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白斑综合症病毒基因组同源重复区结合蛋白WSSV021的鉴定

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台湾海峡 2009年第2期28卷 205-209页

作者：朱艳冰集美大学生物工程学院福建厦门361021

利用噬菌体展示技术,发现wssv021是与病毒基因组同源重复区中一个包含高度保守结构域的小重复片断DNA结合的蛋白质的编码基因,可能参与病毒复制或调控.时相转录分析发现,wssv021属于病毒感染的早期基因.将wssv021基因克隆到pQE-30表达载... 详细信息

利用噬菌体展示技术,发现wssv021是与病毒基因组同源重复区中一个包含高度保守结构域的小重复片断DNA结合的蛋白质的编码基因,可能参与病毒复制或调控.时相转录分析发现,wssv021属于病毒感染的早期基因.将wssv021基因克隆到pQE-30表达载体,在***1-Blue中进行融合表达.凝胶阻滞分析显示,体外表达的(His)6-WSSV021蛋白可以和同源重复区中小重复片断DNA特异性相互作用.

关键词：对虾白斑综合症病毒同源重复区 wssv021基因蛋白质鉴定

斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型同源重复区的增强子功能分析

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蚕业科学 2019年第4期45卷 537-541页

作者：刘惠芬刘文光衣葵花张志芳李云芝郭光山东省蚕业研究所山东烟台264002 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型(SpltNPVⅡ)基因组DNA含有7个同源重复区(hr)。采用脂质体介导转染法和瞬时表达实验对7个hr在异源病毒感染的BmN和Sf21细胞中增强异源ie1启动子转录活性的功能进行分析。结果表明,除hr5外,SpltNPVⅡhr均能增... 详细信息

斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型(SpltNPVⅡ)基因组DNA含有7个同源重复区(hr)。采用脂质体介导转染法和瞬时表达实验对7个hr在异源病毒感染的BmN和Sf21细胞中增强异源ie1启动子转录活性的功能进行分析。结果表明,除hr5外,SpltNPVⅡhr均能增强BmNPV ie1启动子的转录活性,其中hr1、hr4和hr7增强效率较高,为对照的30~40倍;7个hr均能显著增强AcMNPV ie1启动子的转录活性,其中hr7增强效率高达1 246倍,其余增强效率在17~538倍之间。另外,SpltNPVⅡhr增强异源ie1启动子转录活性的效率与其所含的正反向重复序列、回文序列以及与复制相关的基序等特征结构的数目存在显著的正相关。

关键词：斜纹夜蛾核型多角体病毒同源重复区增强子

家蚕杆状病毒同源重复区hr3结构与功能分析及不同转移载体表达效率比较

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家蚕杆状病毒同源重复区hr3结构与功能分析及不同转移载体表达效...

作者：朱中泽中国农业科学院

学位级别：硕士

在杆状病毒(baculovirus)生命循环中，DNA复制是中心环节，杆状病毒基因组中的同源重复区(homologous regions，hr3)具有复制起始位点的功能，在杆状病毒基因转录过程中也可对早期基因行使增强子功能。本研究涉及的hr3来自BmNPV ZJ-8株... 详细信息

在杆状病毒(baculovirus)生命循环中，DNA复制是中心环节，杆状病毒基因组中的同源重复区(homologous regions，hr3)具有复制起始位点的功能，在杆状病毒基因转录过程中也可对早期基因行使增强子功能。本研究涉及的hr3来自BmNPV ZJ-8株，它含有3个重复单位，每个单位含有以EcoRI位点为核心的30bp不完全回文序列及其两侧13bp茎环结构序列组成的72bp保守序列，已证明其具有复制起始位点的功能，并有特异的家蚕细胞因子与之结合。为进一步研究BmNPV hr3对不同病毒极早期基因ie-1启动子的增强子功能及其与宿主细胞的相互关系，本研究分别将BmNPV、AcMNPV的ie-1基因启动子控制下的荧光素酶基因克隆在hr3的上游，构建成瞬时表达报告质粒，在家蚕Bm5、BmN细胞系、秋粘虫sf-21细胞系以及家蚕五龄幼虫中瞬时表达，通过检测荧光素酶活性研究在不同宿主中hr3对ie-1启动子的增强功能。通过带有和不带有hr3序列的瞬时表达报告质粒在细胞系(BmN、Bm5、sf-21)和家蚕五龄幼虫的瞬时表达分析，表明hr3在细胞系和蚕体内对ie-1启动子都有显著增强功能，最高可达6980倍。在三种细胞系中Luciferase基因表达量有差异，但hr3对ie-1启动子的活性的增强倍数大致相当，这说明hr3的增强机理在鳞翅目不同科昆虫细胞中可能是相同的。ie-1启动子的活性相对于多角体基因启动子虽偏低，但却是杆状病毒极早期启动子中活性最强的一个，用它可以使外源基因在病毒感染的极早期就得到表达，寄主细胞较少受病毒影响，表达产物可以得到很好的修饰。本研究中hr3是目前报道功能最强的增强子之一，因此，hr3和ie-1启动子的组合可应用于构建昆虫细胞稳定表达载体和转基因昆虫。本实验首创在家蚕幼虫中通过lipofectin介导，将外源基因导入家蚕血淋巴细胞进行瞬时表达，证明通过lipofectin将外源基因导入家蚕幼虫的可行性，另一方面开创了一种在活体条件下通过瞬时表达研究家蚕杆状病毒复制转录元件的更简易、更经济也可能更为真实的方法。据已知hr3序列含有3个72bp的EcoRI微小片段的特殊结构特点构建出一系列带不同长度的hr3片段(108bp、200bp、700bp)瞬时表达报告质粒，这三种片段各带有：两个被13bp茎环结构序列分隔的半回文序列，一个72bp的EcoRI微小片段，完整的hr3片段，通过在BmN细胞的瞬时表达分析，研究其不同区段的hr3亚结构片段增强子功能，以阐明其结构和功能的相关性，研究发现hr3序列行使增强子功能的结构主要是30bp的不完全回文序列，三个成簇存在的结构单元协同作用。在应用研究方面，为提高杆状病毒表达系统对植酸酶的表达效率，本研究构建了两种不同植酸酶转移表达载体p VLVL13＊正y、p030p叶，通过比双p VLVL1393phv、p030p冲、 pAKphy（本室构建）三种不同转移表达载体的植酸酶表达效率以筛选表达效率最高的转移表达载体，研究发现转移表达载体f，VL1393phy植酸酶表达效率最高。

关键词：杆状病毒同源重复区瞬时表达转移载体

棉铃虫核多角体病毒解螺旋酶（helicase）基因的序列分析和含有HaSNPV同源重复区亚克隆的构建

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棉铃虫核多角体病毒解螺旋酶（helicase）基因的序列分析和含有Ha...

作者：范凌云中国科学院研究生院（武汉病毒研究所）

学位级别：硕士

对棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpa armigerd single-nucleocapsid nucleopolyhedrovirus，HaSNPV)基因组中EcoRI—N片段进行序列分析，获得了完整的解螺旋酶基因(hel)，其开放阅读框大小为3762bp，编码一个分子量为146kDa的蛋白质。在hel起始密码子ATG上游50位有强晚期启动子转录起始信号ATAAG，在—112位和—189位存在两个TATA box，但未发现早期转录信号CAGT。其在终止密码子下游第12位有—PolyA终止信号AATAAA。HaSNPV解螺旋酶与其它5种杆状病毒解螺旋酶相比，有5个基元序列(Ⅰ、Ⅰa、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)保守，另外两个(Ⅴ和Ⅵ)完全不保守。同源性比较发现HaSNPV解螺旋酶的氨基酸序列与甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigue MNPV，SeMNPV)的解螺旋酶具有最高的同源性(66％)，与Xestia c-nigrum颗粒体病毒(XcGV)解螺旋酶同源性最低(43％)，HaSNPV解螺旋酶基因是第一个报道的单粒包埋核多角体病毒的解螺旋酶基因。在HaSNPV基因组中存在5个同源重复区hr,它们可能对病毒的复制和转录调控等起重要作用。对HaSNPV的5个hr区域进行了亚克隆，为进一步的功能研究奠定了基础。

关键词：棉铃虫单核衣壳核多角体病毒解螺旋酶基因同源重复区

斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型分离株同源重复区hr1的结构功能分析

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江苏农业科学 2019年第21期47卷 100-103页

作者：刘惠芬衣葵花刘文光董亚茹张志芳李云芝王安皆山东省蚕业研究所山东烟台264002 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型(Spodoptera litura nucleopolyhedrovirusⅡ,SpltNPVⅡ)基因组DNA同源重复区hr1大小为1746 bp,含有6个64 bp不完全回文序列、4个正向重复序列以及7个与病毒基因组DNA复制相关的基序。瞬时表达分析结果表明,S... 详细信息

斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型(Spodoptera litura nucleopolyhedrovirusⅡ,SpltNPVⅡ)基因组DNA同源重复区hr1大小为1746 bp,含有6个64 bp不完全回文序列、4个正向重复序列以及7个与病毒基因组DNA复制相关的基序。瞬时表达分析结果表明,SpltNPVⅡhr1在感染野生型家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)和苜蓿丫纹夜蛾多粒包埋型核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)的BmN和Sf21细胞中均具有增强早期基因ie1启动子活性的功能,增强效率分别为30、350倍;实时荧光定量PCR结果显示,hr1在BmN和Sf21细胞中具有基因组DNA复制起始原点的功能,拷贝数分别为(8.46×104±6.13×103)、(5.92×106±2.95×105)copies/μg DNA。研究证明,SpltNPVⅡhr1在异源细胞BmN和Sf21中具有复制起始原点和增强子的双功能作用。

关键词：斜纹夜蛾核型多角体病毒同源重复区 hr1

斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型分离株同源重复区hr5的结构功能分析

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山东农业科学 2017年第8期49卷 99-103页

作者：刘惠芬衣葵花刘文光李智峰李云芝山东省蚕业研究所山东烟台264002

对斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ(Splt NPVⅡ)基因组DNA中的同源重复区hr5的结构功能进行研究。结果表明,Splt NPVⅡhr5大小为389 bp,含有3个64 bp不完全回文序列,回文序列的中心均含有1个PvuⅠ限制性酶切位点,并且存在1个与病毒基因组DNA... 详细信息

对斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ(Splt NPVⅡ)基因组DNA中的同源重复区hr5的结构功能进行研究。结果表明,Splt NPVⅡhr5大小为389 bp,含有3个64 bp不完全回文序列,回文序列的中心均含有1个PvuⅠ限制性酶切位点,并且存在1个与病毒基因组DNA复制相关的motif(CGATT)基序。瞬时表达分析表明,hr5在野生型病毒感染和未感染的细胞中均具有增强早期基因ie1启动子活性的功能;实时荧光定量PCR结果显示,hr5在野生型病毒作为辅助病毒时,具有基因组DNA复制起始原点的功能。研究证明Splt NPVⅡhr5具有复制起始原点和增强子的双功能作用。

关键词：斜纹夜蛾核型多角体病毒同源重复区增强子

家蚕核型多角体病毒同源重复区hr5的结构和功能

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中国科学（C辑） 1996年第3期26卷 193-199页

作者：胡建新吴祥甫李载平 PeterHingyatLam 中国科学院上海生物化学研究所上海200031 香港科技大学生物化学系

家蚕核型多角体病毒(BmNPV)和首蓿尺蠖核型多角体病毒(AcMNPV)是宿主不同的同类昆虫杆状病毒.AcMNPV有5个同源重复区,hr5具较强增强子功能,最近被发现可能参与病毒DNA复制.Maeda等曾将BmNPV hrs图谱定位,最近又报道了BmNPV hr s的结构,... 详细信息

家蚕核型多角体病毒(BmNPV)和首蓿尺蠖核型多角体病毒(AcMNPV)是宿主不同的同类昆虫杆状病毒.AcMNPV有5个同源重复区,hr5具较强增强子功能,最近被发现可能参与病毒DNA复制.Maeda等曾将BmNPV hrs图谱定位,最近又报道了BmNPV hr s的结构,但功能研究至今未见报道.与Maeda等同时,从野生型BmNPV基因组中克隆了hr 5区,进行了全序列测定,与Maeda等的报道有一定差别.功能分析证实,含BmNPV hr 5的质粒在辅助病毒存在下,不仅在宿主细胞(BmN)中能进行复制,而且在非宿主细胞 Sf 21中亦能进行复制.此外,不仅完整的BmNPV hr 5(含 8个重复单位),而且部分序列(含6个重复单位)亦显示上述功能.以上研究结果,并对hr 5在病毒 DNA复制过程中可能有的功能进行了探讨.

关键词：昆虫病毒家蚕核型多角体病毒同源重复区

斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ基因组DNA同源重复区生物信息学分析

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现代农业科技 2017年第11期 111-111,123页

作者：刘惠芬刘文光衣葵花张志芳李轶女李云芝山东省蚕业研究所山东烟台264002 中国农业科学院生物技术研究所

利用生物信息学方法,对斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型分离株基因组DNA序列进行分析。结果表明,斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ基因组DNA含有7个同源重复区,分别包含3~8个64 bp不完全回文序列,在回文序列中心均含有一个Pvu I限制性酶切位点,并... 详细信息

利用生物信息学方法,对斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型分离株基因组DNA序列进行分析。结果表明,斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ基因组DNA含有7个同源重复区,分别包含3~8个64 bp不完全回文序列,在回文序列中心均含有一个Pvu I限制性酶切位点,并且存在多个正向或反向互补的重复序列和与病毒基因组DNA复制相关的motif基序,对7个hrs中40个回文序列进行比对分析,发现其序列的核苷酸一致性高达90%以上。

关键词：斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型同源重复区增强子

棉铃虫核型多角体病毒基因组结构及p10基因

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第2期33卷 179-184页

作者：张传溪武家才浙江大学应用昆虫学研究所!杭州310029

用BamHI、EcoRV、HindIII、KpnI、PstI和XbaI六种限制性内切酶消化HaSNPVC1株基因组DNA ,电泳后形成的大于 40 0bp的片段数分别为 11、31、13、6、7和 2 5条。预计整个基因组长度为 130 .7kb左右。构建了HaSNPV基因组 6种限制性内切酶... 详细信息

用BamHI、EcoRV、HindIII、KpnI、PstI和XbaI六种限制性内切酶消化HaSNPVC1株基因组DNA ,电泳后形成的大于 40 0bp的片段数分别为 11、31、13、6、7和 2 5条。预计整个基因组长度为 130 .7kb左右。构建了HaSNPV基因组 6种限制性内切酶的物理图谱 ,并在图谱上定位了 5个同源重复区hr1、hr2、hr3、hr4和hr5以及多角体蛋白 (ph)基因、极早期基因 (ie1)、p10、几丁质酶 (chitinase)基因、DNA聚合酶基因 (DNApol)、解旋酶 (heli case)基因、超氧化物歧化酶基因 (sod)、碱性外切核酸酶基因 (alk exo)、蜕皮甾体尿苷二磷酸葡萄糖转移酶基因(egt)。HaSNPV的基因组结构与其他已知的病毒表现了很明显的差异。p10基因位于BamHI I片段 (1.89kb)上 ,其转录方向与多角体蛋白基因 (polh)相反。p10上游为 p2 6基因 ,下游为p74基因 ,p2 6和 p10基因转录方向一致 ,而 p74基因转录方向与前两者相反。p10基因编码区全长 2 6 1bp ,可编码分子量为 9.3kD ,由 87个氨基酸残基组成的多肽。编码区上游是一个富含AT区 ,在起始密码子ATG上游 - 5 2bp处有杆状病毒晚期基因启动子典型的转录起始位点元件TAAG ,而在翻译终止密码子TGA下游 2 0bp处有转录终止信号AATAAA。

关键词： HaSNPV 物理图谱基因组结构同源重复区 p10基因序列