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同种心脏瓣膜的组织工程学研究

中华胸心血管外科杂志 2005年第1期21卷 56-57页

作者：崔彬刘迎龙中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院先心病研究室北京100037

同种心脏瓣膜广泛应用于瓣膜置换手术及矫治婴幼儿复杂先天性心脏病(先心病)手术中,取得良好的疗效.但远期随访易钙化、毁损,再次移植率提高,婴幼儿更为显著.研究表明,同种心脏瓣膜移植于体内可激发免疫反应,供体特异性HLA-I、II抗体,... 详细信息

同种心脏瓣膜广泛应用于瓣膜置换手术及矫治婴幼儿复杂先天性心脏病(先心病)手术中,取得良好的疗效.但远期随访易钙化、毁损,再次移植率提高,婴幼儿更为显著.研究表明,同种心脏瓣膜移植于体内可激发免疫反应,供体特异性HLA-I、II抗体,特异性高亲和性细胞毒性T淋巴细胞前体,外周血中辅助性T淋巴细胞的表达均显著增高,且与瓣叶的毁损、钙化有显著相关性[1-3]。

关键词：同种心脏瓣膜组织工程学研究复杂先天性心脏病辅助性T淋巴细胞瓣膜置换手术心脏瓣膜移植远期随访免疫反应细胞前体细胞毒性婴幼儿特异性手术中先心病移植率 HLA 亲和性外周血相关性钙化毁损

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去细胞同种心脏瓣膜的再内皮细胞化

中国组织工程研究与临床康复 2007年第23期11卷 4580-4582页

作者：崔彬刘迎龙于存涛谢宁宋来凤中国医学科学院中国协和医科大学阜外心血管病医院心血管外科北京市100037 中国医学科学院中国协和医科大学阜外心血管病医院病理科北京市100037

目的:初步构建受体内皮细胞化的组织工程同种心脏瓣膜,减轻移植后免疫排斥反应,并探讨内皮细胞适宜的种植方法,增强内皮细胞与细胞外基质的黏附性。方法:实验于2004-06在阜外医院心血管外科先心病研究室完成。①实验材料:取冠状动脉搭... 详细信息

目的:初步构建受体内皮细胞化的组织工程同种心脏瓣膜,减轻移植后免疫排斥反应,并探讨内皮细胞适宜的种植方法,增强内皮细胞与细胞外基质的黏附性。方法:实验于2004-06在阜外医院心血管外科先心病研究室完成。①实验材料:取冠状动脉搭桥患者术中剩余的大隐静脉(该材料是术中多余弃掉部分,患者知情同意),研究方案获伦理委员会批准。②实验方法:采用低渗液-去污剂(10g/L去氧胆酸)-核酸酶法去除同种心脏瓣膜组织中的全部细胞成分,构建去细胞的同种心脏瓣膜;取培养3～4代的成人大隐静脉内皮细胞,依照内皮细胞密度分为生理密度种植组:以1.5×108L-1密度种植;超生理密度种植组:以(4～5)×108L-1密度种植;生理密度反复种植组:以1.5×108L-1密度,反复种植3d。③实验评估:种植于脱去全部细胞的同种心脏瓣膜上,静态培养5d,扫描电镜观察内皮细胞的覆盖情况。结果:去细胞同种心脏瓣膜的细胞外基质有着良好的细胞黏附性;3种不同的内皮细胞种植密度,其中以内皮细胞超密度(4～5)×108L-1种植,静态培养5d,同种组织瓣膜表面基本覆盖单层内皮细胞,细胞间相互延伸汇合,形态结构良好。以生理密度种植内皮细胞覆盖率较低,细胞大多孤立存在,细胞间较少相互延伸汇合。生理密度反复种植3d,内皮细胞覆盖率低于超生理密度种植组,细胞间可见相互延伸汇合,细胞形态结构良好。结论:去细胞同种心脏瓣膜的再内皮细胞化保留了同种心脏瓣膜的正常结构、功能及良好的组织相容性,有望延长瓣膜的使用寿命,取得更好的临床疗效。

关键词：组织工程同种心脏瓣膜内皮细胞化组织构建

自体内皮细胞化组织工程同种心脏瓣膜的初步构建

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中华外科杂志 2005年第6期43卷 370-371页

作者：崔彬刘迎龙于存涛谢宁宋来凤中国医学科学院心血管病研究所中国协和医科大学阜外心血管病医院先心病研究室北京100037 中国医学科学院心血管病研究所中国协和医科大学阜外心血管病医院病理科北京100037

同种心脏瓣膜以优良的生理特性及组织结构特点广泛应用于瓣膜替换手术及婴幼儿复杂先心病矫治术中,取得良好的临床疗效,但远期易出现钙化、毁损,因而再次移植率较高.2002年3月至2003年12月本研究应用组织工程学方法改良同种心脏瓣膜,构... 详细信息

同种心脏瓣膜以优良的生理特性及组织结构特点广泛应用于瓣膜替换手术及婴幼儿复杂先心病矫治术中,取得良好的临床疗效,但远期易出现钙化、毁损,因而再次移植率较高.2002年3月至2003年12月本研究应用组织工程学方法改良同种心脏瓣膜,构建新型的自体内皮细胞化的组织工程同种心脏瓣膜,以减轻移植后免疫排斥反应,延长瓣膜使用寿命。

关键词：自体内皮细胞化组织工程同种心脏瓣膜瓣膜替换手术免疫排斥反应心脏移植

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去细胞组织工程同种心脏瓣膜的生物学特征

中华胸心血管外科杂志 2004年第3期20卷 158-160页

作者：崔彬刘迎龙谢宁于存涛宋来凤中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院先心病研究室 100037 中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院病理科 100037

目的　构建去细胞组织工程同种心脏瓣膜 ,对比研究同种心脏瓣膜去细胞前后的生物学特征。方法　取液氮保存的人同种主动脉带瓣管道 ,采用低渗液 -去污剂 ( 1%DOA) -核酸酶去细胞法 ,测定去细胞前后组织学、组织厚度、组织含水量、热皱... 详细信息

目的　构建去细胞组织工程同种心脏瓣膜 ,对比研究同种心脏瓣膜去细胞前后的生物学特征。方法　取液氮保存的人同种主动脉带瓣管道 ,采用低渗液 -去污剂 ( 1%DOA) -核酸酶去细胞法 ,测定去细胞前后组织学、组织厚度、组织含水量、热皱缩温度、组织基因组DNA含量、胶原蛋白含量。结果　同种心脏瓣膜、管壁及肌肉组织中去除所有细胞成分 ,保留了完整的细胞外基质。与去细胞前相比 ,管壁组织的含水量 [( 75 4 4± 1 84 ) %对 ( 82 0 5± 0 71) % ,P 同种组织工程心脏瓣膜生物学特性稳定 ,符合机体要求 ;

关键词：去细胞组织工程同种心脏瓣膜生物学特征生物假体人工心脏瓣膜

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同种心脏瓣膜及带瓣血管的研究及应用

继续医学教育 2006年第10期20卷 71-74页

作者：张兆光孙广龙首都医科大学附属北京安贞医院心脏外科 100029

1同种瓣的发展历史及生物学特点自1966年Ross首次应用同种异体主动脉治疗1例肺动脉闭锁病人获得成功后,经过了几十年的发展,保存手段不断改进,使同种瓣临床应用的疗效不断发展,由于与机械瓣和生物瓣相比具有更好的血流动力学特性,越来... 详细信息

1同种瓣的发展历史及生物学特点自1966年Ross首次应用同种异体主动脉治疗1例肺动脉闭锁病人获得成功后,经过了几十年的发展,保存手段不断改进,使同种瓣临床应用的疗效不断发展,由于与机械瓣和生物瓣相比具有更好的血流动力学特性,越来越受到临床的重视。[第一段]

关键词：同种心脏瓣膜血管带瓣临床应用生物学特点肺动脉闭锁动力学特性同种异体 Ross 同种瓣

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免疫原性在同种心脏瓣膜中的研究进展

中西医结合心脑血管病杂志 2007年第10期5卷 982-984页

作者：孙学军张毅勋马捷山西医科大学第二临床医学院

深低温保存后的同种心脏瓣膜以优良的生理特性及组织结构等特点,广泛应用于瓣膜替换手术及婴幼儿复杂先心病矫治术中,并取得良好的临床疗效,有效地减少了由人工瓣膜引起的心内膜炎的发生率,但同种瓣移植后远期钙化毁损、再次移植率高。... 详细信息

深低温保存后的同种心脏瓣膜以优良的生理特性及组织结构等特点,广泛应用于瓣膜替换手术及婴幼儿复杂先心病矫治术中,并取得良好的临床疗效,有效地减少了由人工瓣膜引起的心内膜炎的发生率,但同种瓣移植后远期钙化毁损、再次移植率高。目前认为这是由于其免疫原性及移植后免疫排斥反应所致,同种瓣移植后免疫排斥反应及探讨相应的治疗措施是多年来研究的热点,现就此问题作一综述。[第一段]

关键词：同种心脏瓣膜免疫原性免疫排斥反应瓣膜替换手术深低温保存复杂先心病移植后组织结构

阿托伐他汀对深低温保存心脏瓣膜MHC-Ⅱ分子表达的影响

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阿托伐他汀对深低温保存心脏瓣膜MHC-Ⅱ分子表达的影响

作者：孙学军山西医科大学

学位级别：硕士

第一部分活性同种心脏瓣膜制备与保存过程目的:探讨合适的活性同种心脏瓣膜制备与保存方法。方法:用兔子作为活性同种心脏瓣膜的供体动物,采集实验所需的心脏瓣膜,将供体心脏瓣膜进行一系列处理后深低温保存,保存时间大约为2周,对瓣膜... 详细信息

第一部分活性同种心脏瓣膜制备与保存过程目的:探讨合适的活性同种心脏瓣膜制备与保存方法。方法:用兔子作为活性同种心脏瓣膜的供体动物,采集实验所需的心脏瓣膜,将供体心脏瓣膜进行一系列处理后深低温保存,保存时间大约为2周,对瓣膜进行组织学、破坏强度、组织含水量、热皱缩温度、MHC-Ⅱ抗体的检测。结果:试验供体的兔子心脏瓣膜切除过程中,主动脉瓣膜和二尖瓣整体都保持了结构的完整性;经过深低温保存2周后,瓣膜在生物力学各方面良好,深低温保存后瓣腆组织的内皮细胞有小部分脱落。HE染色显示少许的炎症反应,形念学可见剩余的内皮细胞呈现扁平单层排列,梭形或者多边形,典型的呈“铺路石”状改变;VG+ET显示内皮下暴露的弹力纤维与胶原纤维的排列整齐、均匀、有序,符合瓣膜的受力情况;免疫荧光标记MHC-Ⅱ分子相关抗原的细胞发出特异性的黄绿色荧光;DAPI复染的有核细胞均匀的发出蓝色荧光。结论:该种方法对瓣膜的制备和保存适用、简便、有效,为活性同种心脏瓣膜的制备和保存提供了有效的途径。第二步部分活性同种心脏瓣膜免疫排斥反应的研究目的:构建活性同种心脏瓣膜免疫排斥反应模型,并通过研究瓣膜的组织形态学、物理学、生物力学、免疫学特性,研究免疫排斥反应对瓣膜的影响,利用阿托伐他汀对瓣膜组织的MHC-Ⅱ分子表达的抑制作用,降低活性同种心脏瓣膜免疫排斥反应,减少由于免疫反应引起瓣膜的退化和钙化现象,延长心脏瓣膜移植后寿命。方法:取出经深低温保存后的心脏瓣膜,将16只实验组动物分成4组,分别把主动脉瓣环和二尖瓣环各一半埋置动物的皮下,实验组分别以1mg/kg、3mg/kg、6mg/kg阿托伐他汀灌胃,空白对照组同样方法给等量的生理盐水,给药4周,检测瓣膜的各项指标。结果:试验组和对照组动物伤口愈合良好,对照组皮下埋置的瓣膜包裹现象较实验组明显,瓣膜的组织形态学和MHC-Ⅱ抗体两项中试验组均明显好于对照组,其余各项指标的检测结果也有不同的差异,DAPI复染各组并无显著差异。结论:实验组与对照组相比,在免疫排斥和组织形态学方面都起到了保护的作用,阿托伐他汀对由MHC-Ⅱ分子引起的同种心脏瓣膜移植后排斥反应有抑制作用。

关键词：深低温保存同种心脏瓣膜 MHC-II分子免疫反应

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两种去细胞人心脏瓣膜的免疫原性分析

中国胸心血管外科临床杂志 2015年第5期22卷 471-475页

作者：崔彬刘重阳中国医学科学院北京协和医学院国家心脏病中心心血管病研究所阜外心血管病医院北京100037

目的应用组织工程学方法去除人同种心脏瓣膜(HV)的内皮细胞成分或全部细胞成分,比较两种去细胞HV的免疫原性变化。方法采用低渗液-去污剂(1%Triton)-核酸酶[1μg/ml核糖核酸酶(RNase)和10μg/ml去氧核糖核酸酶(DNase)]去细胞法去除HV表... 详细信息

目的应用组织工程学方法去除人同种心脏瓣膜(HV)的内皮细胞成分或全部细胞成分,比较两种去细胞HV的免疫原性变化。方法采用低渗液-去污剂(1%Triton)-核酸酶[1μg/ml核糖核酸酶(RNase)和10μg/ml去氧核糖核酸酶(DNase)]去细胞法去除HV表面的内皮细胞成分,保留间质细胞及细胞外基质结构的完整性;采用低渗液-去污剂(1%去氧胆酸)-核酸酶[20μg/ml RNase和200μg/ml DNase]去细胞法去除HV组织中所有细胞成分,保留完整的细胞外基质。免疫组织化学方法测定HLA-DR抗原在HV组织中的表达;行大鼠皮下移植试验,组织学评价及定性、定量分析组织的钙化程度。结果免疫组织化学结果证实HV去内皮细胞和去全部细胞后组织中HLA-DR抗原表达均下降,但去全部细胞HV的HLA-DR抗原表达下降更为显著。大鼠皮下移植实验结果表明深低温液氮保存HV和去内皮细胞HV组织中有大量炎性细胞浸润,以淋巴细胞为著,管壁组织更为显著;去全部细胞HV炎性反应较轻,仅组织边缘有少量炎性细胞浸润。钙盐染色深低温液氮保存HV和去内皮细胞HV组织中可见钙盐沉积,呈现大量黑色颗粒,管壁组织更为显著;而去全部细胞HV组织中钙盐沉积极少。原子吸收光谱法定量分析结果表明去全部细胞HV组织中钙离子含量明显低于去内皮细胞HV和深低温液氮保存HV(P0.05)。结论去全部细胞HV组织免疫原性显著下降,移植后炎性反应和组织钙化程度显著减轻。去内皮细胞HV组织免疫原性及移植后炎性反应有所下降,但移植后组织钙化程度仍显著增高,且管壁组织钙盐含量增高较瓣叶组织更加显著,提示组织中大量的间质细胞可能是参与HV移植后免疫反应、导致HV移植后钙化毁损的主要组织成份。

关键词：同种心脏瓣膜免疫原性去细胞钙化人

热缺血和抗生素保存液对同种心瓣膜及主动脉活性的影响

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中华胸心血管外科杂志 1994年第3期10卷 265-266页

作者：易定华俞世强刘维永张近宝西安西京医院心胸外科

研究不同热缺血时间对ＳＤ大鼠主动脉细胞活性的影响，以及应用改良抗生素液处理人尸主动脉及其瓣膜在４℃和－１９６℃下保存的细胞活性和组织结构的变化，结果显示，随着热缺血时间延长，尤其６ｈ以后，鼠主动脉细胞活性明显减低，经... 详细信息

研究不同热缺血时间对ＳＤ大鼠主动脉细胞活性的影响，以及应用改良抗生素液处理人尸主动脉及其瓣膜在４℃和－１９６℃下保存的细胞活性和组织结构的变化，结果显示，随着热缺血时间延长，尤其６ｈ以后，鼠主动脉细胞活性明显减低，经低浓度改良抗生素液处理，４℃保存６周和－１９６℃保存半年后，同种主动脉及瓣膜比对照组有更好的细胞活性和组织结构，更适合临床应用要求。

关键词：主动脉细胞同种心脏瓣膜细胞活性