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作者：单淑晴昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]本研究从体外细胞水平出发,探寻咖啡醇对结肠癌细胞HCT116增殖的影响及其量效关系,通过检测自噬标志物确定咖啡醇诱导结肠癌细胞产生自噬性死亡,进而通过检测不同自噬通路上的关键靶基因深入探索咖啡醇诱导自噬的关键通路和作用... 详细信息

[目的]本研究从体外细胞水平出发,探寻咖啡醇对结肠癌细胞HCT116增殖的影响及其量效关系,通过检测自噬标志物确定咖啡醇诱导结肠癌细胞产生自噬性死亡,进而通过检测不同自噬通路上的关键靶基因深入探索咖啡醇诱导自噬的关键通路和作用机理。通过探索咖啡醇抑制结肠癌的生物学功效,有助于进一步开发咖啡醇资源,使咖啡醇在结肠癌的防控中发挥作用,对于推动药物治疗的发展,促进基础研究对慢性病预防控制的关键作用有重大意义。[方法]培养细胞HCT116,加入不同浓度咖啡醇(OμM、10μM、20μM、40μM、80μM、160μM)与细胞孵育48h后,通过MTT实验检测咖啡醇对结肠癌细胞HCT116增殖的影响及其量效关系,通过透射电镜检测自噬标志物,进而运用Western Blot检测咖啡醇诱导的LC3B-II的表达变化情况,最后使用实时荧光定量PCR检测不同自噬通路上的关键靶基因。[结果]***的结果表明,随着咖啡醇浓度的不断增加,细胞活性受到了抑制,即咖啡醇能够抑制结肠癌细胞的增殖。2.将HCT116细胞用不同浓度咖啡醇(OμM、20μM、40μM)处理24h后,用40μM咖啡醇孵育的细胞在电镜下观察可见线粒体发生变形,有双层膜环绕的自噬体,这意味着咖啡醇诱导HCT116细胞发生了细胞自噬。***印迹检测自噬标志物LC3B-Ⅱ。研究结果显示,随着咖啡醇浓度的不断增加,LC3B-Ⅰ条带痕迹逐渐减淡,而LC3B-Ⅱ则逐渐加强,推测咖啡醇到达一定浓度时会引起结肠癌细胞发生细胞自噬。4.随着咖啡醇浓度逐渐增加,Beclinl和mTOR的表达变化水平无统计学意义,推测结肠癌细胞HCT116的自噬发生可能不是通过这两条通路,具体的关键靶点还需进一步研究和探讨。[结论]1.咖啡醇能抑制结肠癌细胞增殖。2.一定浓度的咖啡醇能诱导HCT116细胞发生自噬。3.不同咖啡醇浓度下Beclinl和mTOR的相对表达水平变化无统计学意义,提示咖啡醇诱导的细胞自噬可能不是通过这两条通路,具体的关键靶点还需进一步研究。

关键词：咖啡醇结肠癌生物学功效 HCT116

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咖啡醇通过上调LKB1/AMPK/ULK1通路诱导HCT116细胞自噬的作用机制研究

咖啡醇通过上调LKB1/AMPK/ULK1通路诱导HCT116细胞自噬的作用机制...

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作者：杨寄镯昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]结直肠癌是一种在世界范围内有着高死亡率和高流行率的恶性肿瘤。虽然标准疗法（手术切除加化疗或放疗）对结直肠癌患者已产生了良好的疗效,但由于5-氟尿嘧啶和奥沙利铂等一线化疗药物具有一定副作用和耐药性,导致结直肠癌患者在... 详细信息

[目的]结直肠癌是一种在世界范围内有着高死亡率和高流行率的恶性肿瘤。虽然标准疗法（手术切除加化疗或放疗）对结直肠癌患者已产生了良好的疗效,但由于5-氟尿嘧啶和奥沙利铂等一线化疗药物具有一定副作用和耐药性,导致结直肠癌患者在使用上述药物治疗后总体预后仍较差。因此,目前迫切需要寻求毒副作用低、治疗效果好的新药。现有研究发现,饮食中的各类天然活性成分在肿瘤发生发展的过程中有着不可估量的作用,咖啡中的天然植物活性成分在结直肠癌的预防治疗中尤为重要。因此,本文从研究咖啡中的植物活性成分咖啡醇抑制人结肠癌HCT116细胞增殖作用入手,同时对咖啡醇是否是通过诱导细胞自噬发挥其抗癌作用以及其诱导自噬的相关信号通路进行了探讨,旨在深入了解植物化学物咖啡醇抑制结肠癌细胞增殖的重要信号通路和关键靶基因,为临床上应用咖啡醇干预治疗结肠癌提供理论依据。[方法]1.本研究利用MTT法对HCT116细胞增殖情况进行观察,从而筛选出最佳实验浓度和条件;检测不同浓度咖啡醇对HCT116细胞增殖的抑制情况。2.利用透射电镜观察咖啡醇处理HCT116细胞的自噬小体形成情况;利用western blot检测咖啡醇处理HCT116细胞中自噬标志性蛋白LC3B、Beclin1、SQSTM1/p62蛋白表达水平;检测咖啡醇对HCT116细胞自噬的影响。3.使用自噬抑制剂3-MA预处理后,利用MTT法和western blot检测HCT116细胞增殖及自噬标志性蛋白LC3B、Beclin1蛋白表达水平。4.利用RT-qPCR和western blot检测Lkb1、Ampk、Ulk1 mRNA和蛋白表达水平;检测咖啡醇对自噬通路LKB1/AMPK/ULK1的影响。5.利用siRNA干扰技术敲低Lkb1基因表达水平,再利用western blot检测其下游级联蛋白AMPK、ULK1及效应蛋白LC3B表达水平。检测Lkb1基因敲低后咖啡醇对自噬及其相关通路LKB1/AMPK/ULK1的影响。[结果]1.不同浓度咖啡醇对HCT116细胞抑制率均高于空白（P＜0.001）,且随着药物浓度升高其对肿瘤细胞增殖活性的抑制作用也随之上升,即咖啡醇可以剂量依赖的方式抑制HCT1116细胞增殖活性。2.自噬小体和自噬标志性蛋白LC3B、Beclin1蛋白表达水平均随着咖啡醇作用浓度增加而升高,SQSTM1/p62蛋白表达水平随着咖啡醇浓度上升而下降（P＜0.05）,说明咖啡醇能够诱导HCT116细胞自噬。3.加入自噬抑制剂后自噬标志性蛋白LC3B、Beclin1表达呈剂量依赖性下降（P＜0.05）;观察细胞增殖活性发现:与咖啡醇组比较,自噬抑制剂与咖啡醇联合用药组的细胞抑制率显著下降（P＜0.001）,表明自噬抑制会使咖啡醇抑制结肠癌HCT116细胞增殖的效率降低。4.随着咖啡醇剂量升高,Lkb1、Ampk和Ulk1 mRNA和蛋白表达水平均显著上调（P＜0.05）,提示:咖啡醇上调了自噬通路LKB1/AMPK/ULK1。5.与正常HCT116细胞相比,敲低HCT116细胞Lkb1基因后,咖啡醇不能诱导AMPK,ULK1和LC3B蛋白水平升高。[结论]1.咖啡醇可抑制结肠癌HCT116细胞增殖;2.咖啡醇可能是通过上调抑癌因子LKB1表达水平来激活其下游自噬相关通路AMPK/ULK1,从而诱发细胞自噬性死亡,最终抑制人结肠癌细胞HCT116增殖活性。

关键词：咖啡醇结肠癌自噬 LKB1/AMPK/ULK1通路

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橙黄瑞香中苯丙素类成分研究

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中草药 2016年第22期47卷 3970-3974页

作者：黄圣卓王琪刘玉清周俊戴好富马青云孔凡栋赵友兴中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南海口571101 中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部资源持续利用国家重点实验室云南昆明650201

目的研究橙黄瑞香Daphne aurantiaca茎的苯丙素类化学成分。方法采用正相和反相硅胶柱色谱与Sephadex LH-20凝胶柱色谱进行分离纯化,并运用波谱方法鉴定化合物的结构。结果从橙黄瑞香茎95%乙醇提取物中分离得到13个苯丙素类成分,分别鉴... 详细信息

目的研究橙黄瑞香Daphne aurantiaca茎的苯丙素类化学成分。方法采用正相和反相硅胶柱色谱与Sephadex LH-20凝胶柱色谱进行分离纯化,并运用波谱方法鉴定化合物的结构。结果从橙黄瑞香茎95%乙醇提取物中分离得到13个苯丙素类成分,分别鉴定为咖啡酸二十三烷酯(1)、咖啡酸二十烷酯(2)、咖啡酸十九烷酯(3)、咖啡酸十八烷酯(4)、咖啡酸十七烷酯(5)、咖啡酸十六烷酯(6)、咖啡酸十四烷酯(7)、咖啡酸十二烷酯(8)、咖啡酸十一烷酯(9)、咖啡酸异戊酯(10)、阿魏酸(11)、3,4-二甲氧基桂皮醛(12)、咖啡醇(13)。结论所有化合物均为首次从该植物中分离得到。

关键词：瑞香属橙黄瑞香苯丙素咖啡酸酯阿魏酸 3,4-二甲氧基桂皮醛咖啡醇

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葵花盘中黄嘌呤氧化酶抑制活性成分识别与活性分析

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生物学杂志 2024年

作者：闫昊前张扬邢芳毓高建萍张天阳李晓静宋默微孙冰冰张贵锋马莉成都中医药大学药学院中国科学院过程工程研究所生化国家重点实验室天新福(北京)医疗器材股份有限公司哈尔滨医科大学附属第一医院首都医科大学中医药学院

从葵花盘中筛选具有黄嘌呤氧化酶(XO)抑制活性的天然产物。以XO为载体,从葵花盘提取物中特异性吸附分离候选化合物,通过高分辨液质谱联用技术对其进行鉴定,研究XO抑制活性成分及其作用机理。从葵花盘醇提物中筛选出咖啡醇等13种化合物,... 详细信息

从葵花盘中筛选具有黄嘌呤氧化酶(XO)抑制活性的天然产物。以XO为载体,从葵花盘提取物中特异性吸附分离候选化合物,通过高分辨液质谱联用技术对其进行鉴定,研究XO抑制活性成分及其作用机理。从葵花盘醇提物中筛选出咖啡醇等13种化合物,其中,咖啡醇(IC50=47.49μg/m L,P咖啡醇与XO特异结合性能,通过紫外可见光谱、荧光光谱及圆二色谱技术证明咖啡醇可与XO有效结合,并降低其活性。咖啡醇与酶FAD区域的结合阻碍了底物氧化反应过程中的电子转移,使酶的结构更加致密,底物难以定位到活性腔中,导致其催化活性下降。咖啡醇对酶的猝灭机制属于静态猝灭,主要驱动力为疏水作用,且咖啡醇在XO活性腔上只有单一或一类结合位点。咖啡醇是一种潜在抑制XO活性的成分,为治疗高尿酸血症天然产物的筛选提供依据。

关键词：葵花盘黄嘌呤氧化酶咖啡醇超滤-质谱联用技术尿酸

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