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miR-135a对卵巢上皮性癌细胞中HOXA10基因表达及细胞增殖和凋亡的影响

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中华妇产科杂志 2013年第5期48卷 364-369页

作者：汤伟伟万贵平万一聪张林程文俊江苏省中西医结合医院妇产科南京210028 南京医科大学第一附属医院妇科 210029 江苏省中西医结合医院妇产科

目的研究微小RNA-135a（miR-135a）对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞系SKOV3细胞中HOXAIO基因表达及细胞增殖和凋亡的影响。方法（1）应用生物信息学技术预测与miR-135a高度相关的靶基因（即HOXAIO基因）。（2）将miR-135a成熟体模拟物（mi... 详细信息

目的研究微小RNA-135a（miR-135a）对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞系SKOV3细胞中HOXAIO基因表达及细胞增殖和凋亡的影响。方法（1）应用生物信息学技术预测与miR-135a高度相关的靶基因（即HOXAIO基因）。（2）将miR-135a成熟体模拟物（mimics）、miR-135a成熟体抑制物（inhibitor）及阴性对照分别转染SKOV3细胞，采用逆转录（RT）-PCR技术和蛋白印迹法检测转染不同时间（分别为24、48和72h）后SKOV3细胞中HOXAIOmRNA和蛋白的表达水平。（3）报告基因实验验证miR-135a对HOXAIO基因表达的调节作用，采用含miR-135a的质粒和含HOXAIO基因的重组质粒共同转染SKOV3细胞，以转染微小RNA（mirRNA）慢病毒质粒者为对照。（4）采用四甲基偶氮唑蓝（MTI＇）比色法检测转染不同时间（分别为24、48和72h）后SKOV3细胞的增殖能力[以吸光度（A）值表示]，蛋白印迹法检测转染48h后SKOV3细胞中凋亡相关蛋白[包括bel-2、bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（（3aspase-3）]的表达。结果（1）生物信息学技术预测，得出与miR-135a高度相关的靶基因为HOXAIO基因。（2）RT—PCR技术检测显示，随着转染时问的延长（分别为24、48和72h），mill-135amimics转染后SKOV3细胞中HOXAIOmRNA的表达水平（分别为0．94±0．04、0．78±0．03、0．70±0．03）逐渐降低（P〈0．05）；miR-135ainhibitor转染后SKOV3细胞中HOXAIOmRNA的表达水平（分别为1．14±0．05、1．16±0．03、2．60±0．08）逐渐升高（P〈0．05）；且两者转染48及72h后，分别与阴性对照（为1．00）比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。蛋白印迹法检测显示，转染不同时间后SKOV3细胞中HOXAIO蛋白的表达水平与HOXAIOmRNA的变化一致。（3）报告基因实验显示，含miR一135a的质粒和含HOXAIO基因的重组质粒共同转染SKOV3细胞后，与对照比较，其荧光素酶活性下降了67．8％（P〈0．01）。（4）M1rr比色法检测显示，miR一135amimics转染48和72h后SKOV3细胞的增殖能力（A值分别为0．38±0．03、0．67±0．05），明显低于阴性对照（A值分别为0．52±0．05、0．75±0．06；P〈0．05）；miR一135ainhibitor转染72h后SKOV3细胞的增殖能力（A值为0．95±0．05），明显高于阴性对照（A值为0．75±0．06；P〈0．01）。蛋白印迹法检测显示，miR一135amimics转染后SKOV3细胞中bel-2蛋白表达水平（0．28±0．06）明显低于阴性对照（0．76±0．09；P〈0．01）；bax蛋白表达水平无明显变化（P：0．142）；caspase-3酶活性（115．0±2．4）明显高于阴性对照（95．4±2．1；P〈0．01）。miR-135ainhibitor转染后SKO^3细胞中bcl-2蛋白表达水平（0．92±0．03）明显高于阴性对照（0．76±0．09；P=0．037）；bax蛋白表达水平无明显变化（P=0．066）；caspase-3酶活性（59．5±4．1）明显低于阴性对照（95．4±2．1；P〈0．01）。结论miR-135a通过HOXA10基因及其下游通路中凋亡相关蛋白影响卵巢癌细胞的增殖和凋亡。

关键词：微RNAs 卵巢肿瘤细胞系,肿瘤同源盒结构域蛋白质类细胞增殖细胞凋亡

神经元素3与成对盒基因4促进胰腺十二指肠同源框蛋白1诱导间充质干细胞向胰腺分泌细胞分化

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北京大学学报（医学版） 2011年第3期43卷 421-426页

作者：唐小龙肖瑞王云秀何敏谢婷张成刘思景广东省中医院检验科广州510120 广州医学院临床技能中心广州510182

目的:探索神经元素3(neurogenin 3,NGN3)与成对盒基因4(paired box gene 4,PAX4)对胰腺十二指肠同源框蛋白1(pancreatic and duodenal homeobox factor1,PDX1)驱动间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向胰腺β细胞分化过程中的作用。方法:构建PDX1基因及NGN3与PAX4双基因表达腺病毒,重组腺病毒Adxsi-CMV-PDX1感染诱导MSCs1周后,再行重组腺病毒Adxsi-CMV-NGN3/CMV-PAX4感染诱导MSCs;分别检测PDX1、PAX4、NGN3、NK转录因子相关的2.2(NK transcription factor related,gene family 2,locus2,NKX2.2)、v-maf muscu-loaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog B(MafB)、胰岛素(Insulin)、胰高血糖素(Glucagon)多种胰腺分泌细胞相关分子表达情况。结果:成功构建腺病毒Adxsi-CMV-PDX1与Adxsi-CMV-NGN3/CMV-PAX4;MSCs经Adxsi-CMV-PDX1与Adxsi-CMV-NGN3/CMV-PAX4分步诱导后,免疫细胞化学与间接荧光检测显示PDX1、NGN3与PAX4因子在细胞核内稳定表达;重组腺病毒稳定转染5 d后,细胞开始变圆并集聚成团,用双硫腙(dithizone,DTZ)染色细胞质呈亮红色;细胞经诱导1周后,用RT-PCR检测到神经源分化因子1(neurogenic differentiation 1,NruroD1)与NKX2.2表达,2周后可检测胰岛素/胰岛素原分子;间接荧光检测显示诱导后的细胞先后开始表达NKX2.2、MafB等转录因子与胰岛素/胰岛素原、胰高血糖等胰岛分泌细胞相关分子,但未能检测到v-maf musculoaponeurotic fibro-sarcoma oncogene homolog A(MafA)与C肽分子表达。结论:NGN3与PAX4对PDX1诱导间充质干细胞向胰腺分泌细胞分化具有促进作用。

关键词：同源盒结构域蛋白质类间质干细胞胰腺成对盒基因4 神经元素3

中国人散发性圆锥角膜VSX1基因变异检测与分析

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中华眼科杂志 2018年第3期54卷 212-217页

作者：管涛伍海建张龄洁徐德建郑利斌姚玉峰浙江省台州市立医院眼科中心 318000 浙江大学医学院附属邵逸夫医院眼科中心

目的探讨中国人圆锥角膜VSX1基因的变异类型和变异特点.方法横断面研究.收集就诊于浙江大学医学院附属邵逸夫医院眼科中心的50例散发性圆锥角膜患者做为病例组,其中男性29例,年龄（19.0±4.8）岁.选取50例健康人群作为对照组.对所有... 详细信息

目的探讨中国人圆锥角膜VSX1基因的变异类型和变异特点.方法横断面研究.收集就诊于浙江大学医学院附属邵逸夫医院眼科中心的50例散发性圆锥角膜患者做为病例组,其中男性29例,年龄（19.0±4.8）岁.选取50例健康人群作为对照组.对所有受检者采集外周静脉血,提取基因组DNA,应用聚合酶链反应和DNA直接测序技术,对VSX1基因全部5个外显子及外显子内含子拼接部,进行基因变异的检测;生物信息学分析这些基因变异对蛋白质结构和功能的影响.结果发现VSX1基因4种碱基变异类型,包括二种错义变异和一种单核苷酸多态性改变：1例圆锥角膜患者在VSX1基因第1外显子氨基酸131位点精氨酸错义变异为脯氨酸（即p.R131P变异）,此变异在对照组中未检出;2例圆锥角膜患者在VSX1基因第2外显子氨基酸160位点甘氨酸错义变异为缬氨酸（即p.G160V变异）,此变异在对照组中未检出;在VSX1基因第3内含子中,碱基序列8326处发现G→A置换（即g.8326G〉A变异）,其中3例圆锥角膜患者和4例对照者为杂合性,2例圆锥角膜患者和1例对照为纯合性.生物信息学分析提示p.R131P变异系一新的VSX1基因突变类型,而p.G160V突变对蛋白质结构和功能可能有害;VSX1基因g.8326G〉A变异为单核苷酸多态性改变.结论在中国人圆锥角膜患者中发现了VSX1基因p.R131P新的杂合性突变,揭示了中国人群VSX1基因变异特征,但VSX1基因在中国人圆锥角膜发病中的作用尚需进一步研究.（中华眼科杂志,2018,54：212-217）

关键词：圆锥角膜眼蛋白质类同源盒结构域蛋白质类多态性单核苷酸突变

BP1基因沉默可逆转人乳腺癌MCF-7细胞对多柔比星的耐药性

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肿瘤 2014年第5期34卷 419-424页

作者：张昊郭琪郭甲民朱琨夏鹏宋永春西安交通大学医学院第一附属医院肿瘤外科陕西西安710061 陕西省肿瘤医院普通外科陕西西安710061

目的 :探讨沉默BP1(beta protein-1)基因表达对人乳腺癌多柔比星(doxorubicin,ADR)耐药细胞株MCF/ADR耐药性的影响。方法 :首先采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测MCF/ADR细胞及其敏感株MCF-7细胞中BP1基因表达水平。然后,合成针对... 详细信息

目的 :探讨沉默BP1(beta protein-1)基因表达对人乳腺癌多柔比星(doxorubicin,ADR)耐药细胞株MCF/ADR耐药性的影响。方法 :首先采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测MCF/ADR细胞及其敏感株MCF-7细胞中BP1基因表达水平。然后,合成针对BP1基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列,并将其瞬时转染至MCF/ADR细胞。采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测转染后MCF/ADR细胞中BP1基因及蛋白表达量的变化。MTT法检测转染后不同浓度ADR对MCF/ADR细胞增殖的抑制作用。结果:MCF/ADR细胞中BP1基因表达水平为MCF-7细胞的3.51倍。BP1-siRNA转染MCF/ADR细胞后,BP1mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),且ADR对MCF/ADR细胞的半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)明显降低(P<0.05),接近于ADR对MCF-7细胞的IC50值。结论 :靶向BP1基因的siRNA能有效沉默MCF/ADR细胞中BP1基因的表达,并能明显降低MCF/ADR细胞对ADR的耐药性。

关键词：乳腺肿瘤同源盒结构域蛋白质类 RNA 小分子干扰抗药性肿瘤多柔比星转录因子BP1

核转录因子HMBOX1在结直肠癌中的表达及其与预后的关系

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中国普通外科杂志 2021年第10期30卷 1168-1174页

作者：何承志戚文静王辉杜天明王智辉王向阳华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院胃肠外科湖北武汉430000

背景与目的:核转录因子HMBOX1在不同肿瘤中有不同的表达模式,且与胶质瘤、卵巢癌、胃癌及肝细胞癌预后密切相关。但是,目前尚未见HMBOX1在结直肠癌中的表达及与预后的关系的报道,故本研究探讨结直肠癌组织中HMBOX1的表达及与预后的关系... 详细信息

背景与目的:核转录因子HMBOX1在不同肿瘤中有不同的表达模式,且与胶质瘤、卵巢癌、胃癌及肝细胞癌预后密切相关。但是,目前尚未见HMBOX1在结直肠癌中的表达及与预后的关系的报道,故本研究探讨结直肠癌组织中HMBOX1的表达及与预后的关系。方法:收集2012年1月-2014年1月行结直肠癌切除术的90例患者癌组织标本及临床资料,采用免疫组化染色检测结直肠癌组织中HMBOX1表达,并根据免疫组化结果分为HMBOX1高表达组与HMBOX1低表达组,分析两组临床病理特征的与预后差异,并分析影响结直肠癌术后患者无瘤生存率和总生存率的危险因素。结果:HMBOX1高表达组54例(60.0%),HMBOX1低表达组36例(40.0%)。HMBOX1高表达与TNM分期、N分类、M分类及分化程度明显有关(均P类无明显关系(均P>0.05)。HMBOX1高表达组1、3、5年无瘤生存率与1、3、5年总生存率均明显低于低表达组(均P<0.05)。单因素分析显示,Ⅲ~Ⅳ期、N2、M1及HMBOX1高表达为影响无瘤生存率的危险因素,多因素分析表明,Ⅲ~Ⅳ期、M1及HMBOX1高表达是影响无瘤生存率的独立危险因素(均P<0.05)。单因素分析显示,Ⅲ~Ⅳ期、M1、低分化及HMBOX1高表达为影响总生存率的危险因素,多因素分析表明,Ⅲ~Ⅳ期、低分化及HMBOX1高表达是影响总生存率的独立危险因素(均P<0.05)。结论:在结直肠癌中,HMBOX1的表达与恶性生物学指标密切相关,HMBOX1的表达可作为结直肠癌患者术后预后评估的因素,HMBOX1高表达者预后不良。

关键词：结直肠肿瘤同源盒结构域蛋白质类预后

HOXA10基因在子宫内膜异位症患者在位及异位子宫内膜组织中的表达及其意义

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中华妇产科杂志 2011年第11期46卷 813-816页

作者：邓凯贤柳晓春郑玉华胡路琴罗润环强荣佛山市妇幼保健院妇科佛山528000

目的探讨HOXAl0基因在子宫内膜异位症（内异症）患者在位及异位内膜组织中的表达水平及其临床意义。方法选取2009年1月至2010年8月于佛山市妇幼保健院因内异症行腹腔镜手术治疗的患者30例，留取宫腔内膜组织（内异症在位内膜组）和异位... 详细信息

目的探讨HOXAl0基因在子宫内膜异位症（内异症）患者在位及异位内膜组织中的表达水平及其临床意义。方法选取2009年1月至2010年8月于佛山市妇幼保健院因内异症行腹腔镜手术治疗的患者30例，留取宫腔内膜组织（内异症在位内膜组）和异位内膜组织（内异症异位内膜组）；同期因卵巢囊肿及输卵管因素不孕行腹腔镜手术治疗患者30例为对照组，留取宫腔内正常内膜组织。分别采用实时荧光定量PCR技术、免疫组化法和蛋白印迹法检测各组内膜组织中HOXAl0mRNA及蛋白表达水平。结果内异症在位内膜组HOXAl0mRNA及蛋白表达水平分别为0．614-0．07和0．47±0．05，内异症异位内膜组分别为0．644-0．06和0．504-0．05，对照组分别为1．224-0．14和1．424-0．14；内异症在位和异位内膜HOXAl0mRNA及蛋白表达水平明显低于正常内膜中的表达水平，差异均有统计学意义（P均〈0．01）；内异症在位和异位内膜组的HOXAl0mRNA及蛋白表达水平比较，差异则无统计学意义（P〉0．05）。免疫组化法检测内异症在位和异位内膜组织的问质和腺细胞中HOXAl0表达均降低。结论HOXAl0基因在内异症在位及异位内膜组织中均呈低表达状态，可能与内异症的发病和不孕有关。

关键词：子宫内膜异位症同源盒结构域蛋白质类基因表达

PROX-1与Ki-67在胆管癌中的表达及意义

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中国普通外科杂志 2014年第8期23卷 1082-1086页

作者：吕品蒋波王俊刘剑鸣谭永辉湖南省人民医院肝胆外科湖南长沙410005

目的:探讨PROX-1及Ki-67在胆管癌中表达及意义。方法:用免疫组化法检测46例肝门部胆管癌患者(伴淋巴结转移29例,无淋巴结转移17例)癌组织与23例胆管良性病变患者胆管组织中PROX-1及Ki-67的表达,分析PROX-1及Ki-67的表达与胆管癌淋巴转... 详细信息

目的:探讨PROX-1及Ki-67在胆管癌中表达及意义。方法:用免疫组化法检测46例肝门部胆管癌患者(伴淋巴结转移29例,无淋巴结转移17例)癌组织与23例胆管良性病变患者胆管组织中PROX-1及Ki-67的表达,分析PROX-1及Ki-67的表达与胆管癌淋巴转移及其他临床病理因素的关系。结果:PROX-1与Ki-67两者的阳性表达率在良性病变胆管组织、无淋巴结转移胆管癌组织、伴淋巴结转移胆管组织中依次增高,差异均有统计学意义(均P0.05);胆管癌组织中PROX-1与Ki-67表达正相关(r=0.831,P<0.05)。结论:PROX-1与Ki-67的高表达与胆管癌的恶性生物学行为密切相关,且两者表达量之间存在关联性。

关键词：胆管肿瘤同源盒结构域蛋白质类 Ki-67抗原淋巴转移

circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3与糖尿病视网膜病变的相关性研究

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天津医药 2023年第9期51卷 993-997页

作者：隋源张成森王爽李雪丽勾晓梅哈尔滨二四二医院眼科 150000

目的探讨环状RNA(circRNA)-锌指蛋白532(ZNF532)、circRNA-同源域相互作用蛋白激酶3(HIPK3)与糖尿病视网膜病变(DR)的相关性。方法纳入109例DR患者(DR组)、110例单纯糖尿病患者(DM组)和65例健康体检志愿者(对照组)。实时荧光定量聚合酶... 详细信息

目的探讨环状RNA(circRNA)-锌指蛋白532(ZNF532)、circRNA-同源域相互作用蛋白激酶3(HIPK3)与糖尿病视网膜病变(DR)的相关性。方法纳入109例DR患者(DR组)、110例单纯糖尿病患者(DM组)和65例健康体检志愿者(对照组)。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达,酶联免疫吸附试验检测血清血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6水平。Pearson分析DR患者血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达与血清VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平相关性。单因素和多因素Logistic回归分析DR危险因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3诊断DR的价值。结果DR组血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达以及VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平高于DM组和对照组(P<0.05)。DR组血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达与VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平均呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示高水平circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3及VEGF是糖尿病患者发生DR的独立危险因素(P<0.05)。三者诊断糖尿病患者发生DR的曲线下面积分别为0.736、0.740和0.864,联合诊断高于单独诊断(P<0.05)。结论糖尿病患者血清中circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达上调与DR发生有关,两者可以作为DR辅助诊断的潜在指标。

关键词：糖尿病视网膜病变 RNA,环状转录激活因子类 tristetraprolin蛋白同源盒结构域蛋白质类炎症血管内皮生长因子类同源域相互作用蛋白激酶3

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配对相关同源框-1蛋白在胆囊癌组织中的表达及意义

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中国普通外科杂志 2017年第2期26卷 185-189页

作者：白明辉刘海潮郑州大学附属洛阳中心医院肝胆疝外科二病区河南洛阳471009

目的:探讨配对相关同源框-1蛋白(Prrx-1)在胆囊癌组织中的表达及意义。方法:用免疫组化方法测定Prrx-1在45例胆囊癌及35例胆囊良性病变组织中的表达情况,并分析Prrx-1和胆囊癌临床病理特征之间的关系。结果:Prrx-1在胆囊癌组织中表达率... 详细信息

目的:探讨配对相关同源框-1蛋白(Prrx-1)在胆囊癌组织中的表达及意义。方法:用免疫组化方法测定Prrx-1在45例胆囊癌及35例胆囊良性病变组织中的表达情况,并分析Prrx-1和胆囊癌临床病理特征之间的关系。结果:Prrx-1在胆囊癌组织中表达率为55.6%(25/45),而在胆囊良性病变组织中的表达率5.7%(2/35),两者差异有统计学意义(χ2=21.87,P类型无关(均P>0.05)。结论:Prrx-1在胆囊癌组织中表达增高,其表达可能在胆囊癌的发生、发展中起重要作用。

关键词：胆囊肿瘤同源盒结构域蛋白质类肿瘤标记生物学