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嘌呤核苷磷酸化酶活性和外源性透明质酸吸收率对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的研究

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中国医科大学学报 2007年第1期36卷 17-19页

作者：宋少伟刘永锋梁健何三光中国医科大学附属第一医院外科辽宁沈阳110001

目的:探讨嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)活性和外源性透明质酸(HA)吸收率对大鼠肝脏低温保存及常温缺血再灌注损伤的作用。方法:将大鼠肝脏在UW﹑Celsior和HTK3种不同保存液中低温保存16、24h后,用37°CKrebs-Henseleit液连续循环灌注90min,分... 详细信息

目的:探讨嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)活性和外源性透明质酸(HA)吸收率对大鼠肝脏低温保存及常温缺血再灌注损伤的作用。方法:将大鼠肝脏在UW﹑Celsior和HTK3种不同保存液中低温保存16、24h后,用37°CKrebs-Henseleit液连续循环灌注90min,分别于不同灌注时间检测灌洗液中PNP活性和外源性HA吸收率的变化。结果:低温保存16h和24h,UW和Celsior组再灌注60min与15min比较,PNP活性明显增高(P<0.05),而HTK组再灌注30min则显著增高;低温保存16h,UW和Celsior组再灌注60min与15min比较外源性HA吸收率明显下降(P<0.05),而HTK组再灌注30min出现外源性HA吸收率明显下降;低温保存24hUW组再灌注60min外源性HA吸收率明显下降,而Celsior和HTK组30min即出现外源性HA吸收率明显下降。结论:PNP和HA吸收率可作为评价肝脏缺血再灌注损伤的指标。

关键词：嘌呤核苷磷酸化酶透明质酸缺血再灌注损伤大鼠肝脏

杨树嘌昤核苷磷酸化酶Potr. 013G1100700基因功能研究

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杨树嘌昤核苷磷酸化酶Potr. 013G1100700基因功能研究

作者：徐文晶东北林业大学

学位级别：硕士

核苷磷酸化酶(Nucleoside Phosphorylase, NP)广泛存在于动植物器官和微生物中,在细胞核酸代谢尤其是核苷补救途径中起着十分重要的作用,是核苷酸补救合成途径的关键酶。嘌呤核苷磷酸化酶(Purine Nucleoside Phosphorylase, PNP)是核苷... 详细信息

核苷磷酸化酶(Nucleoside Phosphorylase, NP)广泛存在于动植物器官和微生物中,在细胞核酸代谢尤其是核苷补救途径中起着十分重要的作用,是核苷酸补救合成途径的关键酶。嘌呤核苷磷酸化酶(Purine Nucleoside Phosphorylase, PNP)是核苷磷酸化酶家族的一个小亚家族,多年来研究表明,在哺乳动物和细菌中嘌呤核苷磷酸化酶参与核苷代谢,在临床上其缺失会引起多种疾病。然而,嘌呤核苷磷酸化酶在植物中的研究甚少,参与的生理、生化活动报道极少。本研究探讨毛果杨一个嘌呤核苷磷酸化酶Potri.013G100700基因功能,取得的主要研究结果如下：毛果杨Potri.013G100700基因编码区全长CDS序列含999个核苷酸,编码333个氨基酸。同源性检索显示,拟南芥、大豆、小米等不同植物物种均存在其同源基因,结构域分析表明是嘌呤核苷磷酸化酶基因。序列对比显示,该基因编码蛋白的氨基酸在不同的植物物种中存在一定的保守性。半定量RT-PCR分析显示,Potri.013G100700基因在毛果杨韧皮部高丰度转录表达,在老叶、木质部和根中转录水平较低;在毛果杨第1-6茎节、第9茎节、第12茎节中,Potri.013G100700基因均有转录表达,在第1、4、5、6茎节转录水平较高,第9、12茎节转录水平次之,第2、3茎节转录表达最弱。采用融合绿色荧光蛋白(GFP)策略,构建pGWB5-Potri.013G100700植物表达载体,在拟南芥中过量表达Potri.013G100700-GFP;激光共聚焦显微镜分析显示,在转基因拟南芥根组织细胞内具有绿色荧光信号,表明Potri.013G100700-GFP很可能定位于细胞质或细胞内膜系统。通过转化拟南芥获得Potri.013G100700过量表达遗传材料,组织解剖学结合化学染色分析显示,与野生型相比过表达材料茎段细胞形态没有发生变化;然而,Potri.013G100700基因过表达拟南芥材料的根长与野生型拟南芥根长相比变短。这些结果表明,Potri.013G100700基因可能参与或影响根的生长。此外,为了鉴定Potri.013G100700基因在毛果杨中的遗传功能,构建amiRNA-Potri.013G100700载体,并在84K杨中进行过量表达,经半定量RT-PCR鉴定后获得Potri.013G100700转录表达被高效沉默的转基因杨树株系。这为进一步鉴定该基因在杨树中的遗传功能提供遗传材料。

关键词：毛果杨嘌呤核苷磷酸化酶 Potri.013G100700 根长转基因拟南芥

产气肠杆菌中核苷磷酸化酶的诱导及酶法合成阿糖腺苷

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产气肠杆菌中核苷磷酸化酶的诱导及酶法合成阿糖腺苷

心肌缺血预处理对嘌呤释放和嘌呤核苷磷酸化酶活性的影响

2007年全国生化与生物技术药物学术年会

作者：魏晓琨丁庆豹郭勇莉欧伶王昌禄邱蔚然天津科技大学华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室天津科技大学南通秋之友生物科技有限公司

各种核苷及类似物对产气肠杆菌中核苷磷酸化酶的诱导性进行了研究．其中胞苷和胞苷酸对嘌呤核苷磷酸化酶、尿苷磷酸化酶和胸苷磷酸化酶具有较强的诱导作用．经诱导后的产气肠杆菌进行转化阿糖腺苷,效率大幅度提高,反应时间从36小时缩短... 详细信息

各种核苷及类似物对产气肠杆菌中核苷磷酸化酶的诱导性进行了研究．其中胞苷和胞苷酸对嘌呤核苷磷酸化酶、尿苷磷酸化酶和胸苷磷酸化酶具有较强的诱导作用．经诱导后的产气肠杆菌进行转化阿糖腺苷,效率大幅度提高,反应时间从36小时缩短为6小时,但是转化率没有明显变化．

关键词：产气肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶尿苷磷酸化酶胸苷磷酸化酶阿糖腺苷

来源： cnki会议评论

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武警医学院学报 2006年第3期15卷 196-198页

作者：张敏郑梅于公元武警医学院生化教研室天津300162 天津医科大学生化教研室天津300070

【目的】研究心肌缺血预处理对离体大鼠心脏嘌呤代谢与嘌呤核苷磷酸化酶的影响。【方法】将24只大鼠随机分为2组,采用Langendorff离体心脏灌注模型。缺血预处理组心脏经每次3 min缺血+3 min再灌注,循环3次,而后保持持续工作状态10 min;... 详细信息

【目的】研究心肌缺血预处理对离体大鼠心脏嘌呤代谢与嘌呤核苷磷酸化酶的影响。【方法】将24只大鼠随机分为2组,采用Langendorff离体心脏灌注模型。缺血预处理组心脏经每次3 min缺血+3 min再灌注,循环3次,而后保持持续工作状态10 min;对照组心脏保持持续工作状态10 min。使用高效液相色谱技术测定嘌呤代谢产物(尿酸、黄嘌呤、次黄嘌呤、次黄苷)及嘌呤核苷磷酸化酶的活性。比较对照组与缺血预处理组嘌呤碱基的释放速率与嘌呤核苷磷酸化酶的活性。【结果】心肌缺血预处理组嘌呤碱基的释放降低(P嘌呤释放的主要成分;与总嘌呤释放减少相反,次黄苷的释放有所增加(P嘌呤核苷磷酸化酶的活性降低(P嘌呤代谢速率,修饰嘌呤核苷磷酸化酶成为导致次黄苷间接生成增加的原因。

关键词：缺血预处理嘌呤核苷磷酸化酶嘌呤

Prediction of potential antimalarial targets of artemisinin based on protein information from whole genome of Plasmodium falciparum

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Chinese Science Bulletin 2009年第18期54卷 4234-4240页

作者： HAN LiPing HUANG Qiang NAN Peng ZHONG Yang School of Life Sciences and State Key Laboratory of Genetic Engineering Fudan University Shanghai 200433 China Shanghai Center for Bioinformation Technology Shanghai 201203 China

On the basis of the genomic data and protein pathway information about Plasmodium falciparum clone 3D7 from the NCBI taxonomy database and the KEGG database, eight key protein enzymes in the signal pathways were selected to perform molecular docking with artemisinin. The binding modes obtained from the molecular docking suggested that purine nucleoside phosphorylase (pfPNP), peptide deformylase (pfPDF), and ribose 5-phosphate isomerase (pfRpiA) may be involved in the antimalarial mode of action of artemisinin. Artemisinin exhibited its antimalarial activity probably by interfering with the metabolic pathways of purine, pyrimidine, methionine, glyoxylate and dicarboxylate, or pentose phosphate.

关键词：基因组信息青蒿素蛋白质抗疟药疟原虫嘌呤核苷磷酸化酶目标预测基础

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重组枯草芽孢杆菌全细胞催化高效合成2′-脱氧腺苷

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精细化工 2023年第11期40卷 2436-2444页

作者：陈伟陈令伟李文超郑玲辉杭州珲益生物科技有限公司浙江杭州310011 天津科技大学生物工程学院天津300457

以枯草芽孢杆菌168(简写为BS)为宿主,以脱氧胸苷和腺嘌呤为底物,异源表达组合来源于大肠杆菌(***)的嘧啶核苷磷酸化酶(PyNP)与嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)作为催化酶源,全细胞催化合成2′-脱氧腺苷(dA)。首先,以BS敲除内源性的PNP(由基因deo... 详细信息

以枯草芽孢杆菌168(简写为BS)为宿主,以脱氧胸苷和腺嘌呤为底物,异源表达组合来源于大肠杆菌(***)的嘧啶核苷磷酸化酶(PyNP)与嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)作为催化酶源,全细胞催化合成2′-脱氧腺苷(dA)。首先,以BS敲除内源性的PNP(由基因deoD编码,Gene ID:940038)后的菌株BS0为出发菌株,经过PyNP1酶(来源于***,Gene ID:948901)与PNP3酶(来源于***,Gene ID:945654)的重组表达得到CW3,再优化PyNP1与PNP3的对核糖体结合位点(RBS)序列得到重组菌株CW3-3,在CW3-3作用下,dA的产量为133.4 g/L,脱氧胸苷的转化率为64.3%;其次,以CW3-3为出发菌株,利用互作短肽构建自组装多酶复合物,经过PyNP1酶N端融合RIAD,PNP3酶C端融合RIDD(其中RIAD和RIDD为互作短肽标签)处理后,PyNP1酶N端融合4个RIAD标签得到重组菌株CW17,在其作用下,dA的产量达到179.6 g/L,显著提升了底物转化率;最后,对重组菌株CW17全细胞催化条件细胞添加质量浓度及催化反应温度进行了优化,在细胞添加质量浓度为150g/L,反应温度50℃条件下,dA的产量达到200.3g/L,脱氧胸苷的转化率为96.6%。

关键词： 2′-脱氧腺苷嘧啶核苷磷酸化酶嘌呤核苷磷酸化酶互作短肽枯草芽孢杆菌全细胞催化生物工程

加味四妙丸有效部位群抗高尿酸血症作用及其机制

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中国药理学与毒理学杂志 2014年第3期28卷 380-385页

作者：潘红英时乐徐立尹莲曾宛平张光际杨凡南京中医药大学药物安全性评价中心江苏南京210023 南京中医药大学药学院临床药学系江苏南京210023

目的探讨加味四妙丸(MSW)有效部位群(EFC)对高尿酸血症大鼠血清尿酸水平的影响及其作用机制。方法采用由次黄嘌呤和尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾制备持续性大鼠高尿酸血症模型,记录每日摄食量,收集末次造模后12 h尿液,ig给予模型大鼠MSW 50 g·... 详细信息

目的探讨加味四妙丸(MSW)有效部位群(EFC)对高尿酸血症大鼠血清尿酸水平的影响及其作用机制。方法采用由次黄嘌呤和尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾制备持续性大鼠高尿酸血症模型,记录每日摄食量,收集末次造模后12 h尿液,ig给予模型大鼠MSW 50 g·kg-1以及EFC 12.5,25和50 g·kg-1,连续5 d;采用尿酸排泄抑制剂烟酸制备高尿酸血症模型,ig给予模型大鼠MSW 50 g·kg-1以及EFC50 g·kg-1,连续3 d。末次给药后,取血和肝组织。全自动生化仪检测大鼠血清和尿液中尿酸水平,酶比色法测定血清、肝组织中黄嘌呤氧化酶(XOD)、分光光度法检测红细胞、肝组织中嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)和尿酸酶等活性。结果与正常对照组相比,2种高尿酸血症模型大鼠血清尿酸水平均明显升高(P酶活性(P酶活性促进尿酸分解有关。

关键词：加味四妙方中草药提取物高尿酸血症黄嘌呤氧化酶嘌呤核苷磷酸化酶尿酸酶

Klac PNP基因密码子优化及在枯草芽胞杆菌中的高效表达

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食品与发酵工业 2023年第19期49卷 53-59页

作者：赵越王新秀吴思陈作慧张会惠觅宙李杰双宝东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150006

嘌呤核苷磷酸化酶(purine nucleoside phosphorylase,PNP)是嘌呤补救合成途径中的关键酶,嘌呤降解途径涉及氧化嘌呤环裂解,在人体中形成尿酸作为最终产物,增加患痛风的风险。为提高PNP的发酵水平,将来源于乳酸克鲁维酵母的PNP基因进行... 详细信息

嘌呤核苷磷酸化酶(purine nucleoside phosphorylase,PNP)是嘌呤补救合成途径中的关键酶,嘌呤降解途径涉及氧化嘌呤环裂解,在人体中形成尿酸作为最终产物,增加患痛风的风险。为提高PNP的发酵水平,将来源于乳酸克鲁维酵母的PNP基因进行密码子优化,分别将优化前后的目的PNP基因连接至分泌表达载体pBSA43,并在枯草芽胞杆菌WB600中重组表达PNP-YP-pBSA43、PNP-YO-pBSA43。结果显示,密码子优化前的酶活力为333.69 U/mL,优化后的酶活力达到351.61 U/mL。为进一步提高重组蛋白表达量,通过响应面分析得出优化后重组菌株产PNP的最佳发酵条件为初始pH为6.67、发酵时间55 h、发酵温度28.7℃。在该条件下,重组PNP活力为372.79 U/mL,相比未优化前提高了12%。来源于乳酸克鲁维酵母的PNP基因经密码子优化后重组表达,酶活力显著提高,对PNP在枯草芽胞杆菌中高效表达奠定了基础。

关键词：嘌呤核苷磷酸化酶枯草芽胞杆菌密码子优化异源表达响应面分析

基因工程菌酶法合成抗癌新药6-甲基嘌呤-2′-脱氧核苷

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工业微生物 2007年第1期37卷 8-13页

作者：高彤李文舟梁胜华李晓晖任大明霍旭辉刘万峰乔宾福复旦大学遗传所遗传工程国家重点实验室上海200433 珍奥集团股份有限公司生物工程研究所大连116620

6-甲基嘌呤-2′-脱氧核苷(MePdR)是一种新型抗癌药物,它作为药物前体应用于PNP自杀基因治疗系统可以选择性杀伤肿瘤细胞。本实验构建了一个高效表达大肠杆菌来源的嘌呤核苷磷酸化酶重组质粒,并利用基因工程菌以15mmol/L 6-甲基嘌呤和60m... 详细信息

6-甲基嘌呤-2′-脱氧核苷(MePdR)是一种新型抗癌药物,它作为药物前体应用于PNP自杀基因治疗系统可以选择性杀伤肿瘤细胞。本实验构建了一个高效表达大肠杆菌来源的嘌呤核苷磷酸化酶重组质粒,并利用基因工程菌以15mmol/L 6-甲基嘌呤和60mmol/L 2′-脱氧尿苷为底物合成6-甲基嘌呤-2′-脱氧核苷,在40mmol/L pH7.0的磷酸缓冲液中,2%菌体在55℃反应2h,转化率可达83.78%。用硅胶制备薄层提纯得到白色针状晶体,收率为76.4%。HPLC测定该产物纯度99.3%,核磁共振鉴定该产物为MePdR。

关键词：嘌呤核苷磷酸化酶工程菌酶法合成 6-甲基嘌呤-2′-脱氧核苷