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库蠓吸血习性分析及其小鼠过敏模型构建研究

库蠓吸血习性分析及其小鼠过敏模型构建研究

作者：卢雪遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:通过对库蠓种类进行鉴别,并对其腹部血粉进行PCR鉴定,判断库蠓胃血来源,分析不同种类库蠓吸血偏好,了解其吸血习性,确定库蠓可能的取食范围及病原体传播的物种类群,为库蠓防治工作提供参考依据。利用库蠓提取物,构建库蠓-小鼠过敏... 详细信息

目的:通过对库蠓种类进行鉴别,并对其腹部血粉进行PCR鉴定,判断库蠓胃血来源,分析不同种类库蠓吸血偏好,了解其吸血习性,确定库蠓可能的取食范围及病原体传播的物种类群,为库蠓防治工作提供参考依据。利用库蠓提取物,构建库蠓-小鼠过敏模型,研究库蠓提取物致敏小鼠免疫反应模式,为进一步深入研究库蠓叮咬过敏及其他过敏疾病机制提供模型工具,同时为吸血昆虫叮咬过敏治疗药物的筛选及开发提供基础。方法:1.利用灯诱法采集重庆綦江地区不同生境库蠓,对库蠓进行形态学分类鉴定,通过分子鉴定及发育树构建对形态学鉴定结果进行复核,分析不同生境库蠓分布。2.利用物种COⅠ基因序列,设计物种特异性引物,提取库蠓腹部血粉DNA,利用特异性引物进行PCR,根据扩增结果,判定宿主物种。3.利用库蠓提取物两步法致敏6周小鼠:在第0、7、14、21天用库蠓提取物加明矾佐剂对小鼠进行腹腔注射（IP）致敏,在第28、31和35天进行库蠓提取物皮内注射（ID）致敏,对照组则在相同条件下用PBS注射。4.对致敏后小鼠进行行为学观察,及库蠓提取物致敏部位进行形态学检测;利用ELISA每14天测定特异性抗体Ig E及Ig G亚类的表达情况;在致敏42天后,提取小鼠脾细胞,利用MTT法测定库蠓提取物对小鼠脾细胞增殖的影响,同时通过q PCR检测库蠓提取物处理后小鼠脾细胞细胞因子表达情况。结果:1.重庆地区4种不同圈舍（猪舍、羊舍、鸡舍及鸡鸭混合舍）采集到7种主要库蠓类群,扩增获得7种库蠓COⅠ基因,经测序及序列比对,库蠓种类匹配成功,以COⅠ基因序列对7种库蠓构建NJ分子树和ML分子树。分子鉴定结果均与形态学鉴定结果一致,各种类库蠓分别形成一个单支,无种类交叉情况。2.不同畜舍所分布的库蠓种群有所不同,羊舍、鸡舍和鸡鸭混合舍的优势种均为荒川库蠓***,分别占捕获总数的75.26%、93.36%和94.96%;而猪舍的优势种则为洋岛库蠓***,占捕获总数70.77%。通过随机抽样,对6种主要库蠓的190份饱血库蠓胃血进行PCR检测,结果显示6种库蠓类群都存在兼性吸血的现象,可以4～6种动物的血液为食,其中荒川库蠓***、洋岛库蠓***、琉球库蠓***和陵水库蠓***均吸食鸡血,洋岛库蠓***还喜食羊血和猪血,尖喙库蠓***和刺螫库蠓***则偏好吸食猪血和羊血,此外琉球库蠓***和荒川库蠓***兼吸食人血,两者吸食人血比例分别为56.52%和1.39%。3.制备库蠓提取物,通过腹腔注射（IP）及皮内注射（ID）库蠓提取物两步法构建库蠓-小鼠过敏模型,致敏组小鼠在库蠓提取物致敏后,对致敏部位抓挠行为较对照组明显（P＜0.001）,且致敏部位皮肤出现组织水肿及淋巴细胞浸润情况。此外,致敏组小鼠血清中Ig E（P＜0.05）及Ig G1（P＜0.05）抗体水平较对照组小鼠显著升高;而在体外利用库蠓提取物刺激引起致敏小鼠脾细胞显著增殖（P＜0.001）,诱导2型辅助T淋巴细胞（Th2）免疫反应所产生的细胞因子包括IL-4、IL-5、IL-10和IL-13 m RNA表达较对照组显著上调（P＜0.05）。综上成功构建出库蠓-小鼠过敏模型。结论:1.初步明确重庆地区6种库蠓类群的取食偏好,6种库蠓均为兼性吸血,具有吸血多样性的特点,同时不同种群库蠓具有不同的吸血习性。2.利用库蠓提取物,通过两步致敏法成功构建库蠓-小鼠过敏模型,这为进一步深入研究库蠓叮咬过敏及其他过敏疾病机制提供模型工具,同时为吸血昆虫叮咬过敏治疗药物的筛选及开发提供基础。

关键词：库蠓分子鉴定吸血习性致敏小鼠模型

白纹伊蚊的吸血习性及新型捕蚊器BG-Sentinel trap的捕蚊效果研究

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白纹伊蚊的吸血习性及新型捕蚊器BG-Sentinel trap的捕蚊效果研究

作者：帅淑芬南方医科大学

学位级别：硕士

一、研究背景登革热(dengue fever, DF)是由登革病毒(dengue virus, DENV/DV)引起的急性感染性疾病。感染登革病毒后可引起登革热、登革出血热(dengue haemorrhagie fever, DHF)、登革休克综合征(dengue shock syndrome, DSS)。登革热... 详细信息

一、研究背景登革热(dengue fever, DF)是由登革病毒(dengue virus, DENV/DV)引起的急性感染性疾病。感染登革病毒后可引起登革热、登革出血热(dengue haemorrhagie fever, DHF)、登革休克综合征(dengue shock syndrome, DSS)。登革热传播的主要媒介是白纹伊蚊和埃及伊蚊。据世界卫生组织报道：登革热在亚洲、大洋洲、美洲、非洲等100多个国家和地区广泛流行,特别是在东南亚、西太平洋和南非地区登革热的爆发更为频繁。严重威胁全球25亿人口的健康,每年有超过5000万人感染登革,其中大约5万人发展为登革出血热,超过2.5万人死亡。在发病率和死亡率方面,登革热已成为继疟疾之后的第二大经节肢动物传播的疾病。在中国,1978年第一次登革热爆发于广东省佛山市;此后,登革热先后在海南、广西、福建和浙江等地爆发流行。在1990年至2005年期间,中国大陆地区报道的登革热案例就有10000余例。近几年,在中国南部,登革热流行的间隔时间在缩短并且流行区域在不断扩张。登革热已经成为中国南部主要的公共卫生问题,并且影响其经济发展。在我国广东省广州市,由于其地处亚热带,年平均气温高,夏秋季雨水充足,其气候条件十分适宜登革热传播媒介白纹伊蚊的生长繁殖。白纹伊蚊属于半家栖性蚊种,多孳生在居民点及其周围。白纹伊蚊雌蚊是凶猛的吸血者,吸血骚扰性极大,偏吸人血,多在户外侵袭人体。该蚊全天均有吸血现象,雌蚊刺叮活动有早晨和傍晚两个高峰期;其吸血活动常受气候、温度、湿度和光线的直接影响。白纹伊蚊通过叮咬吸血将虫媒病毒传播给人或／和其他动物,其对不同动物的吸血习性及其本身传播病毒给不同动物的能力影响病毒传播的效能。有研究表明：白纹伊蚊兼吸多种动物的血,且有多次吸血的特性。研究白纹伊蚊的吸血习性有助于了解其传播病毒的可能的动物保存宿主,为蚊媒传染病的防治提供指南。国外有研究表明：白纹伊蚊主要吸食哺乳动物和鸟类动物血液,宿主动物范围很广。但在我国广州地区,白纹伊蚊对不同动物的吸血程度如何?其传播登革病毒的可能的动物保存宿主有哪些?这些尚不明确。通过对白纹伊蚊的吸血习性的研究,了解其对各种动物的吸血偏性及其传播登革热病毒的可能的动物保存宿主,为登革热的防治提供指南。白纹伊蚊是我国传播登革热的主要媒介之一。调查白纹伊蚊数量,监测白纹伊蚊的密度为有效实施防治登革热提供重要依据。登革热媒介监测主要包括白纹伊蚊成蚊密度监测和幼虫密度监测。目前,我国常用的白纹伊蚊成蚊监测方法有人诱法、紫外灯诱捕法、诱蚊诱卵器等。寻找一个灵敏度高,能真实、客观反映自然界白纹伊蚊蚊虫密度及种群消长变化的监测方法,一直是媒介生物防治工作中所要探讨的重要问题之一。本研究引进国外常用的蚊虫监测方法：BG-Sentinel trap,由德国Biogents公司发明,用于捕获蚊类和其他吸血昆虫的捕蚊器。大量国外研究表明：BG-Sentinel trap监测蚊类的效果良好,主要捕获埃及伊蚊、白纹伊蚊、波利尼西亚伊蚊以及一些库蚊比如致倦库蚊、淡色库蚊等。但在我国,目前并没有关于BG-Sentinel trap的相关研究报道。本研究在广州地区比较BG-Sentinel trap在诱捕成蚊方面与紫外诱蚊灯及诱蚊诱卵器的差异,并探讨在中国境内BG-Sentinel trap在成蚊监测中的作用和应用前景。二、研究目的 1、通过建立PCR法鉴定白纹伊蚊胃血来源,研究白纹伊蚊的吸血习性,确定其对不同动物的吸血偏性,了解白纹伊蚊传播登革病毒的可能的动物保存宿主。 2、在实验室和现场条件下,比较BG-Sentinel trap、紫外诱蚊灯、诱蚊诱卵器捕获蚊类效果,评价新型捕蚊器BG-Sentinel trap捕蚊效果,并探讨在中国境内,其在成蚊监测中的作用和应用前景。三、研究方法 1、应用PCR技术研究白纹伊蚊的吸血习性在实验室条件下,将六种动物(鸡、猫、狗、鸽、野鼠、小鼠)分别放入6个小玻璃房或将六种动物同时放入一个大玻璃房,然后放入已经饥饿18h的白纹伊蚊雌蚊,3h后收集吸血蚊。现场调查通过紫外诱蚊灯和BG-Sentinel trap采集吸血白纹伊蚊雌蚊,利用实验室建立的PCR体系鉴定白纹伊蚊胃血来源。结合实验室和现场收集白纹伊蚊胃血来源鉴定结果,确定白纹伊蚊对常见动物的吸血偏性。 2、新型捕蚊器BG-Sentinel trap的捕蚊效果研究在实验室条件下,将三种捕蚊器(BG-Sentinel trap、诱蚊诱卵器、紫外诱蚊灯)同时放入实验房,随后放入蚊类(白纹伊蚊、致倦库蚊、中华按蚊),雌雄各半,观察24h,收集捕蚊器捕获的蚊类,计算其捕获蚊虫数。现场调查时间为2012年7～12月,在调查地区选取4个点,每个点布放三种捕蚊器,观察24h,收

关键词：白纹伊蚊吸血习性捕蚊器 BG-Sentinel trap 捕蚊效果

二齿新蚤和方形黄鼠蚤松江亚种吸血习性的实验室观察

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四川动物 1992年第1期11卷 13-15页

作者：马立名吉林省地方病第一防治研究所白城137000

1983—1989年对二齿新蚤和方形黄鼠蚤松江亚种几种吸血习性进行了实验观察。1.新羽化蚤吸血蚤百分率与羽化后时间呈直线正相关。二齿新蚤至30小时左右,方形黄鼠蚤松江亚种至40小时左右,吸血蚤百分率约达90%,相当于繁殖蚤。2.蚤同宿主接... 详细信息

1983—1989年对二齿新蚤和方形黄鼠蚤松江亚种几种吸血习性进行了实验观察。1.新羽化蚤吸血蚤百分率与羽化后时间呈直线正相关。二齿新蚤至30小时左右,方形黄鼠蚤松江亚种至40小时左右,吸血蚤百分率约达90%,相当于繁殖蚤。2.蚤同宿主接触5分钟内即有部份吸血。接触半小时吸血蚤数最多,半小时至1小时吸血蚤数减少,也有少部份蚤至1小时尚未吸血。3.吸血蚤与未吸血蚤均可留于宿主体上,亦均能随时离开宿主体。

关键词：二齿新蚤吸血习性方形黄鼠蚤

珠海市横琴岛嗜人按蚊和中华按蚊吸血习性研究

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中国媒介生物学及控制杂志 2001年第3期12卷 186-188页

作者：阮峰朱泰华刘勇鹰周红华谭爱军广东省珠海市卫生防疫站 519000 广东省卫生防疫站寄生虫研究所

目的 :探讨横琴开发区嗜人按蚊和中华按蚊吸血习性。方法 :清晨搜捕全部人房和蚊帐内外以及牛房内的吸血按蚊 ;半通宵人牛诱捕 ;通宵人诱捕蚊。结果 :嗜人按蚊和中华按蚊都嗜牛血兼嗜人血 ,整夜都有吸血活动 ,嗜人按蚊和中华按蚊夜间吸... 详细信息

目的 :探讨横琴开发区嗜人按蚊和中华按蚊吸血习性。方法 :清晨搜捕全部人房和蚊帐内外以及牛房内的吸血按蚊 ;半通宵人牛诱捕 ;通宵人诱捕蚊。结果 :嗜人按蚊和中华按蚊都嗜牛血兼嗜人血 ,整夜都有吸血活动 ,嗜人按蚊和中华按蚊夜间吸血高峰值同在下半夜。结论 :防蚊措施的采用 ,特别在下半夜。

关键词：嗜人按蚊中华按蚊吸血习性

1971～1978年按蚊的吸血习性和有关人血指数的评论

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国际医学寄生虫病杂志 1981年第4期8卷 162-170页

作者： Garrett-Jones C ,钱会霖 ,盛伯梁

引言采集野外按蚊的胃血标本,主要是为了得到某种蚊群和人之间叮咬接触程度的指标,即人血指数(HBI)。这项资料对现场调查人员了解传病的、特别是传播疟疾的可疑或潜在媒介的状况,以及对制定防制媒介的

关键词：按蚊血标本种团按蚊属人血吸血习性 HBI 蚊种

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昭通市吸血昆虫虻类区系分布及吸血习性调查

医学动物防制 2002年第12期18卷 651-654页

作者：杨建设颜昌亚李光旭昭通市卫生防疫站昭通市彝良县卫生防疫站鲁甸县卫生防疫站昭通657000

虻类是畜牧业的一大害虫 ,为防治虻虫吸血传播动物疾病及人畜共患病 ,提供科学防治依据。笔者于 1992年～ 2 0 0 1年连续、断续在十县 (区 )进行虻类区系分布及吸血习性调查。

关键词：分布特征昭通市吸血昆虫虻类区系吸血习性

武穴市中华按蚁吸血习性三种方法调查结果比较

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中国寄生虫病防治杂志 1994年第3期7卷 219-221页

作者：罗曼珍郑香陈昌源廖道明徐保海王学东郑敬李建中童家政陈耀祥唐松赵长磊杜宪刚王洪云李健昌李继林王运超李应庆裴速建中国预防医学科学院寄生虫病研究所湖北省寄生虫病防治研究所湖北省武穴市卫生防疫站福建省卫生防疫站江苏省张家港市卫生防疫站浙江省奉化市卫生防疫

用三种方法调查了武穴市中华按蚊吸血习性。全村人房和各种牲畜房早晨全面搜捕采集蚊胃血标本，计算人血指数为０．０４８；夜间不同宿主直接诱捕，趋吸人血比例为１２．４３％；室外栖息场所搜捕，仅捕到少量吸血按蚊。结果分析表明，... 详细信息

用三种方法调查了武穴市中华按蚊吸血习性。全村人房和各种牲畜房早晨全面搜捕采集蚊胃血标本，计算人血指数为０．０４８；夜间不同宿主直接诱捕，趋吸人血比例为１２．４３％；室外栖息场所搜捕，仅捕到少量吸血按蚊。结果分析表明，采用全村室内全面搜捕方法调查中华按蚊的人血指数，较为适合。

关键词：中华按蚊吸血习性人血指数疟疾

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新疆北湾地区刺扰伊蚊吸血习性观察

寄生虫与医学昆虫学报 2009年第2期16卷 97-99页

作者：张桂林刘斌党荣理米拉新疆军区疾病预防控制中心乌鲁木齐830011

为调查新疆北湾地区刺扰伊蚊的吸血习性，2004～2005年6～8月在蚊虫活动高峰季节，在新疆额尔齐斯河下游北湾地区，通过采集宿主体表及家畜棚舍内蚊虫，每旬调查一次刺扰伊蚊在人房、猪舍内的密度，以人、马、牛为饵进行诱捕和调查昼夜... 详细信息

为调查新疆北湾地区刺扰伊蚊的吸血习性，2004～2005年6～8月在蚊虫活动高峰季节，在新疆额尔齐斯河下游北湾地区，通过采集宿主体表及家畜棚舍内蚊虫，每旬调查一次刺扰伊蚊在人房、猪舍内的密度，以人、马、牛为饵进行诱捕和调查昼夜24h吸血节律等方式，研究北湾地区优势蚊种刺扰伊蚊的吸血宿主、吸血趋性以及吸血节律。调查发现，北湾地区刺扰伊蚊在野外蚊虫种群数量组成中占89．61％，在猪舍内占90．78％，在人房内占55．20％，表明刺扰伊蚊主要栖息活动在野外以及家畜棚舍内。吸血趋性实验表明，刺扰伊蚊的吸血宿主广泛，人和马、牛、猪等家畜血液兼吸，并且偏嗜马、牛、猪血；日落前1h，刺扰伊蚊对人、马、牛的趋吸比例为1：18．58：9．84，人、马在1天中平均的趋吸比例为1：38．67。刺扰伊蚊在白天和夜晚都有吸血活动，但呈现出规律的晨、昏峰，晨峰最高峰在日出前1h，昏峰最高峰在日落后1h。研究表明刺扰伊蚊对人畜的刺叮危害十分严莺，在当地蚊虫刺叮吸血高峰时间应加强室内外人员的个体防护以及对家禽家畜的保护。

关键词：刺扰伊蚊吸血习性北湾地区新疆

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臭虫吸血习性的实验观察

铁道医学 1984年第1期 26-28页

作者：黎明达顾咏楠胡修元南京铁道医学院寄生虫教研室南京市卫生防疫站

本文观察了饲养的温带臭虫对12种动物的吸血习性,结果除羊及蟾蜍外,都有较高的吸血率,其中以鸟禽类吸血率高(100％),且饱血时间短(0.5～10分钟),其次为啮齿类及豚鼠。各龄臭虫的吸血活力以幼龄若虫为最强,随龄期的增长而递减。吸血后的... 详细信息

本文观察了饲养的温带臭虫对12种动物的吸血习性,结果除羊及蟾蜍外,都有较高的吸血率,其中以鸟禽类吸血率高(100％),且饱血时间短(0.5～10分钟),其次为啮齿类及豚鼠。各龄臭虫的吸血活力以幼龄若虫为最强,随龄期的增长而递减。吸血后的体重较吸血前增加到2.01～4.85倍。血液消化时间最短者3天(室温26～30℃),一般在一周左右,长的达13天。影响吸血的因素以温度为最重要。

关键词：臭虫动物吸血率吸血习性实验观察