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吸水链霉菌HS023 milF基因敲除构建产5-酮米尔贝霉素基因工程菌

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微生物学报 2015年第1期55卷 107-113页

作者：黄隽林甲檀周敏白骅浙江海正药业股份有限公司浙江台州318000

【目的】通过敲除吸水链霉菌HS023的mil F基因,构建产5-酮米尔贝霉素的基因工程菌。【方法】构建mil F基因敲除质粒p MSST-Δmil F,转入米尔贝霉素产生菌——吸水链霉菌HS023,获得mil F基因敲除的双交换突变株F2-18。【结果】发酵结果表... 详细信息

【目的】通过敲除吸水链霉菌HS023的mil F基因,构建产5-酮米尔贝霉素的基因工程菌。【方法】构建mil F基因敲除质粒p MSST-Δmil F,转入米尔贝霉素产生菌——吸水链霉菌HS023,获得mil F基因敲除的双交换突变株F2-18。【结果】发酵结果表明:mil F基因敲除突变株F2-18不再产生米尔贝霉素,仅产生中间产物5-酮米尔贝霉素,且发酵单位较出发菌株略有提升。【结论】通过敲除mil F基因,发酵可生产5-酮米尔贝霉素,并直接用于驱虫药米尔贝肟和乐平霉素的化学合成,可大大简化从米尔贝霉素到米尔贝肟和乐平霉素的合成步骤。

关键词：吸水链霉菌基因milF 基因敲除 5-酮米尔贝霉素

吸水链霉菌BS-112产生的抗真菌活性物质的分离纯化与结构鉴别

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微生物学报 2011年第2期51卷 224-232页

作者：张楠孙长坡宋振国辉张本峰仇念全刘训理山东农业大学生命科学学院泰安271018 国家粮食局科学研究院北京100037 山东农业大学林学院泰安271018

【目的】分离纯化吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)BS-112产生的抗真菌活性物质,究明各活性组分的结构,测定其对黄曲霉的抑制作用,为该菌株及其产生的抗真菌活性物质的应用提供依据。【方法】通过大孔吸附树脂柱层析、硅胶柱层... 详细信息

【目的】分离纯化吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)BS-112产生的抗真菌活性物质,究明各活性组分的结构,测定其对黄曲霉的抑制作用,为该菌株及其产生的抗真菌活性物质的应用提供依据。【方法】通过大孔吸附树脂柱层析、硅胶柱层析及制备HPLC等方法,对该菌株产生的抗真菌活性物质进行分离纯化;利用质谱(MS)和核磁共振谱(NMR)解析各活性组分的结构;采用微量液体稀释法测定各活性组分对黄曲霉的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC)。【结果】从BS-112菌株发酵液中分离获得4个抗真菌活性组分,利用波谱技术确定其结构分别为Tetrins A和B、Tetramycins A和B。96孔板法测得这4个化合物对黄曲霉的MIC分别为3.13μg/mL、12.56μg/mL、1.56μg/mL、6.25μg/mL,MFC分别为6.25μg/mL、25.0μg/mL、3.13μg/mL、12.56μg/mL。【结论】BS-112菌株产生的抗真菌活性物质由Tetrins A和B、Ttramycins A和B 4个化合物组成,它们对黄曲霉均具有良好的抑制作用。

关键词：吸水链霉菌抗真菌活性物质分离纯化结构鉴别

吸水链霉菌谷氨酰胺转胺酶基因的阻断及其对细胞分化的影响

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微生物学报 2010年第12期50卷 1626-1632页

作者：陈康康刘松鞠晓辉马腾博张东旭堵国成陈坚江南大学食品科学与技术国家重点实验室无锡214122 江南大学工业生物技术教育部重点实验室无锡214122

【目的】通过对吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)中谷氨酰胺转胺酶基因的阻断,以期深入了解谷氨酰胺转胺酶生理功能,并为谷氨酰胺转胺酶发酵优化提供新的研究思路。【方法】以温敏型质粒pKC1139为出发质粒,构建阻断吸水链霉菌谷... 详细信息

【目的】通过对吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)中谷氨酰胺转胺酶基因的阻断,以期深入了解谷氨酰胺转胺酶生理功能,并为谷氨酰胺转胺酶发酵优化提供新的研究思路。【方法】以温敏型质粒pKC1139为出发质粒,构建阻断吸水链霉菌谷氨酰胺转胺酶编码基因的重组质粒pKC1139-TG1,转化吸水链霉菌原生质体,通过抗性筛选和PCR验证,成功得到一株谷氨酰胺转胺酶阻断菌株,命名为S.h-△TG。【结果】以原始菌株为对照,重组子基内菌丝生长不受影响,但是由基内菌丝分化形成气生菌丝的过程受到影响,重组子基本不产气生菌丝。【结论】谷氨酰胺转胺酶对吸水链霉菌气生菌丝的形成有着重要的影响,参与链霉菌气生菌丝的形成。

关键词：吸水链霉菌谷氨酰胺转胺酶基因阻断菌丝分化

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吸水链霉菌应城变种质粒的分离研究

中国抗生素杂志 1992年第1期17卷 21-25,41页

作者：史贤明周启华中农业大学农用抗生素研究室

采用蔗糖浓度为13％的YEME培养基培养吸水链霉菌应城变种10-22菌株,能获得生长量较高且分散状况良好的菌丝体。在探索链霉菌质粒DNA的分离方法时,以***的方法为基础,提高国产溶菌酶的用量和延长酶解时间,首次从吸水链霉菌应城变种中分... 详细信息

采用蔗糖浓度为13％的YEME培养基培养吸水链霉菌应城变种10-22菌株,能获得生长量较高且分散状况良好的菌丝体。在探索链霉菌质粒DNA的分离方法时,以***的方法为基础,提高国产溶菌酶的用量和延长酶解时间,首次从吸水链霉菌应城变种中分离到一种质粒DNA分子,将它命名为pSH_(47)。同时,通过pock形成能力的检测。进一步证实这个质粒的存在。吸水链霉菌应城变种10-22菌株经吖啶橙处理后获得的部分或全部丧失5102抗生素生物合成能力的几个阻遏突变株的质粒检测结果表明,它们都有与10-22菌株相同的质粒带。

关键词：吸水链霉菌质粒pSH47 质粒

吸水链霉菌NND-52菌株胞内抗生素M1分离、纯化及结构确定

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中国抗生素杂志 2001年第3期26卷 161-170,203页

作者：严淑玲黄为一王世梅武济民南京农业大学微生物学系南京210095 中国科学院上海药物研究所上海200232

吸水链霉菌 NND- 5 2菌丝体 ,经溶媒浸提 ,粗结晶 ,梯度洗脱的硅胶柱层析分离 ,纯化 ,得到主要组分 M1,通过对其基本理化性质分析和 UV、IR、1 H- NMR、1 3C- NMR、DEPT等波谱分析 ,确定其结构与阿扎霉素 B相同。

关键词：吸水链霉菌分离结构阿扎霉素B 非典型大环内酯抗生素

吸水链霉菌抗金黄色葡萄球菌代谢产物(英文)

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应用与环境生物学报 2010年第2期16卷 261-263页

作者：龚雨梅陈军杨涛李宗珍李国友中国科学院成都生物研究所成都610041 成都地奥集团药物研究所成都610041

通过活性跟踪,从吸水链霉菌1.358(Streptomyces hygroscopicus 1.358)发酵液的乙酸乙酯萃取物中分离得到3个化合物(1～3).利用波谱技术,这些化合物分别鉴定为抗生素RK955A(1)、尼日尼亚菌素(2)和阿扎霉素(3).化合物1～3具有显著的抗金... 详细信息

通过活性跟踪,从吸水链霉菌1.358(Streptomyces hygroscopicus 1.358)发酵液的乙酸乙酯萃取物中分离得到3个化合物(1～3).利用波谱技术,这些化合物分别鉴定为抗生素RK955A(1)、尼日尼亚菌素(2)和阿扎霉素(3).化合物1～3具有显著的抗金黄色葡萄球菌活性.

关键词：金黄色葡萄球菌吸水链霉菌尼日尼亚菌素阿扎霉素次生代谢产物抗菌活性

吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus 17997中噬菌体基因转移系统的建立及其应用

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生物工程学报 2003年第4期19卷 407-411页

作者：高慧英王以光高群杰尚广东孙桂芝杨樱中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所北京100050

由吸水链霉菌Streptomyceshygroscopicus 17997产生的格尔德霉素geldanamycin(GA)属安莎类抗生素 ,具有良好的抗肿瘤和抗病毒活性。本文应用链霉菌温和噬菌体C3 1衍生的KC5 15载体 ,在吸水链霉菌S .hygroscopicus17997中建立并优化了S... 详细信息

由吸水链霉菌Streptomyceshygroscopicus 17997产生的格尔德霉素geldanamycin(GA)属安莎类抗生素 ,具有良好的抗肿瘤和抗病毒活性。本文应用链霉菌温和噬菌体C3 1衍生的KC5 15载体 ,在吸水链霉菌S .hygroscopicus17997中建立并优化了S .hygroscopicus 17997的基因转染体系。利用所建立的基因转染体系 ,以基因阻断技术从S .hygroscopicus 17997基因文库含有多组PKS基因柯斯质粒中 ,鉴定了与GAPKS生物合成相关基因的柯斯质粒。

关键词：吸水链霉菌噬菌体基因转移系统应用基因阻断格尔德霉素生物合成基因

吸水链霉菌ATCC 29253产Hygrocin A发酵条件的优化

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微生物学通报 2018年第1期45卷 146-154页

作者：李全乐管仁艳何璟陈浩李胜清华中农业大学理学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

【背景】Hygrocins是一种萘安莎抗生素,具有良好的新药开发潜能。但在常见培养基及发酵条件下菌体内Hygrocin A含量一般很低,甚至难以直接进行准确检测。【目的】提高吸水链霉菌ATCC 29253发酵物中Hygrocin A的产量。【方法】采用单因... 详细信息

【背景】Hygrocins是一种萘安莎抗生素,具有良好的新药开发潜能。但在常见培养基及发酵条件下菌体内Hygrocin A含量一般很低,甚至难以直接进行准确检测。【目的】提高吸水链霉菌ATCC 29253发酵物中Hygrocin A的产量。【方法】采用单因素与正交试验设计优化相结合的方法系统考察碳源、氮源、磷酸盐、MgCl_2浓度、NaCl浓度、种子菌龄等因素对吸水链霉菌ATCC 29253产Hygrocin A能力的影响。【结果】最佳发酵条件为(g/L):葡萄糖4.0,黄豆饼粉8.0,麦芽提取物10.0,K_2HPO_4 1.5,KH_2PO_4 1.5,NaCl 1.5,Mg Cl2 1.0;种子最佳活化时间为48 h;培养参数:摇床转速200 r/min,初始pH为6.8-7.0,瓶装量50 m L/250 m L,接种量5%,30°C培养10 d。在优化条件下,Hygrocin A产量与其原始培养基M10相比提高了500%,Rapamycin产量同时下降了95%。【结论】通过培养基优化,可显著提高吸水链霉菌ATCC 29253中Hygrocin A产量,为Hygrocin A合成应用研究奠定基础,同时可使Rapamycin产量明显下降。这说明可通过选择培养条件有目的地调节两种抗生素的代谢通量,进而开展多种抗生素同时表达的代谢调控研究。

关键词：吸水链霉菌 Hygrocin A Rapamycin 发酵优化正交试验设计

吸水链霉菌应城变种10-22中一个复制子的克隆和基本复制区的定位

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生物工程学报 1990年第3期6卷 188-194页

作者：邓子新周秀芬华中农业大学土化系农抗研究室

利用由pBR322衍生的链霉菌复制子探针载体pIJ2703,从吸水链霉菌应城变种菌株10-22中克隆了一段13kb的可以自主复制的DNA,制作了携带这段DNA的杂合质粒pHZ54的限制酶图谱。利用缺失、次级克隆等方法将基本复制区确定在2.86kb的范围内。... 详细信息

利用由pBR322衍生的链霉菌复制子探针载体pIJ2703,从吸水链霉菌应城变种菌株10-22中克隆了一段13kb的可以自主复制的DNA,制作了携带这段DNA的杂合质粒pHZ54的限制酶图谱。利用缺失、次级克隆等方法将基本复制区确定在2.86kb的范围内。用外切酶Ⅲ顺序缺失法不仅进一步确证了基本复制区的位置,而且将其缩小到2kb的范围内。同时,在上述试验过程中、还组建了一系列既可在大肠杆菌、又可在变铅青链霉菌中复制的双功能质粒,其中有些质粒是有用的穿梭载体。

关键词：吸水链霉菌复制子探针基本复制子