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中国实验动物学报 2016年第2期24卷 183-187页

作者：王吉付瑞李晓波王淑菁卫礼邢进冯育芳王洪岳秉飞中国食品药品检定研究院北京100050

目的通过实验小鼠呼肠孤病毒ⅲ型抗体检测能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,血清经过标定后,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,发样给... 详细信息

目的通过实验小鼠呼肠孤病毒ⅲ型抗体检测能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,血清经过标定后,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,发样给参加单位,并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果一致的判为满意结果,不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果共有17个省市的27个实验动物检测机构报名参加本次能力验证项目。27个检测机构均提交了满意结果,占总参加机构的100%。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法的有26个检测机构,采用免疫荧光实验(IFA)方法的有1个检测机构。结论实验动物质量检测机构实验小鼠呼肠孤病毒ⅲ型抗体检测能力较高,实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。

关键词：呼肠孤病毒ⅲ型检测能力验证酶联免疫吸附实验免疫荧光实验

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呼肠孤病毒ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法的建立

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中国比较医学杂志 2012年第9期22卷 46-50页

作者：王吉卫礼贺争鸣岳秉飞中国食品药品检定研究院、国家实验动物微生物、遗传检测中心北京100050

目的建立呼肠孤病毒ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法,应用于实验动物及人用动物源性材料及生物制品外源Reo3的检测。方法根据已发表的呼肠孤病毒ⅲ型(Reo3)M1基因序列,设计合成引物。提取Reo3细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件... 详细信息

目的建立呼肠孤病毒ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法,应用于实验动物及人用动物源性材料及生物制品外源Reo3的检测。方法根据已发表的呼肠孤病毒ⅲ型(Reo3)M1基因序列,设计合成引物。提取Reo3细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特异性、敏感性、重复性试验。结果建立的Reo3RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定。以Reo3 RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为0.42pg/μL,可检测病毒最小滴度为10-9/mL。结论建立的呼肠孤病毒ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法可用于实验动物及人用动物源性材料及生物制品外源Reo3的检测。

关键词：呼肠孤病毒ⅲ型反转录聚合酶链式反应实验动物人用动物源性材料及生物制品

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呼肠孤病毒ⅲ型免疫荧光检测方法的建立及初步应用

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中国比较医学杂志 2011年第8期21卷 1-4,F0002页

作者：王吉卫礼岳秉飞贺争鸣中国药品生物制品检定所国家实验动物质量检测中心北京100050

目的建立呼肠孤病毒ⅲ型(Reo3)免疫荧光(IFA)检测方法,应用于人用动物源性生物材料及生物制品外源Reo3的检测。方法滴定病毒TCID50,筛选Reo3敏感细胞,依据国标IFA法制备抗原片,方阵法滴定免疫荧光素最佳工作浓度。并进行特异性、敏感... 详细信息

目的建立呼肠孤病毒ⅲ型(Reo3)免疫荧光(IFA)检测方法,应用于人用动物源性生物材料及生物制品外源Reo3的检测。方法滴定病毒TCID50,筛选Reo3敏感细胞,依据国标IFA法制备抗原片,方阵法滴定免疫荧光素最佳工作浓度。并进行特异性、敏感性和稳定性试验。结果选取BSC-1细胞作为Reo3敏感细胞,病毒感染力滴度(TCID50)为10-5.8/mL;免疫荧光素最佳工作浓度为1∶100;与小鼠鼠痘(Ect)病毒、小鼠肝炎(MHV)病毒均无交叉反应;稳定性和敏感性试验显示,不同时间IFA检测灵敏度均为1∶1280;可检测到的病毒滴度最低为10-4.1/mL。结论建立的IFA法敏感性、特异性强,稳定性好,可用于人用动物源性生物材料及生物制品Reo3的检测。

关键词：呼肠孤病毒ⅲ型人用动物源性生物材料及生物制品免疫荧光试验

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小鼠三种病毒核酸检测方法的优化及与血清学检测结果的对比分析

小鼠三种病毒核酸检测方法的优化及与血清学检测结果的对比分析

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作者：李欣悦北京协和医学院

学位级别：硕士

实验动物是生命科学研究的重要工具,其自身的质量,特别是微生物质量非常重要,因而需要对实验动物的微生物质量进行监测。目前,实验动物排查病毒多采用血清学方法对动物的既往感染情况进行回顾性排查,然而对于动物当期病毒感染情况以及... 详细信息

实验动物是生命科学研究的重要工具,其自身的质量,特别是微生物质量非常重要,因而需要对实验动物的微生物质量进行监测。目前,实验动物排查病毒多采用血清学方法对动物的既往感染情况进行回顾性排查,然而对于动物当期病毒感染情况以及周围环境的病毒存在状态需要进行病原学检测。基于核酸扩增的病原检测技术具备高敏感性和特异性,可应用于实验动物病原检测。但在实验动物样品前处理环节,样品储运条件对核酸检测的影响未见报道。目前国内在实验小鼠病毒检测中核酸检测技术应用较少,该方法在实验小鼠健康监测的适用性有待探讨。因此,本论文研究了小鼠样品储运条件对三种病毒核酸检测的影响,并应用核酸检测方法对我检测实验室的送检样品开展了病毒核酸检测方法的适用性研究。首先,本论文研究了样品储存温度和不同类型保存剂对于三种病毒核酸检出的影响。在室温(25℃)和低温(4℃)条件下,分别以生理盐水和BufferAVL作保存剂保存样品,用荧光定量PCR对样品的小鼠肝炎病毒(MHV)、呼肠孤病毒ⅲ型(Reo-3)及小鼠诺如病毒(MNV)核酸检出量进行检测。结果显示BufferAVL组样品病毒核酸降解幅度最小,4℃保存的样品病毒核酸检出量下降幅度低于室温组;以Buffer AVL为保存剂,4℃保存的样品在3天时的病毒核酸检出量的下降幅度在50%以下。因此以Buffer AVL作保存剂进行低温运输可有效保护病毒核酸。然后,本论文对小鼠样品的核酸检测与血清学检测进行了比较。在随机选取的272份小鼠盲肠内容物样品和对应的小鼠血清样品中,MHV、Reo-3和MNV三种肠道病毒检出率分别为17.3%、18.8%、16.9%;而血清学抗体阳性率分别为1.2%、1.2%、14.8%。MHV、Reo-3、MNV三种病毒的核酸检测结果与血清学检测结果不完全一致。在实验小鼠病原监测中核酸检测方法作为病原学检测方法可与血清学方法互补。本论文还对新技术NASBA-ELISA进行了探索。以SV、Reo-3、MHV三种病毒RNA为模板进行NASBA扩增,NASBA扩增产物经电泳分析,条带单一清晰;但未能通过ELISA方法实现产物信号放大。该方法在实验室应用中需要进一步优化。

关键词：小鼠肝炎病毒呼肠孤病毒ⅲ型小鼠诺如病毒核酸检测

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脐带来源的间充质干细胞运载Reovirus体外杀伤白血病细胞株的初步研究

脐带来源的间充质干细胞运载Reovirus体外杀伤白血病细胞株的初步...

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作者：吴双霜贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:本研究模拟人体Reo3抗体存在时,利用人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)运载呼肠孤病毒III型(Reo3)与白血病细胞株Jurkat细胞进行体外共培养,初步探讨UC-MSCs运载Reo3的可行性及UC-MSCs运载Reo3对Jurkat细胞凋亡坏死的影响,为白血病及其... 详细信息

目的:本研究模拟人体Reo3抗体存在时,利用人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)运载呼肠孤病毒III型(Reo3)与白血病细胞株Jurkat细胞进行体外共培养,初步探讨UC-MSCs运载Reo3的可行性及UC-MSCs运载Reo3对Jurkat细胞凋亡坏死的影响,为白血病及其他肿瘤的治疗提供基础研究依据。方法:***-MSCs的分离、培养及鉴定;***-MSCs及Jurkat细胞表面JAM-A粘附分子的表达;3.高滴度Reo3感染UC-MSCs细胞内部情况的观察;***3感染UC-MSCs后,UC-MSCs的相对增殖情况;***3感染UC-MSCs后,细胞裂解液中的Reo3滴度测定;6.体外共培养体系的建立及体系中Jurkat细胞凋亡坏死情况分析。结果:1.利用机械法从脐带华通氏胶中分离培养出来的细胞,经形态学及细胞表面抗原检测鉴定,均符合UC-MSCs的生物学特性;***-MSCs和Jurkat细胞表面JAM-A粘附分子表达量分别为50.7%、41.3%;3.利用高滴度Reo3感染UC-MSCs 72小时后,可见UC-MSCs细胞内部大量病毒包涵体出现,而未感染Reo3的UC-MSCs细胞内部未见病毒包涵体出现;4.相比no Reo3组,MOI 1、MOI 2及MOI 3组在24小时至120小时内UC-MSCs的相对增殖率均呈现出上升及下降趋势,且均在72小时达到高峰。在120小时时,与no Reo3组相比,仅MOI 1组其相对增殖率在统计学上没有显著性差异,故感染UC-MSCs的最佳Reo3滴度选择MOI 1;5.48小时时UC-MSCs细胞裂解液中Reo3滴度最高,故感染UC-MSCs的最佳时间点选择48小时;6.成功地利用以上条件建立共培养体系24小时时,发现Reo3抗体存在时,UC-MSCs仍能运载Reo3致Jurkat细胞凋亡坏死。结论:1.从脐带华通氏胶中分离培养出来的细胞经形态学及细胞表面分子标记物的检测鉴定,符合UC-MSCs的生物学要求;***-MSCs作为Reo3细胞载体具有可行性;3.在抗体存在的情况下,UC-MSCs运载Reo3可以导致Jurkat细胞凋亡、坏死;***3作为肿瘤治疗新药有一定的理论依据。

关键词：间充质干细胞人脐带间充质干细胞溶瘤病毒呼肠孤病毒ⅲ型白血病 Jurkat细胞凋亡坏死

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