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转基因水稻Bt汕优63的整合结构和品系特异性定量PCR方法

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农业生物技术学报 2011年第3期19卷 434-441页

作者：苏长青谢家建王奕海王锡锋彭于发植物病虫害生物学国家重点实验室中国农业科学院植物保护研究所农业部转基因植物环境安全监督检验测试中心(北京) 衡水学院生命科学系

为更好地监测转基因抗虫水稻(Oryza sativa L.)Bt汕优63品系的存在,满足转基因标识管理的要求,同时也为了解决阳性植物基因组DNA不容易获得的问题,本研究采用热不对称交互PCR(TAIL-PCR)、Genome Walking和长链PCR(LD-PCR)方法测定了基... 详细信息

为更好地监测转基因抗虫水稻(Oryza sativa L.)Bt汕优63品系的存在,满足转基因标识管理的要求,同时也为了解决阳性植物基因组DNA不容易获得的问题,本研究采用热不对称交互PCR(TAIL-PCR)、Genome Walking和长链PCR(LD-PCR)方法测定了基因枪转化的转cry1Ab/cry1Ac融合基因水稻品系Bt汕优63的外源插入DNA全序列,构建了含有Bt汕优633’旁侧和水稻内标基因gos9序列的标准质粒分子pMDBt63作为标准物质,建立了Bt汕优63实时荧光定量PCR方法。外源插入DNA全长9818bp,位于水稻基因组10号染色体(AP008214)第5348630位,由8个来源于两个转化质粒的DNA片段组成,其中两个cry1Ab/cry1Ac表达框以正向串连的方式插入。gos9和3’旁侧两个定量标准曲线的相关系数(R2)分别为0.9997和0.9992,扩增效率(E)分别为98.05%和99.46%。每反应100ng模板DNA的检测限(LOD)为10拷贝,定量限(LOQ)为100拷贝。此外,对已知5%和1%转基因含量的混合样品DNA进行定量检测,结果的平均值分别为4.98%和1.07%。结果表明标准质粒pMDBt63作为标准物质建立的定量方法可用于Bt汕优63的定量检测。

关键词：抗虫水稻 Bt汕优63 标准质粒品系特异性实时PCR

OsDREB3大豆品系特异性巢式PCR及多重PCR检测方法的建立

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东北农业大学学报 2014年第4期45卷 7-11页

作者：刘营张明辉甄贞李璐高学军农业部转基因生物产品成分监督检验测试中心哈尔滨150030 东北农业大学农业生物功能基因重点实验室哈尔滨150030

为建立转基因大豆OsDREB3巢式PCR检测方法和转基因大豆多重PCR检测方法,选择转基因大豆GTS40-3-2、A2704-12及OsDREB3 DNA作为多重PCR方法的待检测基因模板,成功实现3种转基因大豆、4组不同片段同时扩增和检测。结果表明,可视性好,检测... 详细信息

为建立转基因大豆OsDREB3巢式PCR检测方法和转基因大豆多重PCR检测方法,选择转基因大豆GTS40-3-2、A2704-12及OsDREB3 DNA作为多重PCR方法的待检测基因模板,成功实现3种转基因大豆、4组不同片段同时扩增和检测。结果表明,可视性好,检测下限达0.1%。转基因大豆OsDREB3巢式PCR方法所用引物满足品系特异定性检测方法要求,其检测灵敏度达0.005%。

关键词：转基因大豆 OsDREB3 品系特异性巢式PCR 多重PCR

水稻内标准基因检测方法国际协同验证及四种转基因棉花品系特异性检测方法研究

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水稻内标准基因检测方法国际协同验证及四种转基因棉花品系特异性...

作者：蒋玲曦上海交通大学

学位级别：硕士

为了保障全球各国转基因产品标识管理制度的顺利实施,针对转基因水稻检测方法中存在内标准基因检测方法不统一、转基因棉花品系特异性检测方法有待完善等问题,本文开展了相关针对性研究。 1.适合转基因水稻定性定量PCR检测的内标准基因... 详细信息

为了保障全球各国转基因产品标识管理制度的顺利实施,针对转基因水稻检测方法中存在内标准基因检测方法不统一、转基因棉花品系特异性检测方法有待完善等问题,本文开展了相关针对性研究。 1.适合转基因水稻定性定量PCR检测的内标准基因的国际协同验证:根据我们已经建立的水稻内标准基因Sucrose Phosphate Synthase (SPS)定性定量PCR检测体系,优化定性定量PCR引物、探针浓度、序列和荧光标记位点,建立了稳定高效的SPS定性和定量PCR检测系统,并组织开展了在国际间实验室内标准基因检测方法的验证,该国际协同实验邀请国内外7个国家12个实验室分别对水稻内标准基因SPS进行验证。结果表明,SPS基因符合转基因产品检测需要的内标准基因的三个特征,即种间特异性,种内非特异性和恒定的低拷贝数。协同实验验证SPS定性PCR检测方法的检测下限能够到达0.1%。定量PCR检测方法的检测下限和定量下限至少为23个拷贝,并且具有良好的反应效率和线性相关系数。采用SPS定量PCR方法对8个水稻盲样分析的偏差在5.22%到26.52%之间。因此说明SPS适合作为水稻的内标准基因,适合用于对转基因水稻样品进行定性和定量PCR检测。 2.根据我国已经批准商业化的转基因棉花Mon15985的5’端旁侧序列和正在批准商业化中的转基因棉花Mon88913的3’端旁侧序列,设计引物和探针,通过优化定性定量PCR检测方法的引物探针浓度,PCR检测体系,建立了转基因棉花Mon15985和Mon88913的品系特异性定性和定量PCR检测方法,结果证明了这两种转基因棉花品系特异性定性PCR检测方法具有高特异性,灵敏度达到0.05%,定量PCR检测方法的检测下限和定量下限分别约10和17个拷贝。在此基础上,我们在实验室内部组织了5人的协同实验验证,结果表明这两种转基因棉花的品系特异性定量PCR检测方法具有高PCR扩增效率,高线性相关系数的特点。并且对5个浓度梯度的转基因棉花混合样品的定量检测结果与其实际结果的偏差在25%范围内。结果表明所建立的两种转基因棉花品系特异性PCR检测方法完全适用于这两种转基因棉花及其衍生物的鉴定和定量分析。另外,我们根据已报道的两种转基因棉花Mon1445和Mon531的品系特异性检测方法和本研究建立的Mon15985和Mon88913品系特异性检测方法,建立四种转基因棉花(Mon88913,Mon15985,Mon1445和Mon531)复合品系特异性定性PCR检测方法。该复合定性PCR检测方法在转基因棉花检测中具有高特异性和低的检测下限(0.1%)等优点,提高了转基因棉花定性检测方法的效率。这些对于转基因产品标识管理制度的顺利实施提供了技术支撑。

关键词：转基因生物内标准基因国际协同实验水稻棉花品系特异性定性PCR 定量PCR 复合PCR

转基因油菜品系特异性检测方法研究及其标准分子研制

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转基因油菜品系特异性检测方法研究及其标准分子研制

作者：李俊毅华东理工大学

学位级别：硕士

本研究对我国进口油菜籽进行转基因成分检测并分析了各品系组成情况,结果显示,我国农业部颁发农业转基因生物安全生产证书的七个转基因油菜品系(RT73、MS8×RF3、MS1×RF1、MS1×RF2、T45、Oxy235和Topas19/2品系)均有进口,其中以RT73和... 详细信息

本研究对我国进口油菜籽进行转基因成分检测并分析了各品系组成情况,结果显示,我国农业部颁发农业转基因生物安全生产证书的七个转基因油菜品系(RT73、MS8×RF3、MS1×RF1、MS1×RF2、T45、Oxy235和Topas19/2品系)均有进口,其中以RT73和MS8×RF3品系为主。本研究构建了适于转基因油菜RT73品系特异性检测的标准分子pEASY-RT73和适于七种转基因油菜品系特异性检测的通用标准分子pCanola9,对其在定性和定量检测中的适用性进行了实验室内部验证。结果表明两种标准分子具有高特异性;在普通PCR扩增中,检测下限(LOD)均低于20拷贝;在实时荧光PCR扩增中,检测下限均低于25拷贝;定量下限(LOQ)均低于为50拷贝。针对以上体系制作的标准曲线具有很好线性关系和较高反应效率。基于此,本研究进一步对标准分子进行可重复性、均匀性、热稳定性和盲样测试。建立了适用于转基因油菜品系特异性检测的方法,研制成功的标准分子可很好的替代植物来源阳性标准品用于转基因油菜及其来源产品品系特异性检测,并为解决转基因产品检测标准物质缺乏的难题提供有力的技术支持。

关键词：转基因油菜标准物质标准分子品系特异性实时荧光PCR

混合样本中LY038玉米品系特异性定性和定量PCR检测

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农业生物技术学报 2013年第12期22卷 1525-1525页

作者：张南许文涛白卫滨翟志芳罗云波闫兴华何景黄昆仑郭天笑 [a] Laboratory of Food Safety College of Food Science and Nutritional Engineering China Agricultural University Beijing 100083 China [b] The Supervision Inspection & Testing Center of Genetically Modified Food Safety Ministry of Agriculture Beijing 100083 China

基因改造可以使玉米(Zea mays L.)抗除草剂、抗害虫或病毒,增加产量,提高其本身质量,更好地满足人类需要。随着转基因作物的发展,消费者关心的更多的是食品生产中转基因作物的使用,许多食品生产商和食品供应商提供的食品标签表明他们的... 详细信息

基因改造可以使玉米(Zea mays L.)抗除草剂、抗害虫或病毒,增加产量,提高其本身质量,更好地满足人类需要。随着转基因作物的发展,消费者关心的更多的是食品生产中转基因作物的使用,许多食品生产商和食品供应商提供的食品标签表明他们的农作物不是转基因作物,而其真实性却无从考量。在这种情况下,建立标识制度并研制相应的检测方法势在必行。本研究描述了应用在参照分子中的LY038玉米插入位点的筛选和品系特异性定量检测技术,建立了LY038转基因玉米插入位点侧翼序列的分离方法,

关键词：品系特异性 LY038 玉米 PCR 混合样本

DAS-59122-7玉米的鉴定以及结合质粒标准品的品系特异性定量检测

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农业生物技术学报 2013年第12期89卷 1523-1523页

作者：许文涛梁志宏杨蓉罗云波张方方元延芳黄昆仑徐瑗聪 Laboratory of Food Safety and Molecular Biology College of Food Science and Nutritional Engineering China Agricultural University Beijing 100083 PR China

近年来随着转基因作物的发展,转基因作物的含量受到了相应的限制。针对转基因作物的检测而言,品系特异性PCR能够扩增插入基因和植物基因之间的一段边界序列,已经成为了国际上认可的检测标准。目前能够进行品系特异性检测的转基因作物品... 详细信息

近年来随着转基因作物的发展,转基因作物的含量受到了相应的限制。针对转基因作物的检测而言,品系特异性PCR能够扩增插入基因和植物基因之间的一段边界序列,已经成为了国际上认可的检测标准。目前能够进行品系特异性检测的转基因作物品系有很多,如Bt11、GT73、MON810和GA21等玉米,以及MON1445、MON531等棉花,但是尚未见有关DAS-59122-7玉米检测的报道。本研究以DAS-59122-7玉米(Zea mays L.)为对象,利用反向PCR技术获得该玉米的侧翼序列,并建立了相关的多重定性

关键词：品系特异性玉米 DAS-59122-7 质粒标准品定量检测

转基因香石竹Moonlite品系特异性定性PCR检测方法的建立

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中国农业科技导报 2010年第6期12卷 109-113页

作者：李鹏潘爱虎贾军伟蒋玲曦白蓝唐雪明上海市农业科学院生物技术研究所上海市农业遗传育种重点实验室农业部转基因植物环境安全监督检验测试中心(上海)上海201106

以转基因香石竹品种Moonlite(月之伊人)为研究对象,通过TAIL-PCR方法,获得外源基因插入位点的左侧旁邻序列。根据旁邻序列设计引物,建立品系特异性定性PCR方法,其扩增片段覆盖了转化载体及香石竹基因组临界序列。本方法特异性好、灵敏度... 详细信息

以转基因香石竹品种Moonlite(月之伊人)为研究对象,通过TAIL-PCR方法,获得外源基因插入位点的左侧旁邻序列。根据旁邻序列设计引物,建立品系特异性定性PCR方法,其扩增片段覆盖了转化载体及香石竹基因组临界序列。本方法特异性好、灵敏度高,可快速、准确、高效地检测转基因香石竹Moonlite品种。

关键词：转基因香石竹品系特异性 PCR检测

转基因鲑鱼AquAdvantage品系特异性实时荧光聚合酶链式反应检测方法的建立

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中国食品卫生杂志 2017年第5期29卷 576-580页

作者：刘二龙卢丽吕英姿蒋湘李立霞李嘉琪杜雅萍郑高彬黄埔出入境检验检疫局广东广州510730 广东出入境检验检疫局技术中心广东广州510623

目的实现转基因鲑鱼AquAdvantage的标识管理,建立其品系特异性实时荧光聚合酶链式反应(PCR)检测方法。方法针对转基因鲑鱼的品系特异性序列设计引物和TaqMan探针,建立转基因鲑鱼实时荧光PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复... 详细信息

目的实现转基因鲑鱼AquAdvantage的标识管理,建立其品系特异性实时荧光聚合酶链式反应(PCR)检测方法。方法针对转基因鲑鱼的品系特异性序列设计引物和TaqMan探针,建立转基因鲑鱼实时荧光PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行检测。结果建立的转基因鲑鱼实时荧光PCR方法特异性强,在600 000~60拷贝范围内呈良好的线性关系,其线性回归方程为y=-3.2194x+40.805,R^2=0.997,检测限为60拷贝,检测重复性良好。结论建立的品系特异性实时荧光PCR方法可应用于转基因鲑鱼AquAdvantage的鉴定。

关键词：转基因鲑鱼 AquAdvantage 实时荧光聚合酶链式反应品系特异性检测

转基因甜菜GTSB77品系特异性实时荧光聚合酶链式反应检测方法建立

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中国食品卫生杂志 2020年第1期32卷 49-52页

作者：刘二龙卢丽吕英姿蒋湘李嘉琪夏柔菲黄埔海关技术中心广东广州510730 广州海关技术中心广东广州510623

目的为实现转基因甜菜GTSB77的标识管理,建立其品系特异性实时荧光聚合酶链式反应(PCR)检测方法。方法针对GTSB77的3’端外源插入片段与甜菜基因组DNA之间的邻接区序列设计引物和探针,建立GTSB77品系特异性实时荧光PCR检测方法,并对该... 详细信息

目的为实现转基因甜菜GTSB77的标识管理,建立其品系特异性实时荧光聚合酶链式反应(PCR)检测方法。方法针对GTSB77的3’端外源插入片段与甜菜基因组DNA之间的邻接区序列设计引物和探针,建立GTSB77品系特异性实时荧光PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行检测。结果建立的GTSB77检测方法特异性强,定量限(LOQ)为16拷贝,扩增效率为102%,重复性测试结果相对标准偏差(RSD)介于0.21%~1.66%之间。结论建立的实时荧光PCR方法可应用于GTSB77的鉴定检测。

关键词：转基因甜菜GTSB77 实时荧光聚合酶链式反应品系特异性