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一株耐酸碱嗜热产甲烷菌的分离与系统发育分析

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太阳能学报 2010年第10期31卷 1251-1256页

作者：胡亚东袁月祥闫志英廖银章刘晓风贺蓉娜张洪森官家发朱联碧中国科学院成都生物研究所成都610041 北京合百意生态能源科技开发有限公司北京100073 四川省大竹县环境监测站大竹635100

从垃圾填埋场分离得到一株嗜热产甲烷菌RY3。该菌株具有优良的耐酸碱性能,其生长pH范围为5.5～10.5,最适生长pH为6.0～8.0。菌株RY3为革兰氏阳性,长杆状,多数单生,不运动;菌落浅黄色,形状近圆形;利用H_2+CO_2或甲酸盐作为唯一碳源生长,... 详细信息

从垃圾填埋场分离得到一株嗜热产甲烷菌RY3。该菌株具有优良的耐酸碱性能,其生长pH范围为5.5～10.5,最适生长pH为6.0～8.0。菌株RY3为革兰氏阳性,长杆状,多数单生,不运动;菌落浅黄色,形状近圆形;利用H_2+CO_2或甲酸盐作为唯一碳源生长,不利用乙酸盐,对氯霉素非常敏感。该菌最适生长温度为55～65℃,最适NaCl浓度为0～2%。根据形态和生理生化特性及16S rDNA序列分析将其初步定为Methanothermobacter thermautotrophicus。添加RY3菌液与仅添加厌氧污泥作为接种物相比一周内可使达到最大产甲烷速率所需时间缩短2/3,甲烷总产量提高约1.8倍。

关键词：嗜热产甲烷菌耐酸碱系统发育分析

嗜热脂肪芽孢杆菌α—淀粉酶基因的结构分析以及高产研究

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工业微生物 1993年第2期23卷 1-7页

作者：许尤峰王信浩

嗜热和非嗜热Crenarchaeota的生物多样性及演化意义

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高校地质学报 2005年第2期11卷 207-216页

作者：黄志勇王意敏张传伦 Savannah River Ecology Laboratory University of Georgia Aiken SC 298032 USA

Crenarchaeota,Euryarchaeata和Korarchaeota组成古菌中3个领域。Euryarchaeota是原核生物中重要的种群,得到了很好的研究,而Crenarchaeota和Korarchaeota直到最近才逐渐受到关注。古菌的生态和演化研究都属于Crenarchaeota领域。一个很重要的观点就是Crenarchaeota的所有独立种群都是极端嗜热的,非嗜热Crenarchaeota目前为止还没有分离出来。嗜热Crenarchaeota主要是在深海热烟囱和陆地热泉中发现的,特征是高温(>80℃)和低pH值(嗜热Crenarchaeota化能自养可以利用还原性无机化合物,例如H2和还原性硫。这个特性连同生命树群的深入分支说明生命最后共同的祖先可能是在热液体系中的嗜热自养生物。非嗜热Crenarchaeota和嗜热Crenarchaeota有很近似的系统关系。尽管一般情况下非嗜热Crenarchaeota是不可以培养的,但是其对敞开体系海相、陆相土壤、湖泊和地下的中低温环境的适应性日益增强。这主要取决于独立培养分子学技术的发展,例如16SrRNA基因序列。此外,海洋和土壤中非嗜热Crenarchaeota的研究还表明,非嗜热Crenarchaeota确定组成在碳循环的生物地球化学循环中起着非常重要的作用。

关键词：嗜热非嗜热 Crenarchaeota 生物演化生物多样性

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嗜热纤维素分解菌的筛选及混合发酵研究

江苏农业科学 2010年第3期38卷 394-396页

作者：宫玉胜李玉成吴旺宝刘珊垚安徽大学生命科学学院安徽合肥230039

从高温阶段堆肥样品、腐熟肥料、牛粪和土壤等含有纤维素降解菌的样品中筛选出145株能较好降解纤维素的菌株,对它们进行了单独与混合发酵培养。经过初筛、复筛,选出降解纤维素能力较强的8株菌株,包括细菌3株、霉菌3株、放线菌2株。将各... 详细信息

从高温阶段堆肥样品、腐熟肥料、牛粪和土壤等含有纤维素降解菌的样品中筛选出145株能较好降解纤维素的菌株,对它们进行了单独与混合发酵培养。经过初筛、复筛,选出降解纤维素能力较强的8株菌株,包括细菌3株、霉菌3株、放线菌2株。将各菌株按不同的接种比例混合培养,构建了6组由3株细菌、3株霉菌、2株放线菌组成的复合微生物菌系,采用液体发酵培养、固体发酵培养、滤纸条失重试验对复合菌系进行研究。综合分析表明,组合2分解纤维素能力明显强于其他几个组合,且复合菌系中不同微生物及其产生的纤维素酶之间有协同作用,考虑到固体发酵和堆肥的发酵条件接近,组合2更适合作为堆肥菌剂。

关键词：纤维素分解菌堆肥嗜热发酵酶活

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一株提高原油采收率嗜热菌株的性能评价

石油钻采工艺 2006年第2期28卷 46-48,51页

作者：张瀚奭段传慧高光军程海鹰王静张前前中国海洋大学海洋化学化工学院山东青岛266003 胜利油田有限公司采油工艺研究院山东东营257000

从胜利油田产出液中分离得到一株嗜热菌NA-3。经鉴定为芽胞杆菌属。该菌为[艹卓]兰氏阳性，杆状，兼性厌氧，有运动性，茼体大小为（0．5～0．8）μm×（1．4～2．5）μm。最适生长温度为70℃，最适生长pH为7．0～8．0，耐受矿化度可达... 详细信息

从胜利油田产出液中分离得到一株嗜热菌NA-3。经鉴定为芽胞杆菌属。该菌为[艹卓]兰氏阳性，杆状，兼性厌氧，有运动性，茼体大小为（0．5～0．8）μm×（1．4～2．5）μm。最适生长温度为70℃，最适生长pH为7．0～8．0，耐受矿化度可达10g／L。能产酸和生物表面活性剂。可使培养液的表面张力从72mN／m降至34mN／m。pH值从7．0降至5．2。试验表明，NA-3菌液在物理模拟条件下经多轮次驱替仍能提高采收率，微生物提高采收率累计可达11～15个百分点。在微生物采油方面将有很好应用前景。

关键词：微生物采油嗜热兼性厌氧菌性能评价室内试验

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嗜热产甲烷杆菌YT—7菌株的分离和特征

山东大学学报（自然科学版） 1990年第2期25卷 242-249页

作者：郑士民徐海岩山东大学微生物研究所

采用严格的 Hungate 厌氧技术,从云南省腾冲高温温泉污泥样品中分离一株嗜热自养产甲烷杆菌 YT-7菌株。该菌株细胞呈长杆状,不运动,不形成芽孢,革兰氏染色阳性。在65—70℃下培养时菌体为0.3-0.4×1.5-13μm。分离物仅能利用 H_2/CO_2... 详细信息

采用严格的 Hungate 厌氧技术,从云南省腾冲高温温泉污泥样品中分离一株嗜热自养产甲烷杆菌 YT-7菌株。该菌株细胞呈长杆状,不运动,不形成芽孢,革兰氏染色阳性。在65—70℃下培养时菌体为0.3-0.4×1.5-13μm。分离物仅能利用 H_2/CO_2为能源和碳源,在无机盐液体培养基中生长,细胞最小倍增时间为3.2小时。滚管菌落呈灰白色,半透明,近圆形;落射荧光显微镜检查呈蓝绿色或黄绿色荧光。YT-7菌株的最适生长温度为65—70℃,低于45℃或高于75℃不生长。最适生长 pH 为6.5—7.0。根据形态和生理性状的研究,分离物暂定嗜热自养产甲烷杆菌 YT-7(Methanobacterium thermoautotrophicumYT-7)。

关键词：产甲烷杆菌嗜热菌株分离温泉

嗜热菌Thermus thermophilus半乳糖激酶Tth0825的克隆、表达、纯化及催化特性分析

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嗜热菌Thermus thermophilus半乳糖激酶Tth0825的克隆、表达、纯...

作者：赵霞吉林大学

学位级别：硕士

背景和目的:半乳糖激酶是一种磷酸转移酶,以一分子腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)为磷酸基团供体催化α-D-半乳糖磷酸化生成半乳糖1-磷酸和腺嘌呤核苷二磷酸(ADP)。半乳糖激酶在体内的功能是参于β-D-半乳糖向1-磷酸葡萄糖的分解代谢。半乳糖激... 详细信息

背景和目的:半乳糖激酶是一种磷酸转移酶,以一分子腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)为磷酸基团供体催化α-D-半乳糖磷酸化生成半乳糖1-磷酸和腺嘌呤核苷二磷酸(ADP)。半乳糖激酶在体内的功能是参于β-D-半乳糖向1-磷酸葡萄糖的分解代谢。半乳糖激酶首先从哺乳动物肝脏中分离出来,并且广泛存在于酵母,古细菌和植物中。实验方法:以Thermus thermophilus JCM10941基因组为模板,通过PCR完成对tth0825基因的扩增,以pET28a为载体,构建重组质粒pET28a-tth0825,采用E.coli Transetta(DE3)作为宿主菌表达重组蛋白,经过镍柱亲和层析获得纯化蛋白,纯化后的蛋白再进行催化性质分析。结果:通过PCR方法成功获得了基因序列,并成功构建了重组质粒pET28a-tth0825,表达菌Transetta-28a-tth0825成功表达了大小约39.5kDa的蛋白。经过性质表征,半乳糖激酶Tth0825的最适温度为70℃,最适pH值为9.5,最佳金属离子为Mg,半乳糖激酶Tth0825催化D-半乳糖反应转化率为60%左右。结论:本实验成功构建了重组质粒pET28a-tth0825,并在大肠杆菌表达体系中成功表达,经过镍柱亲和层析纯化后得到纯蛋白,半乳糖激酶表现出良好的热稳定性和催化活性。

关键词：半乳糖激酶嗜热克隆表达纯化

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嗜热β-半乳糖苷酶ST0773的表达探索

嗜热β-半乳糖苷酶ST0773的表达探索

作者：赵胜峰吉林大学

学位级别：硕士

β-半乳糖苷酶可以催化糖苷类化合物的合成，解决乳糖不耐受症以及作为酶类药物，对新生儿消化不良等方面具有重要的作用。本文采用生物信息学方法推测来自嗜热古细菌Sulfolobus Tokodaii strain 7基因组中的ORF0773为编码β-半乳糖苷... 详细信息

β-半乳糖苷酶可以催化糖苷类化合物的合成，解决乳糖不耐受症以及作为酶类药物，对新生儿消化不良等方面具有重要的作用。本文采用生物信息学方法推测来自嗜热古细菌Sulfolobus Tokodaii strain 7基因组中的ORF0773为编码β-半乳糖苷酶的基因，构建了ST0773的大肠杆菌工程菌并对其可溶表达进行了初步的探索。首先培养古细菌并提取其基因组，设计引物并成功扩增出 ST0773基因，将其连接到pET-28b质粒上，转入E.coli BL21（DE3）中进行表达。然后分别在20℃、30℃和37℃条件下诱导目的蛋白表达，经SDS-PAGE检测，上清中目的蛋白表达量比较低，大部分以沉淀的形式存在。鉴于该酶氨基酸序列中含有12%的稀有密码子，我们将其转入E.coli BL21（DE3）CondonPlus-RIL宿主细胞中，进行不同温度和不同IPTG浓度的诱导表达，但是大部分目的蛋白仍然是以沉淀的形式存在，从沉淀蛋白电泳图来看，表达量有明显的提高。为克服包涵体的形成，构建了三种重组表达载体pET-15b-0773、pET-32a-0773和pHUE-0773，转入E.coli BL21（DE3）CondonPlus-RIL中诱导表达，发现目的蛋白绝大部分仍然是以沉淀的形式存在。结果表明，β-半乳糖苷酶ST0773在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达，硫氧还蛋白融合表达和泛素融合表达也不能改善包涵体的形成。

关键词： β-半乳糖苷酶嗜热表达

红树林生境产嗜热纤维素酶芽孢杆菌的筛选及其活性分析

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应用海洋学学报 2020年第3期39卷 352-358页

作者：胡芮孙晓晖杨淼森唐旭徐长安贾若琨东北电力大学化学工程学院吉林吉林132000 自然资源部第三海洋研究所福建厦门361005

本研究从红树林沉积物样品中筛选获得一株具有较高纤维素酶活性的菌株ms-2,通过革兰氏染色、生理生化试验,以及16S rDNA基因片段比对鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ms-2。对其产酶性质进行研究表明该菌株所产纤维素酶为... 详细信息

本研究从红树林沉积物样品中筛选获得一株具有较高纤维素酶活性的菌株ms-2,通过革兰氏染色、生理生化试验,以及16S rDNA基因片段比对鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ms-2。对其产酶性质进行研究表明该菌株所产纤维素酶为胞外酶而非膜锚定酶,该酶具有良好的嗜热性,且在弱酸条件下酶活性较高,最适宜温度和pH分别为65℃和6.0,在此条件下最高酶活性为0.6557 U/cm^3;另外,在浓度为1 mmol/dm^3 Cu^2+、Mg^2+、Zn^2+、Fe^3+和Mn^2+条件下,Cu^2+对酶活性无显著影响,Mg^2+、Zn^2+、Fe^3+和Mn2+对酶活性均有不同程度的抑制作用,其中Mn2+的抑制最为明显,酶活性下降了29.96%。由于产业应用中酶解纤维素时通常需要在55~60℃的温度下进行,研究获得的嗜热纤维素酶不仅适合这样的温度环境,还能维持较高的酶活性水平,并且对Cu^2+、Mg^2+、Zn^2+、Fe^3+较不敏感,有利于产业开发应用。

关键词：海洋生物学筛选鉴定枯草芽孢杆菌纤维素酶嗜热