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哺乳动物呼肠孤病毒在不同细胞中的复制动力学及体外抗肿瘤活性

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中国生物制品学杂志 2015年第1期28卷 26-29页

作者：刘辉杨红育丁壮陶冬徐志强赵虹李婷婷柏丛张楠佐毅曹宇长春生物制品研究所有限责任公司吉林长春130062 吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062

目的探讨哺乳动物呼肠孤病毒3型标准株(Reovirus 3)在不同细胞中的复制动力学,并对其体外抗肿瘤活性进行初步的研究。方法将低浓度的呼肠孤病毒分别接种于Vero-E6、MRC-5和MDBK 3种细胞,盲传3代,逐日观察细胞病变(CPE);采用直接免疫荧... 详细信息

目的探讨哺乳动物呼肠孤病毒3型标准株(Reovirus 3)在不同细胞中的复制动力学,并对其体外抗肿瘤活性进行初步的研究。方法将低浓度的呼肠孤病毒分别接种于Vero-E6、MRC-5和MDBK 3种细胞,盲传3代,逐日观察细胞病变(CPE);采用直接免疫荧光抗体法检测盲传3代后的病毒复制情况;将黑色素瘤细胞与MDBK细胞置同一个器皿中用呼肠孤病毒进行攻毒,每日观察CPE。结果接种低浓度的呼肠孤病毒后72 h,即可在MDBK细胞中观察到明显的CPE;在MRC-5细胞中盲传3代未发现CPE;在Vero-E6细胞中盲传3代可发现轻微的CPE。呼肠孤病毒在MDBK细胞中可稳定传代;在MRC-5细胞中盲传3代未检测到病毒;在Vero-E6细胞中盲传2代即可检测到病毒,但荧光强度较弱。接种呼肠孤病毒后30 h,黑色素瘤细胞出现破裂且大面积死亡,MDBK细胞局部区域开始出现CPE,且病变区域逐渐扩大。结论 MDBK细胞是最适合培养呼肠孤病毒的细胞,Vero-E6细胞中病毒可以繁殖,但是复制动力较MDBK细胞弱,MRC-5细胞不适于培养呼肠孤病毒。呼肠孤病毒在体外具有选择性的杀死癌细胞的特性,但由于机体的免疫系统相对体外更加复杂,体内具有的抗肿瘤活性尚需在肿瘤动物模型中进行进一步的研究。

关键词：呼肠孤病毒复制抗肿瘤活性

斑点叉尾呼肠孤病毒诱导斑点叉尾肾脏组织细胞凋亡的研究

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水产学报 2013年第1期37卷 117-124页

作者：王瑶曾令兵徐进周勇肖艺华中农业大学水产学院中国水产科学研究院长江水产研究所

为研究斑点叉尾呼肠孤病毒(CCRV)诱导斑点叉尾肾脏细胞(CCK)发生凋亡的机理,以CCRV感染的CCK细胞为实验材料,采用Hoechst 33258染色、DNA片段化检测、TUNEL反应、亚G1期细胞检测以及线粒体膜电位变化检测等方法进行实验。感染试验... 详细信息

为研究斑点叉尾呼肠孤病毒(CCRV)诱导斑点叉尾肾脏细胞(CCK)发生凋亡的机理,以CCRV感染的CCK细胞为实验材料,采用Hoechst 33258染色、DNA片段化检测、TUNEL反应、亚G1期细胞检测以及线粒体膜电位变化检测等方法进行实验。感染试验结果显示,病毒感染斑点叉尾肾脏组织细胞后,细胞变圆、皱缩,随后细胞脱落,细胞单层呈网状,感染72h后出现典型细胞病变效应(CPE);病毒感染48 h后Hoechst 33258染色结果显示,细胞的染色质固缩、核边缘化或破裂,可观察到凋亡小体,细胞凋亡率随时间增加;DNA片段化检测结果显示,病毒感染细胞12 h后细胞基因组DNA出现片段化,随后逐渐增强,72 h达到最高;TUNEL反应结果表明,病毒感染细胞72 h后细胞基因组DNA断裂,有大量游离3’末端自由羟基(-OH)存在。亚G1期细胞检测结果显示,病毒感染48 h后,约53.44%细胞处于亚G1期;利用JC-1检测试剂盒检测病毒感染细胞的线粒体膜电位变化,病毒感染细胞24 h后线粒体膜通透性发生改变,膜电位变化显著。紫外线灭活与热灭活的斑点叉尾呼肠孤病毒不能诱导斑点叉尾肾脏细胞发生凋亡,表明细胞凋亡依赖于病毒复制。

关键词：斑点叉尾 呼肠孤病毒肾脏组织细胞系细胞凋亡

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蚊传呼肠孤病毒研究进展

中国人兽共患病学报 2021年第8期37卷 748-756,762页

作者：田杰郭晓芳云南省寄生虫病防治所云南省虫媒传染病防控研究重点实验室云南省虫媒传染病防控关键技术创新团队(培育)普洱665000 昆明医科大学公共卫生学院昆明650500

虫媒病毒由吸血节肢动物叮咬脊椎动物传播。呼肠孤病毒科由9~12节段的双链RNA病毒组成,病毒颗粒为大小在60~80 nm之间呈20面体对称的球型结构,目前国际病毒分类委员会(ICTV)命名及未列入分类的呼肠孤病毒共有两亚科15属150余种。该科病... 详细信息

虫媒病毒由吸血节肢动物叮咬脊椎动物传播。呼肠孤病毒科由9~12节段的双链RNA病毒组成,病毒颗粒为大小在60~80 nm之间呈20面体对称的球型结构,目前国际病毒分类委员会(ICTV)命名及未列入分类的呼肠孤病毒共有两亚科15属150余种。该科病毒既能感染呼吸道,又能感染胃肠道,分布广、媒介及宿主众多。本文对目前全球发现的蚊传呼肠孤科病毒种类进行总结,对我国既往和新发现命名的蚊传呼肠孤病毒科病毒的媒介、地理分布和致病性调查进行分类汇总,为疾病预防控制策略的制定提供基础数据。

关键词：呼肠孤病毒虫媒病毒蚊虫

锯缘青蟹呼肠孤病毒感染的组织病理和超微病理观察

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华中农业大学学报 2011年第5期30卷 640-645页

作者：熊娟陈吉刚杨季芳陈孝煊华中农业大学水产学院武汉430070 浙江万里学院生物与环境学院宁波315100

运用石蜡切片及超薄切片技术,对感染呼肠孤病毒的锯缘青蟹组织进行组织病理和超微观察。石蜡切片结果显示:SsRV的侵染导致青蟹的肝胰腺、鳃、肠、心、胃和肌肉组织中产生明显组织病理变化,其中以肝胰腺、鳃组织和肠组织的病理变化最为明... 详细信息

运用石蜡切片及超薄切片技术,对感染呼肠孤病毒的锯缘青蟹组织进行组织病理和超微观察。石蜡切片结果显示:SsRV的侵染导致青蟹的肝胰腺、鳃、肠、心、胃和肌肉组织中产生明显组织病理变化,其中以肝胰腺、鳃组织和肠组织的病理变化最为明显,主要包括肝胰腺基底膜破损、肝细胞坏死,鳃腔堵塞,肠上皮细胞脱落,心肌与足肌纤维排列紊乱、断裂等病理变化。超薄切片结果显示:SsRV在肝胰腺、鳃、肠、心等组织广泛分布,说明SsRV组织嗜性广泛;SsRV可导致靶器官细胞核染色质凝结、电子密度增高、髓样小体和溶酶体产生、线粒体组织结构破坏和粗面内质网扩张变形等明显细胞病理学变化。

关键词：锯缘青蟹呼肠孤病毒组织病理超微病理

当前鸭呼肠孤病毒病的发病危害及防控措施建议

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兽药市场指南 2022年第9期 52-53页

作者：无惠中兽药

呼肠孤病毒广泛存在于家禽中,以鸡群感染的报道最为多见。近一段时间以来,我国水禽养殖密集的地区,无论是养鸭集中的地区还是养鹅集中的地区,呼肠孤病毒病所造成的危害非常严重,实验室检测分离,呼肠孤病毒的检出率非常高禽呼肠孤病毒归... 详细信息

呼肠孤病毒广泛存在于家禽中,以鸡群感染的报道最为多见。近一段时间以来,我国水禽养殖密集的地区,无论是养鸭集中的地区还是养鹅集中的地区,呼肠孤病毒病所造成的危害非常严重,实验室检测分离,呼肠孤病毒的检出率非常高禽呼肠孤病毒归属于呼肠孤病毒科的正呼肠孤病毒属呼肠孤病毒是具分节段的双链RNA基因组的一类病毒,分布广,病毒粒呈球形。

关键词：呼肠孤病毒防控措施正呼肠孤病毒属水禽养殖双链RNA 养鸭养鹅

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1株感染洛氏鱥呼肠孤病毒的分离与培养

中国兽医学报 2018年第1期38卷 64-68页

作者：巴翠玉张培军赵福广张林波焦雪李月红吉林农业大学吉林长春130118 吉林省卫生监测检验中心吉林长春130000

利用细胞培养技术从养殖发病洛氏鲅中分离出1株病毒，经人工感染试验、电镜观察、核酸基因组SDS-PAGE电泳、RT—PCR检测确认为呼肠孤病毒。人工感染发病的症状与自然发病症状相同；病毒感染可使鲤鱼上皮瘤细胞（EPC）产生典型细胞病变... 详细信息

利用细胞培养技术从养殖发病洛氏鲅中分离出1株病毒，经人工感染试验、电镜观察、核酸基因组SDS-PAGE电泳、RT—PCR检测确认为呼肠孤病毒。人工感染发病的症状与自然发病症状相同；病毒感染可使鲤鱼上皮瘤细胞（EPC）产生典型细胞病变效应，收集细胞上清，负染后电镜下可观察到大小均一，直径约70nm，近球形，无囊膜结构的病毒粒子，初步判断为呼肠孤病毒；病毒基因组SDS-PAGE结果表明，病毒基因组由11个分段的RNA核酸片段组成，为典型的水生呼肠孤病毒核酸带型。病毒基因纽$10节段RT-PCR结果表明，有特异性条带，其与GenBank中登录的呼肠孤病毒S10节段（JN206665．1）序列同源性为91％，该分离株应为呼肠孤病毒，本研究首次在洛氏缄鱼内分离到呼肠孤病毒。

关键词：洛氏鱥呼肠孤病毒分离与培养

猴头菇多糖对呼肠孤病毒感染番鸭组织病变及细胞凋亡的影响

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中国预防兽医学报 2010年第1期32卷 14-18页

作者：陈艺娟吴异健黄一帆吴宝成福建农林大学动物科学学院福建福州350002

为探讨猴头菇多糖对呼肠孤病毒感染雏番鸭组织病变及细胞凋亡的影响。本实验通过建立呼肠孤病毒感染的肝脾组织病变的动物模型,应用猴头菇多糖对感染番鸭进行防治,给药组分别添加0.01%,0.02%,0.03%的猴头菇多糖,观察其对肝脾组织病变及... 详细信息

为探讨猴头菇多糖对呼肠孤病毒感染雏番鸭组织病变及细胞凋亡的影响。本实验通过建立呼肠孤病毒感染的肝脾组织病变的动物模型,应用猴头菇多糖对感染番鸭进行防治,给药组分别添加0.01%,0.02%,0.03%的猴头菇多糖,观察其对肝脾组织病变及其细胞凋亡的影响。实验结果发现给药组的番鸭发病时间延迟、死亡率下降,细胞病变坏死较少,用中剂量的猴头菇多糖的治疗呼肠孤病毒病效果最明显。实验数据还表明猴头菇多糖给药组在病毒感染的早期促进细胞凋亡,晚期抑制细胞凋亡,这可能是猴头菇多糖能对呼肠孤病毒感染产生积极影响的原因,它有助于防止病毒在细胞中的扩散甚至有利于病毒的清除。此项研究为国内首次报道。

关键词：呼肠孤病毒番鸭猴头菇多糖组织病变细胞凋亡

中国对虾中一种与肝胰腺细小病毒混合感染的呼肠孤病毒的初步鉴定

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海洋与湖沼 1996年第3期27卷 314-318页

作者：薛清刚宫云浩王文兴国家海洋局第一海洋研究所青岛266003 农业部动物检疫所青岛266032

于1991年9月在青岛市沙子口镇对虾养殖场采集中国对虾病虾，采用酒石酸钾－甘油密度梯度离心法从病虾肝胰腺中分离出一种呼肠孤科病毒，并通过电子显微镜观察和提取分析病毒基因组核酸等方法进行初步鉴定。结果显示，该病毒在酒五酸钾-... 详细信息

于1991年9月在青岛市沙子口镇对虾养殖场采集中国对虾病虾，采用酒石酸钾－甘油密度梯度离心法从病虾肝胰腺中分离出一种呼肠孤科病毒，并通过电子显微镜观察和提取分析病毒基因组核酸等方法进行初步鉴定。结果显示，该病毒在酒五酸钾-甘油密度梯度离心纯化时与肝胰腺细小病毒混合存在；病毒颗粒为有包膜的正二十面体立体对称结构；带包膜的完整颗粒直径在64－66nm；裸露核衣壳平均直径为53．2nm；病毒基因组由分成10个节段的双链RNA构成。目前还没发现与该病毒有明确关系的组织和细胞病理变化。

关键词：中国对虾呼肠孤病毒混合感染肝胰腺病毒

草鱼呼肠孤病毒VP6蛋白与大肠杆菌LTB亚基植物融合表达载体的构建

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中国水产科学 2011年第1期18卷 1-7页

作者：周勇曾令兵范玉顶罗晓松徐进肖艺中国水产科学研究院长江水产研究所华中农业大学水产学院

根据GenBank中草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)VP6蛋白的全基因序列(AF403394)和大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的基因序列(M17874),设计并合成特异性引物,从感染草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肾细胞(CIK)中提取病毒核酸作为模板,进行RT-PCR扩增,得到约1.3 kb的GCRV VP6基因读码框片段,同时提取大肠杆菌(Escherichia coli)H44815全基因组作为模板,进行PCR扩增得到约370 bp的LTB基因读码框片段。将获得的2个目的片段分别克隆到pCR2.1载体上,经酶切、PCR扩增检测和序列测定确认后,将其克隆到携带绿色荧光蛋白标记的植物表达载体pCAMBIA1302上,成功构建了可将草鱼呼肠孤病毒VP6蛋白、大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)、绿色荧光蛋白(GFP)融合表达的植物载体pCAMBIA 1302-LTB-VP6。本研究旨为草鱼出血病可饲化转基因植物疫苗研制奠定基础。

关键词：草鱼出血病呼肠孤病毒 VP6基因 LTB基因植物表达载体