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基于16S rRNA测序分析两种呼肠孤病毒对小鼠肠道菌群的影响

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中国实验动物学报 2022年第1期30卷 100-106页

作者：王诗雨林家锋蒋欣如孙淼王颖陶晓莉锦州医科大学基础医学院病原生物学教研室辽宁锦州121000

目的探究T1L和NBV两种呼肠孤病毒对小鼠肠道菌群结构的影响。方法将25只小鼠随机分为5组(对照组、NBV滴鼻组、NBV灌胃组、T1L滴鼻组、T1L灌胃组),每组5只。对照组用PBS灌胃,其余组别均用2×10^(7) PFU/mL病毒滴度感染小鼠。7 d后采集小... 详细信息

目的探究T1L和NBV两种呼肠孤病毒对小鼠肠道菌群结构的影响。方法将25只小鼠随机分为5组(对照组、NBV滴鼻组、NBV灌胃组、T1L滴鼻组、T1L灌胃组),每组5只。对照组用PBS灌胃,其余组别均用2×10^(7) PFU/mL病毒滴度感染小鼠。7 d后采集小鼠粪便,从每组5个样本中选出粪便重量较重的3个样本,对粪便DNA进行V3+V4可变区特异性扩增,运用16S rRNA测序分析小鼠粪便中菌群的丰度、多样性及物种组成结构。结果T1L和NBV灌毒后的小鼠肠道菌群丰度和多样性与对照组相比有所下降,且T1L滴鼻组下降最为显著(P病毒的感染方式不同,对菌群的影响也有所不同。

关键词：呼肠孤病毒 16S rRNA 肠道菌群感染方式

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呼肠孤病毒抗肿瘤机制研究进展

肿瘤研究与临床 2019年第2期31卷 127-130页

作者：蔡瑞敏冯强李毅王文洋山东省泰安市中心医院检验科 271000

近年来溶瘤病毒在肿瘤治疗方面取得了较大突破,尤其是呼肠孤病毒,可有效地诱导肿瘤细胞凋亡而不损害正常机体组织,超过80%的肿瘤细胞对呼肠孤病毒感染敏感:呼肠孤病毒主要通过诱导肿瘤细胞凋亡,发挥抗肿瘤免疫作用来实现其抗肿瘤活性,... 详细信息

近年来溶瘤病毒在肿瘤治疗方面取得了较大突破,尤其是呼肠孤病毒,可有效地诱导肿瘤细胞凋亡而不损害正常机体组织,超过80%的肿瘤细胞对呼肠孤病毒感染敏感:呼肠孤病毒主要通过诱导肿瘤细胞凋亡,发挥抗肿瘤免疫作用来实现其抗肿瘤活性,同时呼肠孤病毒与化疗药物的联合作用远超过单药治疗的效果,并且可通过不同的作用机制发挥抗肿瘤作用,对未来肿瘤的新型高效治疗有重大意义。

关键词：肿瘤溶瘤病毒呼肠孤病毒

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一株基因Ⅴ型鸡呼肠孤病毒的分离与鉴定

中国家禽 2023年第7期45卷 46-53页

作者：吴琼姜晓宁崔依同张树辉常林吴凤明徐鑫唐熠刁有祥山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 山东华誉集团有限公司山东东营257343 烟台市福山区动物疫病预防控制中心山东烟台265500 日照经济技术开发区奎山街道办事处农业办山东日照276826 广州市华南农大生物药品有限公司广东广州511300

为确定山东省某商品肉鸡场发病病原,掌握其遗传进化特征,研究通过采集发病鸡场患鸡肌腱进行病原分离,经RT-PCR、序列分析等方法进行鉴定。结果显示:从发病鸡群中分离到一株呼肠孤病毒,该分离株(YT株)与ARV基因V型参考株K100557处同一进... 详细信息

为确定山东省某商品肉鸡场发病病原,掌握其遗传进化特征,研究通过采集发病鸡场患鸡肌腱进行病原分离,经RT-PCR、序列分析等方法进行鉴定。结果显示:从发病鸡群中分离到一株呼肠孤病毒,该分离株(YT株)与ARV基因V型参考株K100557处同一进化分支,核苷酸和氨基酸相似性达96.0%,氨基酸序列仅存在13个突变位点;而与疫苗株S1133的核苷酸和氨基酸相似性仅为54.4%和49.2%,氨基酸序列存在167个突变位点。研究表明该鸡场发病病原为基因V型鸡呼肠孤病毒,为制定综合防控措施提供参考。

关键词：肉鸡呼肠孤病毒分离鉴定

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一株基因V型鸡呼肠孤病毒的分离与鉴定

中国家禽 2023年

作者：吴琼姜晓宁崔依同张树辉常林吴凤明徐鑫唐熠刁有祥烟台市福山区动物疫病预防控制中心山东华誉集团有限公司日照经济技术开发区奎山街道办事处农业办广州市华南农大生物药品有限公司山东农业大学动物科技学院

为确定山东省某商品肉鸡场发病病原，掌握其遗传进化特征，研究通过采集发病鸡场患鸡肌腱进行病原分离，经RT-PCR、序列分析等方法进行鉴定。结果显示：从发病鸡群中分离到一株呼肠孤病毒，该分离株（YT株）与ARV基因V型参考株K100557... 详细信息

为确定山东省某商品肉鸡场发病病原，掌握其遗传进化特征，研究通过采集发病鸡场患鸡肌腱进行病原分离，经RT-PCR、序列分析等方法进行鉴定。结果显示：从发病鸡群中分离到一株呼肠孤病毒，该分离株（YT株）与ARV基因V型参考株K100557处同一进化分支，核苷酸和氨基酸相似性达96.0%，氨基酸序列仅存在13个突变位点；而与疫苗株S1133的核苷酸和氨基酸相似性仅为54.4%和49.2%，氨基酸序列存在167个突变位点。研究表明该鸡场发病病原为基因V型鸡呼肠孤病毒，为制定综合防控措施提供参考。

关键词：肉鸡呼肠孤病毒分离鉴定

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呼肠孤病毒诱导乳腺癌微球体细胞凋亡

中国肿瘤生物治疗杂志 2012年第2期19卷 133-137页

作者：朱敬之徐曙光殷志强吴志勇上海交通大学医学院附属仁济医院普外科上海200127

目的:探讨呼肠孤病毒对乳腺癌微球体细胞凋亡的影响。方法:以干细胞培养液培养乳腺癌细胞MCF-7和BT474,形成微球体,分别用呼肠孤病毒和表柔比星处理微球体,FCM检测MCF-7、BT474微球体细胞中CD44+CD24-/low细胞的比例,TUNEL法检测微球体... 详细信息

目的:探讨呼肠孤病毒对乳腺癌微球体细胞凋亡的影响。方法:以干细胞培养液培养乳腺癌细胞MCF-7和BT474,形成微球体,分别用呼肠孤病毒和表柔比星处理微球体,FCM检测MCF-7、BT474微球体细胞中CD44+CD24-/low细胞的比例,TUNEL法检测微球体细胞的凋亡,Western blotting检测MCF-7细胞及其微球体细胞中Ras的表达。结果:呼肠孤病毒对乳腺癌MCF-7和BT474微球体细胞的感染率显著高于亲本细胞(均P呼肠孤病毒感染后MCF-7和BT474微球体细胞中CD44+CD24-/low细胞比例明显下降[(8.1±0.4)%vs(0.8±0.2)%,(0.6±0.2)%vs(0.2±0.1)%;均P呼肠孤病毒感染后凋亡率明显增加[(1.90±0.21)%vs(5.0±1.4)%,P呼肠弧病毒对乳腺癌微球体细胞的抑制作用明显,还可明显诱导乳腺癌微球体细胞凋亡。

关键词：呼肠孤病毒乳腺癌干细胞微球体细胞凋亡

呼肠孤病毒感染体外扩增的CIK及NK细胞后联合西妥昔单抗的抗结直肠癌效应的初步研究

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呼肠孤病毒感染体外扩增的CIK及NK细胞后联合西妥昔单抗的抗结直...

作者：孔娟贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:研究体外扩增的自然杀伤细胞（NK）及CIK细胞（CIK）在联合西妥昔单抗（cetuximab）后对人EGFR阳性的结直肠癌细胞株DLD-1及Caco-2的杀伤效应,以及呼肠孤病毒（reovirus）能否进一步增强CIK及NK细胞与cetuximab的联合抗肿瘤效应,... 详细信息

目的:研究体外扩增的自然杀伤细胞（NK）及CIK细胞（CIK）在联合西妥昔单抗（cetuximab）后对人EGFR阳性的结直肠癌细胞株DLD-1及Caco-2的杀伤效应,以及呼肠孤病毒（reovirus）能否进一步增强CIK及NK细胞与cetuximab的联合抗肿瘤效应,为临床结直肠癌的治疗提供新的治疗策略。方法:从健康献血者的外周血分离出单个核细胞（PBMC）,分别常规诱导出CIK细胞及NK细胞,收集培养第14天的CIK细胞及NK细胞,ELISA实验检测CIK细胞培养上清中IFN-γ及TGF-β的水平,通过流式细胞分析仪分析CIK细胞及NK表型及结直肠癌细胞DLD-1和Caco-2的EGFR受体的表达水平。分别采用RTCA（RTCA）及乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测NK细胞的细胞毒作用。利用TCID50法和甲基纤维素改良的噬斑实验测定reovirus病毒的滴度,使用不同滴度的reovirus病毒感染CIK细胞及NK细胞。采用实时无标记分析仪分别动态监测CIK及NK细胞在不同滴度reovirus感染后联合cetuximab对DLD-1及Caco-2细胞株的杀伤效应。结果:流式细胞仪检测CIK细胞亚群可见培养后CD8+T（67.5±16.5%）、CD3+CD56+NKT（20.1±13.7%）及CD16+CD56+NK细胞比例（7.0±6.6%）均较培养前CD8+T（26.7±9.5%）、CD3+CD56+NKT（3.1±1.8%）及CD16+CD56+NK（2.6±2.7%）显著增高;CIK细胞培养培养上清中细胞因子浓度IFN-γ水平由34.8±35.4 ng/L增高到2041.8±697.9ng/L（P＜0.01）,而同时TGF-β的水平由1293.8±633.9ng/L降为116.7±26.8ng/L（P＜0.01）;经过14天体外扩增培养的NK细胞纯度可达86.2%;DLD-1及Caco-2肿瘤细胞表面均高表达EGFR,分别为81.6%及82.9%;LDH释放实验结果与RTCA检测所显示的杀伤趋势基本一致;TCID50法及噬斑实验求得病毒滴度分别为2.53×109pfu/L及1.36×109 pfu/L。RTCA检测发现NK细胞联合西妥昔单抗对结直肠癌细胞株杀伤作用明显高于单一的NK细胞组;CIK细胞对DLD-1及Caco-2细胞株的杀伤率分别为16.04±0.87%及27.67±3.10%,而当联合使用cetuximab后杀伤率分别增高到31.56±3.55%及35.96±1.73%,且用10pfu和100pfu滴度reovirus病毒感染CIK细胞及NK细胞后联合cetuximab对肿瘤细胞杀伤效应更明显。结论:CIK细胞及NK细胞联合cetuximab的杀伤效果明显增强,对KRAS野生型DLD-1细胞及KRAS突变型Caco-2细胞均有效,reovirus能进一步增强CIK细胞和NK细胞与cetuximab的联合抗肿瘤效应,为今后的临床研究奠定实验基础。

关键词： NK细胞 CIK细胞呼肠孤病毒西妥昔单抗结直肠癌

体外扩增的NK细胞运载溶瘤呼肠孤病毒对结直肠癌细胞的杀伤效应

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中国肿瘤生物治疗杂志 2019年第5期26卷 492-499页

作者：陈晓庆王念雪龙世棋廖春香刘金河杨薇赵星贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心贵州贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学免疫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学肿瘤学教研室贵州贵阳550004

目的:评价体外扩增的人NK细胞能否作为呼肠孤病毒的运载细胞并探讨其临床转化应用价值。方法:体外扩增人NK细胞,用NK细胞装载呼肠孤病毒,激光共聚焦显微镜观察呼肠孤病毒与NK细胞结合的部位。NK细胞运载呼肠孤病毒(Reo-NK)到达肿瘤细胞... 详细信息

目的:评价体外扩增的人NK细胞能否作为呼肠孤病毒的运载细胞并探讨其临床转化应用价值。方法:体外扩增人NK细胞,用NK细胞装载呼肠孤病毒,激光共聚焦显微镜观察呼肠孤病毒与NK细胞结合的部位。NK细胞运载呼肠孤病毒(Reo-NK)到达肿瘤细胞后,CCK-8法检测在中和抗体的存在下病毒发挥的溶瘤作用;qPCR法检测肿瘤细胞内病毒RNA的相对表达量。CCK-8法检测Reo-NK对结直肠癌KRAS基因突变型(DLD-1)和野生型(CaCo-2、HT29)细胞株的杀伤效应,ELISA双抗体夹心法检测NK细胞释放的穿孔素水平。结果:呼肠孤病毒主要结合于NK细胞膜上,在人AB型血清的存在下体外扩增的NK细胞可将呼肠孤病毒传递到肿瘤细胞,且传递后的呼肠孤病毒仍具有显著溶瘤活性(P病毒RNA的表达量显著增高(P呼肠孤病毒的运载细胞,且呼肠孤病毒能够增强NK细胞的细胞毒作用,两者联合后对结直肠癌细胞可发挥更强的杀伤作用,因而具有重要的临床转化应用价值。

关键词：呼肠孤病毒自然杀伤细胞运载细胞结直肠癌细胞

锯缘青蟹(Scylla serrata)呼肠孤病毒5个结构蛋白互作分析

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海洋与湖沼 2017年第5期48卷 1108-1113页

作者：熊尚凌邢峻梁范东洋袁洋洋朱四东林旦璆杨季芳陈吉刚浙江万里学院生物与环境学院宁波315100

采用酵母双杂交系统,对青蟹呼肠孤病毒(Scylla serrata reovirus)5个结构蛋白(VP3,VP6,VP9,VP11,VP12)间的双向互作进行了分析。将5个结构蛋白对应的ORF分别亚克隆至诱饵载体p GBKT7和猎物载体p GADT7,成功构建了10个酵母双杂交重组载... 详细信息

采用酵母双杂交系统,对青蟹呼肠孤病毒(Scylla serrata reovirus)5个结构蛋白(VP3,VP6,VP9,VP11,VP12)间的双向互作进行了分析。将5个结构蛋白对应的ORF分别亚克隆至诱饵载体p GBKT7和猎物载体p GADT7,成功构建了10个酵母双杂交重组载体。将重组诱饵载体或重组捕获载体转化至酵母菌Y2H Gold中进行自激活检测,结果显示5个结构蛋白均不能激活酵母菌报告基因HIS3的表达,表明5个病毒蛋白均不具有自激活活性。通过酵母双杂交实验,从5个结构蛋白25个可能性互作对中,共筛选出2个双向互作对(VP11&VP6,VP11&VP12)和3个自身互作对(VP3&VP3,VP11&VP11,VP12&VP12)。本研究是有关Ss RV结构蛋白互作的首次报道。

关键词：锯缘青蟹呼肠孤病毒酵母双杂交互作

草鱼呼肠孤病毒HZ08株抗体IPMA检测方法的建立及应用

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水产学报 2017年第1期41卷 142-149页

作者：曾伟伟王庆王英英李莹莹郝贵杰石存斌沈锦玉中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部渔药创制重点实验室浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室

为建立一种检测草鱼呼肠孤病毒HZ08株(HZ08)抗体的免疫学方法,本实验以接种HZ08病毒的细胞培养板为抗原板,以免疫弱毒疫苗的草鱼血清为抗体,通过反应条件优化,建立了检测GCRV HZ08血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞实验(IPMA)方法,并对... 详细信息

为建立一种检测草鱼呼肠孤病毒HZ08株(HZ08)抗体的免疫学方法,本实验以接种HZ08病毒的细胞培养板为抗原板,以免疫弱毒疫苗的草鱼血清为抗体,通过反应条件优化,建立了检测GCRV HZ08血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞实验(IPMA)方法,并对该方法特异性、敏感性、重复性、与ELISA检测结果的符合率及对临床血清样品的检测效果等进行了验证。结果显示,HZ08株种毒按照1×103拷贝/μL浓度接种后72h固定,HRP-Ig G二抗1∶1000稀释,待检血清1∶100稀释时效果最佳;该IPMA方法与草鱼阴性血清、免疫细菌三联疫苗的草鱼血清、感染GCRV JX0901(GCRVⅠ型)的草鱼血清无交叉反应;GCRV HZ08株阳性血清稀释至1∶800时仍能检出;批内和批间重复性实验显示,该方法具有良好的重复性;符合性实验结果显示,该IPMA方法与ELSIA方法的阳性和阴性符合率分别为95.7%和87.5%;用建立的IPMA方法检测草鱼出血病弱毒疫苗免疫草鱼,免疫2周后抗体水平达到峰值;对现地送检的126份草鱼血清样本进行检测,平均检出阳性率为72.2%。研究表明,建立的HZ08株IPMA方法特异性强、重复性好、敏感性高,为GCRVⅡ型的流行病学调查、疫苗免疫效果评价及抗原抗体检测提供了一种有效的检测手段。

关键词：草鱼呼肠孤病毒免疫过氧化物酶单层细胞实验抗体检测