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中国科学(B辑化学生物学农学医学地学) 1985年第11期 997-1003页

作者：夏天辉焦瑞身中国科学院上海植物生理研究所

本文证明吸水链霉菌井冈变种产生一重要的农用抗生素——井冈霉素,生物合成中抗生素产量与菌体谷氨酰胺合成酶有正相关性,因此我们对这一酶进行了纯化,并研究了它的理化性质和调节特征。此酶分子量为530000,亚基分子量为43000;电子显微... 详细信息

本文证明吸水链霉菌井冈变种产生一重要的农用抗生素——井冈霉素,生物合成中抗生素产量与菌体谷氨酰胺合成酶有正相关性,因此我们对这一酶进行了纯化,并研究了它的理化性质和调节特征。此酶分子量为530000,亚基分子量为43000;电子显微镜观察结果证明酶由十二个亚基组成,呈双层正六角形排列,酶活力最适pH为7.2,并需Mg2+或Mn2+作为辅因子。此酶受代谢产物的反馈抑制和积累反馈抑制;同时也受腺苷酰化和去腺苷酰化的共价键调节,即当酶处在腺苷酰化状态,保持低活性,去除腺苷酰基后可恢复其高活性,这一结果为谷氨酰胺合成酶共价键修饰存在于革兰氏阳性细菌提供了有力的例证。

关键词：吸水链霉菌井冈变种代谢产物代谢物井冈霉素连接酶谷氨酰胺合成酶反馈抑制发酵培养基酶活性酶活力电镜电子显微镜

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井冈霉素产生菌——吸水链霉菌井冈变种氮代谢的研究

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中国抗生素杂志 1986年第5期11卷 439-443页

作者：夏天辉焦瑞身中国科学院上海植物生理研究所中国科学院上海植物生理研究所上海

在有机培养基中补加NH4~+,能促进菌体的生长,但明显地抑制井冈霉素的生物合成,并且在发酵过程中,NH4~+的早期加入比后期加入的抑制作用更为强烈,指明NH4~+对此抗生素的抑制作用主要发生在其合成的前期。对几种氮同化酶的测定分析表明,... 详细信息

在有机培养基中补加NH4~+,能促进菌体的生长,但明显地抑制井冈霉素的生物合成,并且在发酵过程中,NH4~+的早期加入比后期加入的抑制作用更为强烈,指明NH4~+对此抗生素的抑制作用主要发生在其合成的前期。对几种氮同化酶的测定分析表明,培养基中过量的NH4~+能显著提高ADH比活力,而明显抑制GS比活力。GDH和GOGAT在无细胞抽出液中的活力都较低。利用火箭免疫电泳测得,高NH4~+浓度培养条件下,GS在菌体内的含量少于低NH4~+条件下的含量,显然NH4~+不但抑制GS活性,而且还阻遏GS蛋白的合成。利用蛋白质合成抑制剂发现,NH4~+能显著诱导ADH产生。以上结果证明GS和ADH是吸水链霉菌井冈变种氮的主要同化酶,低NH4~+时以前者为主,高NH4~+时以后者为主;同时,井冈霉素的产生与菌体中GS有正的相关性。

关键词：井冈霉素吸水链霉菌井冈变种产生菌比活力生物合成生化反应 ADH GS NH 氮代谢

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甲基磺酸乙酯对吸水链霉菌井冈变种的诱变效应

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中国抗生素杂志 1983年第3期 188-189页

作者：颜亨宸上海生物化学制药厂上海

随着生物化学、微生物遗传学等学科的发展,微生物育种方法也逐步繁衍起来。例如选育抗有毒前体类似物及抗有毒前体的突变株;选育抗代谢物类似物及抗代谢物的突变株,选育营养缺陷型突变株及其回复突变株,药物抗性突变株,代谢合成支路途... 详细信息

随着生物化学、微生物遗传学等学科的发展,微生物育种方法也逐步繁衍起来。例如选育抗有毒前体类似物及抗有毒前体的突变株;选育抗代谢物类似物及抗代谢物的突变株,选育营养缺陷型突变株及其回复突变株,药物抗性突变株,代谢合成支路途经障碍性突变株以及遗传重组技术的应用等等在微生物育种上均有报道。微生物育种方法虽多,但是在抗生素菌种选育中,最常规的而又最有成效的育种方法还是应用诱变剂处理,单菌落分离,随机选择单菌落进摇瓶发酵,测定发酵液中抗生素活性高低。通过此法育种,除了选用最有效的诱变剂和注意出发菌株的选择外,诱变实验条件和方法也是不可忽视的。不同实验操作,其实验结果

关键词：菌落桔黄色诱变剂诱变效应吸水链霉菌井冈变种斜面孢子摇瓶发酵分离现象

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井冈霉素高产菌株的诱变育种与发酵条件的研究

井冈霉素高产菌株的诱变育种与发酵条件的研究

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作者：张茜茜湖北工业大学

学位级别：硕士

井冈霉素是氨基糖苷类农用抗生素,由吸水链霉菌井冈变种(Streptomyces hygroscopicus *** yen)发酵产生。井冈霉素能有效地防治水稻纹枯病,成本低,高效、安全,使用30余年未发现抗性,是当今产量和使用面积最大的农用抗生素,它的开发利用... 详细信息

井冈霉素是氨基糖苷类农用抗生素,由吸水链霉菌井冈变种(Streptomyces hygroscopicus *** yen)发酵产生。井冈霉素能有效地防治水稻纹枯病,成本低,高效、安全,使用30余年未发现抗性,是当今产量和使用面积最大的农用抗生素,它的开发利用具有良好的经济效益和社会效益。受武汉科诺生物科技股份有限公司委托,本论文对井冈霉素产生菌的诱变和选育等方面进行了系统的研究,主要完成了一下几个方面的工作,并得到了相关结论。以KN-16为出发菌株进行紫外线诱变、60Coγ射线诱变、亚硝酸-紫外复合诱变这一系列的逐级诱变,发现井冈霉素产生菌对紫外,60Coγ射线敏感,对亚硝酸敏感度较弱,且每级诱变均能不同程度地提高井冈霉素产生菌的产能,并确定了最适的诱变剂量。通过对KN-16的逐级诱变选育,分别得到了诱变株U-17、Co-40和F-87,其产量较出发菌株分别提高了21.0%、22.2%和27.4%。真正的高产菌株必须具备很强的对自身产物的耐受性,一个菌株的生产能力与耐自身抗生素的浓度是成正比的,因此,抗自身产物能力是高产菌株的特性之一。本文研究了平板培养基中井冈霉素A的浓度对生产菌株的影响,发现平板中井冈霉素A的浓度达到3%时会抑制菌株的生长。通过紫外诱变的手段,结合在平板上进行耐自身产物抗性突变株的理性化筛选,得到比KN-16产量提高了的多株诱变菌,其中高产菌株k-101,摇瓶发酵井冈霉素A的产量达到了2.39%,比出发菌株KN-16产量提高了33.5%,且该菌株遗传性能稳定。通过进一步筛选,得到另一株高产菌株k-121,摇瓶发酵产素能力比k-101要高出30%。通过KN-16的15L发酵罐发酵,了解了井冈霉素产生菌发酵过程中总糖、葡萄糖、氨基氮、溶氧、pH和井冈霉素A产物合成等参数的变化规律及发酵过程中培养基粘度的变化和泡沫的变化等规律,为诱变所得高产菌株k-121的发酵做了前期准备。在15L发酵罐KN-16发酵生产井冈霉素A的产量可达到1.91%,比摇瓶的1.76%要高出8.5%。对k-121发酵培养基进行优化,得到了发酵培养基中大米粉、豆粕、花生粕和KH2PO4的最佳组合为大米粉10%、豆粕1%、花生粕1%、KH2PO40.3%。其中,大米粉浓度是影响k-121井冈霉素A产量的主要因素。最后,通过15L发酵罐发酵,比较了KN-16和k-121发酵过程参数变化的相同和不同处。其中k-121 15L发酵罐发酵最高产量可达2.62%。

关键词：吸水链霉菌井冈变种井冈霉素A 诱变育种发酵

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