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唾液酸化和岩藻糖基化在卵巢癌中的研究进展

现代肿瘤医学 2023年第3期31卷 561-566页

作者：蒲从丽赵迎超华中科技大学同济医学院附属协和医院湖北武汉430000

糖基化是翻译后修饰最重要的方式之一,在生理情况下参与机体的细胞黏附、信号转导、免疫调节等各项生命活动。卵巢癌是继乳腺癌、宫颈癌后威胁女性生殖健康的第三大恶性肿瘤,其发生发展伴随异常糖基化修饰。异常的糖基化与肿瘤生长、逃... 详细信息

糖基化是翻译后修饰最重要的方式之一,在生理情况下参与机体的细胞黏附、信号转导、免疫调节等各项生命活动。卵巢癌是继乳腺癌、宫颈癌后威胁女性生殖健康的第三大恶性肿瘤,其发生发展伴随异常糖基化修饰。异常的糖基化与肿瘤生长、逃避细胞凋亡、侵袭迁移及治疗抵抗等密切相关,其中唾液酸化和岩藻糖基化表达上调是最常见的异常糖基化修饰类型,本文通过阐释卵巢癌中异常唾液酸化和岩藻糖基化的研究进展,发现其对促进卵巢癌的早期诊断、预测预后、靶向治疗等具有重要临床意义。

关键词：唾液酸化岩藻糖基化卵巢癌

TNF-α通过唾液酸化促进小鼠破骨细胞分化

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南方医科大学学报 2021年第12期41卷 1773-1779页

作者：李夏林张维新华中科技大学协和深圳医院脊柱外科广东深圳518052 浙江中医药大学第一临床医学院浙江杭州310059

目的探究TNF-α促进破骨细胞分化的作用机制。方法利用4月龄野生型小鼠与同龄TNF-α转基因鼠进行体内研究,分别收集双侧膝骨关节样本后,进行CT扫描分析骨量差异,TRAP染色及免疫荧光染色分析破骨细胞分化程度及唾液酸表达水平。体外培养... 详细信息

目的探究TNF-α促进破骨细胞分化的作用机制。方法利用4月龄野生型小鼠与同龄TNF-α转基因鼠进行体内研究,分别收集双侧膝骨关节样本后,进行CT扫描分析骨量差异,TRAP染色及免疫荧光染色分析破骨细胞分化程度及唾液酸表达水平。体外培养破骨细胞前体细胞系RAW264.7分为3组:RAW对照组(不含药物的分化培养基处理);RAW实验组(含有TNF-α的分化培养基处理);RAW药物组(含有TNF-α和唾液酸酶的分化培养基处理)。体外培养3 d后进行qPCR检测,TRAP染色,唾液酸免疫荧光共定位染色分析。同时,分离培养野生型小鼠(BM对照组)和TNF-α转基因鼠[BM实验组(不含药物的分化培养基处理),BM药物组(含有唾液酸酶的分化培养基处理)]原代骨髓源巨噬细胞,3 d后进行TRAP染色及唾液酸染色。结果TRAP染色显示,TNF-α转基因鼠膝关节软骨下骨中破骨细胞数量较野生型小鼠显著增多(P唾液酸与TRAP荧光共定位阳性细胞数也显著高于野生型小鼠(P=0.004)。RAW实验组唾液酸表达平均荧光强度(P唾液酸表达平均荧光强度、破骨细胞形成率以及TRAP基因转录水平显著低于RAW实验组(P唾液酸表达平均荧光强度、破骨细胞形成率均显著提高(P唾液酸表达平均荧光强度、破骨细胞形成率均显著降低(P唾液酸化水平进而促进破骨细胞的分化和功能。

关键词： TNF-α 唾液酸化破骨细胞

白血病患者血浆触珠蛋白-β链糖链唾液酸化与预后关系初探

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基础医学与临床 2012年第11期32卷 1269-1274页

作者：辛玲刘辉李智立中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院北京100005

目的探究白血病患者预后与血浆触珠蛋白-β链糖链唾液酸化之间的关系。方法富集分离正常人及白血病患者不同治疗时间点血浆中触珠蛋白-β链,胶内胰蛋白酶及蛋白酶K双酶切,利用液质联用技术在线富集分离糖肽,以m/z 1 045(3+)及m/z 948(2+... 详细信息

目的探究白血病患者预后与血浆触珠蛋白-β链糖链唾液酸化之间的关系。方法富集分离正常人及白血病患者不同治疗时间点血浆中触珠蛋白-β链,胶内胰蛋白酶及蛋白酶K双酶切,利用液质联用技术在线富集分离糖肽,以m/z 1 045(3+)及m/z 948(2+)的唾液酸化糖肽相对峰强度定量分析唾液酸化程度,分析糖链丰度的变化。结果白血病患者血浆触珠蛋白-β链糖链唾液酸化程度远高于正常人水平,重症患者尤为明显;在治疗好转后,唾液酸化水平逐渐降低接近于正常水平。结论触珠蛋白-β链的变化趋势及其糖链唾液酸化程度的变化能反映白血病患者治疗过程中机体状态、疾病转归及预后。

关键词：触珠蛋白-β链唾液酸化白血病

唾液酸化TF抗原及其氟代衍生物的化学酶法合成

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唾液酸化TF抗原及其氟代衍生物的化学酶法合成

作者：苏超天津科技大学

学位级别：硕士

肿瘤相关糖抗原(Tumor-associated carbogydrate antigens,TACAs)是肿瘤细胞表面重要标记分子,也是抗肿瘤疫苗研究发展的热点。近年来,随着人们对TACAs的认识更加深入,逐步认识到通过化学合成的方法进行肿瘤疫苗设计的重要性。因此获得... 详细信息

肿瘤相关糖抗原(Tumor-associated carbogydrate antigens,TACAs)是肿瘤细胞表面重要标记分子,也是抗肿瘤疫苗研究发展的热点。近年来,随着人们对TACAs的认识更加深入,逐步认识到通过化学合成的方法进行肿瘤疫苗设计的重要性。因此获得结构稳定的肿瘤相关糖抗原,对于其生物活性研究、抗肿瘤疫苗的研发至关重要。其中,Thomsen-Friedenreich(TF)抗原是一种包含半乳糖、N-乙酰氨基半乳糖残基(GalNAc)的二糖,,其中GalNAcα-可以通过氧苷键或是氮苷键与粘蛋白的丝氨酸或苏氨酸残基相连。TF-Ag是一个非常重要的肿瘤靶点,因为它在乳腺癌、结肠癌、膀胱癌、前列腺癌、肝脏和胃癌中都有过量表达,由TF-Ag介导的细胞粘附在转移中起着重要作用,它能够刺激机体产生体液免疫,从而杀死肿瘤细胞,而且还可以阻断肿瘤细胞的扩散能力。以TF-Ag为靶标的肿瘤疫苗的首次研究是由Georg Spillier小组在1995发表的。然而,由于天然的Tn、sTn、TF等抗原免疫耐受、免疫原性弱,不能刺激机体产生强烈的免疫应答反应,为了解决这个问题,国内外研究者们开始对天然肿瘤相关糖抗原结构进行修饰、改造。研究结果表明,F原子的引入可以很好的提高肿瘤糖疫苗的免疫原性。虽然氟代修饰的TACAs能很好的改善其本身的免疫原性,但是其化学合成存在着操作复杂、条件苛刻、收率低等问题。因此我们需要寻求一种新的策略,便于大量获取氟代TF抗原,进一步用于活性研究。本文成功开展了一个以重组大肠杆菌来源的CMP-唾液酸合成酶和醛缩酶和来自于多杀性巴氏杆菌来源的唾液酸转移酶PmST1催化的“一釜三酶”反应策略。这一反应策略能够高效、高选择性的大量合成TF抗原及其氟代衍生物。首先,以半乳糖氨基盐酸盐为起始反应物,通过化学法合成还原端连有丙基叠氮、3-位OH裸露的半乳糖苷作为为受体,以C-6氟原子取代的全乙酰半乳糖亚胺酯为供体,经过糖苷化反应和保护基脱除得到TF、6-F-TF抗原;其次,我们以ManNAc为原料,在其C-2位或 C-6 位进行结构修饰,分别得到 ManGc、ManNHTFA、6-F-ManNAc、6-N3-ManNAc等单糖砌块,作为应用“一釜三酶”体系合成的前体化合物;随后,利用成功发展的“一釜三酶”的合成策略,快速、高效的大量合成sTF抗原、sTF衍生物及其内酯化合物,并对氟代糖展开了稳定性研究:最后,通过方酸化学将寡糖与牛血清白蛋白结合,成功的得到系列寡糖-BSA糖蛋白缀合物,以便于后期活性研究。本课题取得的主要成果包括以下几个方面:(1)成功的利用“一釜三酶”体系大量合成了唾液酸化TF抗原以及氟代衍生物。(2)首次创新性的利用化学法成功的合成了含有内酯结构的唾液酸化TF抗原及其氟代衍生物的,此法能够锁定三糖底物中可以自由旋转的Neu5Acα2-3Gal二糖单元,为进一步研究在三糖水平上唾液酸转移酶的底物适应性提供了基础。(3)成功的以氟代sTF抗原稳定性为研究目标,在唾液酸糖苷酶水解的作用下,展开了对氟原子的引入对唾液酸糖苷键稳定性影响的评价,总结构效关系规律,为肿瘤糖疫苗的制备提供基础。(4)利用方酸化学,通过Linker将氟代sTF与BSA蛋白相连,从而得到糖蛋白缀合物,为后期进行免疫原性测试以及抗体识别交叉反应提供了基础。

关键词：肿瘤相关糖抗原(TACAs) Thomsen-Friedenreich抗原(T或TF抗原) 唾液酸化化学酶法合成氟代寡糖

黏附分子CD44V6与唾液酸化Lewis-X抗原在宫颈癌组织中的表达及意义

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中国实用妇科与产科杂志 2004年第11期20卷 670-672页

作者：王祥珍孙显斌许燕云广东医学院附属医院妇产科湛江524001 广东医学院附属医院病理科湛江52400

目的　探讨黏附分子CD4 4V6与唾液酸化Lewis X(SLeX)抗原在宫颈癌组织中的表达及其意义。方法　 1 994年 1月至 1 999年 1月采用免疫组织化学法 (SP法 )检测CD4 4V6与SLeX在 30例正常宫颈组织及 82例宫颈癌组织中的表达。结果　正常宫... 详细信息

目的　探讨黏附分子CD4 4V6与唾液酸化Lewis X(SLeX)抗原在宫颈癌组织中的表达及其意义。方法　 1 994年 1月至 1 999年 1月采用免疫组织化学法 (SP法 )检测CD4 4V6与SLeX在 30例正常宫颈组织及 82例宫颈癌组织中的表达。结果　正常宫颈组织CD4 4V6与SLeX均呈阴性表达。 82例宫颈癌组织中CD4 4V6与SLeX的阳性表达率分别为 6 4 6 %(5 3/ 82 )及 6 3 4 %(5 2 / 82 )。CD4 4V6与SLeX的阳性表达与宫颈癌的病灶大小、临床分期、细胞分化程度、转移及预后有关 (P 0 0 5 )。结论　CD4 4V6与SLeX的表达与宫颈癌的生长、浸润及转移密切相关 ,可作为反映宫颈癌恶性潜能及判断患者预后的新指标。

关键词：黏附分子 CD44V6 唾液酸化 Lewis-X抗原宫颈癌

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气道黏蛋白唾液酸化的研究进展

中华内科杂志 2007年第4期46卷 339-341页

作者：黄勇钱桂生第三军医大学新桥医院全军呼吸疾病研究所重庆400037

气道黏蛋白是上皮细胞、黏膜下腺体细胞及肿瘤细胞产生的分泌型或膜结合型O-糖基化大分子蛋白。结构呈高度多样性，相对分子质量差异大，可高达数百到数千千道尔顿，糖链包绕在蛋白核心外面，所占比例约50％～90％。黏蛋白是气道先天性... 详细信息

气道黏蛋白是上皮细胞、黏膜下腺体细胞及肿瘤细胞产生的分泌型或膜结合型O-糖基化大分子蛋白。结构呈高度多样性，相对分子质量差异大，可高达数百到数千千道尔顿，糖链包绕在蛋白核心外面，所占比例约50％～90％。黏蛋白是气道先天性防御系统的重要组成部分，除保护、润滑外，还可介导细胞与细胞、信号分子及其他外源性物质间的相互作用。

关键词：气道黏蛋白唾液酸化大分子蛋白上皮细胞 O-糖基化外源性物质膜结合型肿瘤细胞

肝细胞癌唾液酸化的路易斯寡糖-X抗原和E-上皮钙粘蛋白的表达及其意义

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基础医学与临床 2003年第2期23卷 178-181页

作者：谷化平尚培中倪灿荣解放军第251医院病理科上海075000 解放军第251医院普外科张家口075000 第二军医大学长海医院病理科上海200433

探讨唾液酸化的路易斯寡糖 X抗原 (sialylLewis X ,SLeX)和E 上皮钙粘蛋白 (E cadherin ,ED)表达与肝细胞癌(HCC)转移和预后的关系。应用免疫组织化学方法 ,检测分析 110例HCC组织中SLeX及ED蛋白表达 ,结合随访资料分析。结果显示 ,在... 详细信息

探讨唾液酸化的路易斯寡糖 X抗原 (sialylLewis X ,SLeX)和E 上皮钙粘蛋白 (E cadherin ,ED)表达与肝细胞癌(HCC)转移和预后的关系。应用免疫组织化学方法 ,检测分析 110例HCC组织中SLeX及ED蛋白表达 ,结合随访资料分析。结果显示 ,在HCC中 ,SLeX和ED阳性表达率分别为 39 1%和 4 4 5 %。SLeX阳性表达的HCC转移率高(P 5年生存率低 (P 5年生存率高 (P <0 0 5 )。SLeX表达与ED表达呈负相关 (r =- 0 5 3,P <0 0 0 1)。SLeX和ED表达与HCC转移和患者生存期密切相关。

关键词：肝细胞癌唾液酸化路易斯寡糖-X抗原 E-上皮钙粘蛋白肿瘤转移免疫组织化学

不同CHO工程细胞株表达的VEGFR-Fc唾液酸化修饰的研究

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安徽医科大学学报 2016年第6期51卷 778-782页

作者：刘培宋礼华范清林刘道琴张伟魏利赵婷安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032 安徽安科生物工程(集团)股份有限公司合肥230000

目的比较中国仓鼠卵巢细胞（CHO）工程细胞株表达的VEGFR-Fc的唾液酸化程度的差异,为CHO工程细胞株的筛选提供参数依据。方法从唾液酸单糖、寡糖链这两个层次分析VEGFR-Fc的唾液酸化程度。唾液酸单糖的定量：酸水解释放出的唾液酸用荧... 详细信息

目的比较中国仓鼠卵巢细胞（CHO）工程细胞株表达的VEGFR-Fc的唾液酸化程度的差异,为CHO工程细胞株的筛选提供参数依据。方法从唾液酸单糖、寡糖链这两个层次分析VEGFR-Fc的唾液酸化程度。唾液酸单糖的定量：酸水解释放出的唾液酸用荧光试剂1,2-diamino-4,5-methylenedioxybenzene（DMB）衍生后,采用荧光-亲水保留液相色谱（HILIC-FLD）检测。寡糖链的结构分析：糖苷酶PNGase F释放出的寡糖链经邻氨基苯甲酰胺（2-AB）衍生后,一部分利用阴离子交换色谱原理分析寡糖链上唾液酸的平均数;一部分经HILIC原理分析VEGFR-Fc寡糖链指纹图谱。结果 6株工程细胞株表达的VEGFR-Fc唾液酸含量在3-12 mol NANA/mol蛋白之间,参考品Aflibercept为10.46 mol NANA/mol蛋白;每个寡糖链的唾液酸平均数在0.28-1.0之间;寡糖链的特征指纹谱图显示VEGFR-Fc有12个共有峰,各样品、参考品均有以上共有峰,但各峰的峰高有差异。结论不同的CHO工程细胞株所表达的糖蛋白的唾液酸化程度存在差异。

关键词：唾液酸唾液酸化糖基化 HILIC-FLD

血清丙种球蛋白Fc段唾液酸化水平及其临床意义

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中华风湿病学杂志 2009年第9期13卷 616-619页

作者：陈玉强陈晓翔王元叶霜上海交通大学医学院附属仁济医院风湿免疫科上海市风湿病学临床医学中心 200001

目的建立丙种球蛋白（IgG）Fc段唾液酸化水平的检测方法，并探讨血清IgG-Fc段唾液酸化在系统性红斑狼疮（SLE）尤其是神经精神狼疮（NPSLE）中的临床意义。方法采用基于亲和素的夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）检测75例SLE患者（进一... 详细信息

目的建立丙种球蛋白（IgG）Fc段唾液酸化水平的检测方法，并探讨血清IgG-Fc段唾液酸化在系统性红斑狼疮（SLE）尤其是神经精神狼疮（NPSLE）中的临床意义。方法采用基于亲和素的夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）检测75例SLE患者（进一步分为NPSLE和非NPSLE2个亚组），30例类风湿关节炎（RA）患者，32例幼年特发性关节炎（JIA）患者和41名健康对照者血清唾液酸化IgG，同时记录SLE患者临床资料，计算SLE疾病活动指数（SLEDAI），分析唾液酸化IgG的临床意义。结果唾液酸化的IgG在RA组为（0．82±1．81）mg／ml，JIA组为（0．69±1．30）mg/ml，健康对照组为（0．64±1．09）mg／ml，组间差异无统计学意义（P=0．82），SLE组为（0．12±0．17）mg／ml，唾液酸化水平明显降低（P〈O．01），其中NPSLE组为（0。03±0．03）mg／ml，较其他组显著下降（P〈0．01）；健康对照组IgG唾液酸化的程度为（4．64±5．90）％，显著高于非NPSLE组的（1．88±2．16）％和NPSLE组的（0．29±0．47）％（P〈0．01）。唾液酸化的IgG占总IsC的百分数与SLEDAI负相关（r=-0．43，P〈0．01）。结论SLE患者的IgG-Fc段唾液酸化水平较健康人群显著降低，且与狼疮活动度负相关，尤其在神经精神累及患者的IgG-Fc段唾液酸化水平下降尤为突出，提示唾液酸化的IgG有可能成为一种新的生物治疗手段。

关键词：红斑狼疮,系统性关节炎,类风湿丙种球蛋白类唾液酸化糖基化