：作者不详机构不详

马传染性贫血病毒(EIAV)属反转录病毒科慢病毒属成员,主要感染马、驴和骡等马属动物。其引起马属动物呈现发热、贫血、出血、黄疸、消瘦、水肿和心脏衰弱等一系列症状的传染性疾病称为马传染性贫血(EIA),简称为马传贫。EIAV与人类免疫... 详细信息

马传染性贫血病毒(EIAV)属反转录病毒科慢病毒属成员,主要感染马、驴和骡等马属动物。其引起马属动物呈现发热、贫血、出血、黄疸、消瘦、水肿和心脏衰弱等一系列症状的传染性疾病称为马传染性贫血(EIA),简称为马传贫。EIAV与人类免疫缺陷病毒(HIV-1)和猴免疫缺陷病毒(SIV)等慢病毒属成员在病毒基因组结构、复制分子机制、免疫机理及与宿主相互作用等方面都具有相似性。因此,EIAV被认为是研究慢病毒致病机制的重要模型病毒。

关键词：马传染性贫血马属动物免疫保护反转录病毒科免疫机理 EIAV 囊膜基因传染性疾病

全基因组范围内家蚕内源性逆转录病毒特征揭示其囊膜基因的亲缘关系及其活性

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全基因组范围内家蚕内源性逆转录病毒特征揭示其囊膜基因的亲缘关...

猪内源性逆转录病毒在3种不同品系猪中的分布及序列特征研究

中国蚕学会2018年学术年会

作者：冯敏王雄任菲菲张楠周耀红孙京臣华南农业大学动物科学学院

内源性逆转录病毒（Endogenous retroviruses,ERVs）是永久定植在宿主基因组的逆转录病毒片段。它们可能在宿主基因组内发挥重要功能。已经有一些昆虫ERVs被鉴定出来,并被证明具有传染性。然而,到目前为止,还没有家蚕ERVs的相关信息。... 详细信息

内源性逆转录病毒（Endogenous retroviruses,ERVs）是永久定植在宿主基因组的逆转录病毒片段。它们可能在宿主基因组内发挥重要功能。已经有一些昆虫ERVs被鉴定出来,并被证明具有传染性。然而,到目前为止,还没有家蚕ERVs的相关信息。本研究中,我们在家蚕的基因组中系统地鉴定出256个家蚕ERVs。家蚕ERVs在家蚕各染色体中分布相对平均。所有的家蚕ERVs都属于年轻的ERVs,插入基因组的时间预估不超过1千万年。所有的家蚕ERVs中鉴定出7个具有囊膜基因的家蚕ERVs。这些家蚕ERVs的囊膜基因与I型和II型核型多角体病毒的囊膜蛋白编码基因的亲缘关系较远。然而,棉铃虫核型多角体病毒的Orf133基因却与家蚕ERVs的囊膜基因位于一个进化分支上。此外,7个具有囊膜基因的家蚕ERVs中只有BmE RV-21的囊膜蛋白氨基酸序列具有与II型杆状病毒类似的弗林蛋白水解酶位点和融合肽段。进一步检测发现,生物信息学鉴定的家蚕ERVs的囊膜基因在家蚕中肠和脂肪体中都存在,并且有表达。这个结果暗示家蚕ERVs可能在宿主生物学活动中扮演重要角色。

关键词： BmERV BmNPV 囊膜基因

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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中国预防兽医学报 2022年第11期44卷 1141-1148,1168页

作者：冯天悦 Kamal Shah 张文立付利芝李昌文王玉娥陈洪岩东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室/国家禽类实验动物资源库黑龙江哈尔滨150069 重庆市畜牧科学研究院兽医兽药研究所重庆402460

为研究猪内源性逆转录病毒(PERV)在不同猪种中的分布情况、序列结构、遗传变异、表达特性等特征,本研究选取大白猪、荣昌猪、五指山小型猪3种常见猪种为研究对象,分别设计特异性引物,检测各猪种肺组织中PERV 3种亚型(PERV-A、PERV-B、PE... 详细信息

为研究猪内源性逆转录病毒(PERV)在不同猪种中的分布情况、序列结构、遗传变异、表达特性等特征,本研究选取大白猪、荣昌猪、五指山小型猪3种常见猪种为研究对象,分别设计特异性引物,检测各猪种肺组织中PERV 3种亚型(PERV-A、PERV-B、PERV-C)的分布情况。结果显示,PERV在3种猪种中均有分布,其中PERV-A分布最广泛。进一步分段扩增3种猪的PERV-A全基因组序列并测序分析。全基因组序列进化树与囊膜(env)基因进化树分析均显示,东北地区的大白猪与荣昌猪PERV-A归为同一分支,亲缘关系较近;对测序结果进行生物信息学分析和蛋白二级结构预测,结果显示,PERV-A Gag蛋白和Pol蛋白的变异程度较大,有多种结构,但Env蛋白保守性较高,结构较为单一。采用荧光定量PCR法检测SPF大白猪不同组织中的PERV-A,结果显示从SPF大白猪心、肝、脾、肺、肾、扁桃体、淋巴结等7种组织中均检测出PERV-A,且在扁桃体等免疫器官组织中的转录水平最高。本研究共获得了5条不同猪种的PERV-A全基因组序列,首次鉴定了荣昌猪PERV全基因组序列,提示东北地区大白猪的引种来源可能与韩国猪种存在一定同源性,且五指山小型猪与荣昌猪、大白猪亲缘关系较远,有助于PERV分子特性的研究,并为评估不同猪种PERV在异种移植中的安全性并筛选合适猪种提供参考。

关键词：猪内源性逆转录病毒序列分析囊膜基因遗传进化分析

五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因变异特征研究

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中国预防兽医学报 2013年第3期35卷 248-250页

作者：张念马玉媛向思龙贾俊婷吴健敏章金刚吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 军事医学科学院野战输血研究所国家生物医学分析中心/病毒安全检测实验室北京100850 广西壮族自治区兽医研究所广西南宁530001

为分析近交系连续3代次五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因(PERV-env)变异特征,本研究采用PCR方法对该基因进行扩增、克隆和序列测定,将其与参考序列比对和遗传进化分析。序列分析显示:PERV-env核苷酸序列与参考序列之间的同源性为98... 详细信息

为分析近交系连续3代次五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因(PERV-env)变异特征,本研究采用PCR方法对该基因进行扩增、克隆和序列测定,将其与参考序列比对和遗传进化分析。序列分析显示:PERV-env核苷酸序列与参考序列之间的同源性为98.3%～99.3%,具有明显G→A突变,并且偏好发生于GA、GG。进一步分析表明,在PERV-env序列190 bp和1 875 bp位置均有G→A突变发生。PERV-env基因遗传进化树分析表明,五指山来源的PERV与国外小型猪PERV-A亲缘关系较近,但仍存在差异。本实验将有助于PERV分子特性的研究,为进一步开展异种移植中PERV的安全性评价奠定基础。

关键词：近交系五指山小型猪猪内源性反转录病毒囊膜基因 G→A突变

绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因表面蛋白的表达及其单克隆抗体的制备

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中国预防兽医学报 2008年第6期30卷 469-472页

作者：刘霄卉斯日古楞罗军荣周建华马学恩内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150001

在E.coli BL21中诱导表达含有绵羊肺瘤病毒囊膜表面蛋白(SU)重组质粒pGEX-4T-1-SU,表达的GST融合蛋白经纯化后用佐剂乳化,作为抗原免疫BALB/c小鼠,并进行细胞融合、克隆化、ELISA法初步筛选抗SU单抗。最终获得了3株抗SU的单抗,为深入探... 详细信息

在E.coli BL21中诱导表达含有绵羊肺瘤病毒囊膜表面蛋白(SU)重组质粒pGEX-4T-1-SU,表达的GST融合蛋白经纯化后用佐剂乳化,作为抗原免疫BALB/c小鼠,并进行细胞融合、克隆化、ELISA法初步筛选抗SU单抗。最终获得了3株抗SU的单抗,为深入探讨JSRV的分子生物学特性及研制诊断试剂盒打下了基础。

关键词：绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因表面蛋白原核表达单克隆抗体

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马传染性贫血病毒囊膜基因的研究进展

中国生物工程杂志 2004年第7期24卷 23-27页

作者：朱远茂薛飞赵立平相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001

马传染性贫血病毒是反转录病毒科慢病毒属的成员之一 ,不仅与人免疫缺陷病毒具有序列同源性 ,而且与其血清具有交叉反应。马传染性贫血驴白细胞弱毒疫苗是迄今为止唯一研究成功的慢病毒疫苗。在马传贫病毒囊膜基因的研究中有助于弄清其... 详细信息

马传染性贫血病毒是反转录病毒科慢病毒属的成员之一 ,不仅与人免疫缺陷病毒具有序列同源性 ,而且与其血清具有交叉反应。马传染性贫血驴白细胞弱毒疫苗是迄今为止唯一研究成功的慢病毒疫苗。在马传贫病毒囊膜基因的研究中有助于弄清其抗原变异、持续感染和疫苗免疫机理 ,为艾滋病疫苗的研究提供借鉴。对囊膜基因的结构、变异及其在机体免疫应答中的作用进行了讨论。

关键词：马传染性贫血病毒囊膜基因抗原变异反转录病毒科

中国特有小型猪内源性反转录病毒囊膜基因的克隆及进化分析

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中国人兽共患病学报 2006年第10期22卷 925-928页

作者：吴健敏吕茂民陈凤莲谢放潘汉世阳玉彪马玲章金刚军事医学科学院野战输血研究所广西兽医研究所

目的克隆分析中国特有小型猪来源的猪内源性反转录病毒（PERV）囊膜基因（env）。比较不同来源毒株的异同及系统进化关系。方法应用RT-PCR的方法分别从中国实验小型猪、巴马香猪及五指山小型猪外周血淋巴细胞中扩增PERV env基因，克隆... 详细信息

目的克隆分析中国特有小型猪来源的猪内源性反转录病毒（PERV）囊膜基因（env）。比较不同来源毒株的异同及系统进化关系。方法应用RT-PCR的方法分别从中国实验小型猪、巴马香猪及五指山小型猪外周血淋巴细胞中扩增PERV env基因，克隆入T载体后测序；随后以PCR方法对克隆PERV env基因进行分型检测；最后采用DNAsis及DNAstar软件对克隆的env基因和国外毒株env基因进行同源性及系统进化进行分析比较。结果本试验所克隆的3株PERV env基因长度分别为1983bp、1986bp及1968bp，分别编码661、662和656个氨基酸，分型检测均为PERV-A亚型。同源性分析表明：国内这3个分离株env基因与国外来源于不同宿主的PERV-A、B、C亚型env基因的同源性分别在92．8～96．5％、69．4～73．4％及77．5％～80．8％之间。结论 PERV中国株的进化与A、B、C亚型分类有关，与宿主、分布地域关系不大，且PERV—A亚型与C亚型的亲源关系更近于B亚型。

关键词：猪内源性反转录病毒囊膜基因序列分析

单周期复制的马传染性贫血病毒重组疫苗的构建

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中华流行病学杂志 2006年第3期27卷 249-252页

作者：刘相冬王滨有哈尔滨医科大学公共卫生学院 150081

目的构建单周期复制的马传染性贫血病毒(EIAV)重组疫苗。方法将感染性EIAV分子克隆WU57囊膜(env)基因敲除,在pGPT中克隆4个拷贝的Mason Pfizer猴病毒组成性RNA转运因子(CTE),构建重组质粒pGPTC;构建另一表达Env蛋白的重组质粒pTEB,并分... 详细信息

目的构建单周期复制的马传染性贫血病毒(EIAV)重组疫苗。方法将感染性EIAV分子克隆WU57囊膜(env)基因敲除,在pGPT中克隆4个拷贝的Mason Pfizer猴病毒组成性RNA转运因子(CTE),构建重组质粒pGPTC;构建另一表达Env蛋白的重组质粒pTEB,并分别与重组质粒pGPT、pGPTC共转染进入293细胞;以Western blot对转染细胞外培养液进行检测以鉴定病毒粒子的产生;通过免疫荧光分析鉴定感染细胞内病毒蛋白的表达。结果pGPTC/pTEB共转染的细胞外培养液中检测到特异性EIAV病毒蛋白,而pGPT/pTEB共转染的细胞外培养液中没有检测到特异性EIAV病毒蛋白。转染细胞产生的病毒粒子EIAVGPTC感染的原代马肾细胞(EK)内检测到病毒蛋白的表达,而用感染细胞产生的病毒粒子再感染EK细胞,则无病毒蛋白表达。结论Rev/RRE对于病毒结构蛋白的表达是必需的;CTE可以替代Rev蛋白功能辅助EIAV结构蛋白的表达;转染的293细胞产生了EIAV病毒粒子并分泌到胞外培养液中;产生的病毒粒子EIAVGPTC是一复制缺陷的活重组病毒。

关键词：慢病毒疫苗马传染性贫血病毒感染性分子克隆囊膜基因