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CFH蛋白在家系早发冠心病血瘀证中的表达及意义

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湖南中医药大学学报 2024年第1期44卷 108-114页

作者：张书萌李杰于子璇陈宇霞陈杏陈伶利湖南中医药大学湖南长沙410208 湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室湖南长沙410208 湖南中医药大学中西医结合病原生物学湖南省重点实验室湖南长沙410208

目的筛选家系早发冠心病血瘀证的特异性蛋白,为今后临床早期诊断和预防疾病提供潜在生物标志物。方法通过同位素相对标记与绝对定量技术(isobaric tags for relative and absolute quantification,i TRAQ)分析家系早发冠心病血瘀证患者... 详细信息

目的筛选家系早发冠心病血瘀证的特异性蛋白,为今后临床早期诊断和预防疾病提供潜在生物标志物。方法通过同位素相对标记与绝对定量技术(isobaric tags for relative and absolute quantification,i TRAQ)分析家系早发冠心病血瘀证患者、家系早发冠心病非血瘀证患者及健康人的血浆蛋白表达,数据分析后得到各组间的差异蛋白表达情况,再经差异蛋白筛选标准初步得到疾病的预测蛋白,并使用Western blot验证预测蛋白。结果通过i TRAQ技术共得到差异蛋白75个,其中家系早发冠心病血瘀证组与健康对照组之间共得到32个差异蛋白,包括22个上调蛋白与10个下调蛋白,共涉及429个生物学过程,其与角质化、皮肤发展、蛋白质激活级联反应等关系最为密切;在代谢途径金黄色葡萄球菌感染、补体和凝血级联、血小板激活等KEGG通路上富集。与健康对照组相比,家系早发冠心病血瘀证组差异蛋白补体因子H(complement factor H,CFH)表达水平差异有统计学意义(P<0.01)。结论经差异蛋白筛选标准得到的CFH蛋白,可作为家系早发冠心病血瘀证早期诊断的潜在生物标志物。

关键词：早发冠心病血瘀证同位素相对标记与绝对定量技术补体因子H

家系早发冠心病血瘀证患者的血浆蛋白质组学分析

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中华中医药杂志 2022年第10期37卷 5983-5988页

作者：张书萌江雨洁于子璇刘佳陈宇霞陈伶利李杰湖南中医药大学长沙410208 湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室长沙410208 湖南中医药大学中西医结合病原生物学湖南省重点实验室长沙410208

目的:通过同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)分析家系早发冠心病血瘀证患者的血浆蛋白质组学变化,为今后预防疾病及临床筛查提供新的潜在生物标志物。方法:从前期流调工作中收集的冠心病患者中筛选出典型的家系早发冠心病血瘀证患者... 详细信息

目的:通过同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)分析家系早发冠心病血瘀证患者的血浆蛋白质组学变化,为今后预防疾病及临床筛查提供新的潜在生物标志物。方法:从前期流调工作中收集的冠心病患者中筛选出典型的家系早发冠心病血瘀证患者、家系早发冠心病非血瘀证患者,并匹配健康对照组,收集每位受试者的血浆样本,采用iTRAQ技术对血浆蛋白表达情况进行定量检测,对所得的蛋白数据进行鉴定与筛选,并以Western Blot验证筛选出的蛋白。结果:通过iTRAQ技术共得到差异蛋白61个,其中与健康对照组比较,家系早发冠心病血瘀证共得到32个差异蛋白,包括22个上调蛋白与10个下调蛋白;家系早发冠心病非血瘀证共得到35个差异蛋白,其中8个上调蛋白和27个下调蛋白。家系早发冠心病血瘀证组中差异蛋白的生物功能分析提示与角质化、角质化包膜及表皮结构组成部分密切联系,差异蛋白所在通路主要与金黄色葡萄球菌感染、补体系统、血小板激活等相关。与健康对照组比较,家系早发冠心病血瘀证组差异蛋白二磷酸甘油酸变位酶(BPGM)表达水平显著降低(P技术初步筛选及Western Blot验证后的差异蛋白BPGM可作为家系早发冠心病血瘀证早期诊断的潜在生物标志物之一。

关键词：早发冠心病血瘀证同位素相对标记与绝对定量技术二磷酸甘油酸变位酶蛋白质组学

基于iTRAQ技术的阿司匹林相关胃黏膜病变差异蛋白质组学研究

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胃肠病学和肝病学杂志 2023年第4期32卷 361-366页

作者：郭红伟程艳丽清华大学第一附属医院消化内科北京100016

目的应用同位素相对标记与绝对定量技术(isotope relative labeling and absolute quantification technique,iTRAQ)筛选阿司匹林相关胃黏膜病变的差异蛋白,分析生物信息,探讨阿司匹林导致胃黏膜病变的发病机制。方法分别收集口服阿司匹... 详细信息

目的应用同位素相对标记与绝对定量技术(isotope relative labeling and absolute quantification technique,iTRAQ)筛选阿司匹林相关胃黏膜病变的差异蛋白,分析生物信息,探讨阿司匹林导致胃黏膜病变的发病机制。方法分别收集口服阿司匹林6个月以上患者的胃黏膜病变(包括胃炎、胃溃疡)标本作为实验组,未口服阿司匹林健康体检者的正常胃黏膜标本作为对照组,采用iTRAQ技术对差异蛋白进行筛选与鉴定。通过检索Gene Ontology数据库,针对细胞组分、生物学过程、分子功能对差异蛋白在功能方面进行富集;通过KEGG的Pathway数据库,定位差异蛋白到相应的生化代谢途径和信号转导途径,将不同的蛋白质富集到共同代谢途径中。结果共鉴定出298个差异蛋白,与对照组相比差异有统计学意义,其中235个蛋白表达上调,63个蛋白表达下调。生物信息学分析发现差异蛋白主要参与了129种细胞组分、733种生物学过程、123种分子功能、55条信号转导通路。差异蛋白的基因分子功能主要包括异源性二聚体蛋白的活性、MAPK级联反应、受体激动剂活性、CCR10趋化因子受体结合、氨甲酰磷酸合成酶活性、CXCR5趋化因子受体结合、H-K交换ATP酶活性等,差异蛋白主要富集在内吞作用、细胞因子-细胞因子受体相互作用信号通路上。结论阿司匹林可能通过上调或下调多种差异蛋白,如下调EGFR参与内吞作用、细胞因子-细胞因子受体相互作用等多种信号途径损伤胃黏膜。为进一步阐明阿司匹林相关胃黏膜致病机制提供了理论依据。

关键词：阿司匹林相关胃黏膜病变同位素相对标记与绝对定量技术生物信息学

肾小球疾病患者尿液比较蛋白质组学研究方法的建立

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肾脏病与透析肾移植杂志 2014年第2期23卷 140-145页

作者：王玉孙伟左科王霞郑春霞高友鹤刘志红南京军区南京总医院国家肾脏病临床医学研究中心全军肾脏病研究所南京210016 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院

目的:采用蛋白质组学技术建立尿液蛋白质图谱分析方法,并通过对膜性肾病(MN)和局灶节段性肾小球硬化(FSGS)患者尿液蛋白质图谱的比较分析,以期寻找到具有鉴别诊断意义的尿液蛋白质标志物。方法:以肾病综合征为主要表现的MN和FSGS患者各1... 详细信息

目的:采用蛋白质组学技术建立尿液蛋白质图谱分析方法,并通过对膜性肾病(MN)和局灶节段性肾小球硬化(FSGS)患者尿液蛋白质图谱的比较分析,以期寻找到具有鉴别诊断意义的尿液蛋白质标志物。方法:以肾病综合征为主要表现的MN和FSGS患者各15例,采用白蛋白/IgG抗体清除联合同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)标记二维液相色谱与串联质谱联用技术(2D-LC MS/MS)蛋白质组学技术对患者尿液蛋白质组进行全面分析,并获取差异表达蛋白。对鉴定蛋白和差异蛋白进行Gene ontology(GO)分析。对鉴定蛋白丰度排序前10位蛋白与血蛋白质组丰度排序前10位蛋白进行比较。结果:共鉴定尿液蛋白809个,GO分析显示根据分子功能,鉴定蛋白主要属于催化活性、结合、受体活性三个类别;根据生物过程,鉴定蛋白主要属于代谢过程、细胞过程、发育过程三个类别;根据细胞定位,鉴定蛋白主要属于细胞外区域、细胞成分、细胞外基质三个类别。符合条件的差异蛋白16个,生物学功能包括参与纤溶调节、免疫反应、代谢过程、细胞增生等。对临床表现肾病综合征的MN和FSGS患者尿液鉴定蛋白丰度排序前10位蛋白与血蛋白质组丰度排序前10位蛋白进行比较显示有较大差异,提示即使在病理情况下,肾脏仍可对不同种类的蛋白保持不同的处理功能,蛋白尿可能有着不同于血蛋白质组的组成架构。结论:从患者尿液中获得的蛋白质组学图谱为进一步开展基于蛋白质组学生物标志物的研究提供了基础,从MN和FSGS患者尿液中获得的差异蛋白有待进一步验证其与疾病诊断、治疗及预后的关系。

关键词：蛋白组学膜性肾病局灶节段性肾小球硬化同位素相对标记与绝对定量技术标志物

利用转录组及iTRAQ技术筛选高油酸油菜抗病相关基因

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华北农学报 2015年第5期30卷 16-24页

作者：张振乾肖钢官春云邬贤梦熊兴华李云昌胡琼陈社员湖南农业大学农学院南方粮油作物协同创新中心湖南长沙410128 农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室湖北武汉430062

高油酸油菜和低油酸油菜对菌核病的抗性存在显著差异,为了弄清其分子机理,以一组高油酸油菜近等基因系自交授粉后20-35 d的种子为材料,分别进行转录组和同位素相对标记与绝对定量技术分析。分析了与抗病相关的氧化磷酸化、植物激素信号... 详细信息

高油酸油菜和低油酸油菜对菌核病的抗性存在显著差异,为了弄清其分子机理,以一组高油酸油菜近等基因系自交授粉后20-35 d的种子为材料,分别进行转录组和同位素相对标记与绝对定量技术分析。分析了与抗病相关的氧化磷酸化、植物激素信号转导通路和植物病原体互作3个分类,将注释的基因和蛋白进行关联,并对其中可能与抗病相关的基因进行定量PCR验证。结合前人研究发现,基因表达或蛋白表达发生显著变化的基因gi｜260505503（多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白）、gi｜226346102（HSR203J类蛋白）、gi｜470103214（钙调蛋白类）与抗病相关;而gi｜297843222（结合蛋白）、gi｜18397961（2-铁,2-硫-铁氧化还原类蛋白）、gi｜196052306（还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基）、gi｜18423437（还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（辅酶）1α-复形5）和gi｜297794581（激酶家族蛋白）等基因差异显著。

关键词：菌核病高油酸油菜转录组同位素相对标记与绝对定量技术定量PCR

基于iTRAQ技术的寻常型银屑病(血虚证)蛋白组学研究

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中华中医药杂志 2018年第4期33卷 1497-1501页

作者：郝平生严晓萍成都中医药大学附属医院皮肤科成都610075

应用同位素相对标记与绝对定量技术(i TRAQ)对寻常型银屑病(血虚证)患者的血清蛋白进行定量分析,探求其与健康人差异表达蛋白质,从蛋白组学角度揭示血虚证的部分内涵。本实验共鉴定定量了208个蛋白质,血虚证寻常型银屑病患者血清蛋白组... 详细信息

应用同位素相对标记与绝对定量技术(i TRAQ)对寻常型银屑病(血虚证)患者的血清蛋白进行定量分析,探求其与健康人差异表达蛋白质,从蛋白组学角度揭示血虚证的部分内涵。本实验共鉴定定量了208个蛋白质,血虚证寻常型银屑病患者血清蛋白组与健康组比较,有109个蛋白质差异存在统计学意义(P素结合球相关蛋白、血红蛋白类相关蛋白、细胞外基质类蛋白等。提示这些蛋白可能与寻常型银屑病血虚证有关。

关键词：寻常型银屑病血虚证蛋白组学同位素相对标记与绝对定量技术差异蛋白

寻常型银屑病湿热证与血热证的差异血清蛋白质组学表达初探

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中华中医药杂志 2016年第2期31卷 428-431页

作者：郝平生杨川张婧杨剑李天浩成都中医药大学附属医院成都610072 成都中医药大学成人教育学院成都610075

目的:应用同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)技术对寻常型银屑病(血热证、湿热证)患者与健康人差异且共有蛋白进行分析,探求两证之间差异性表达蛋白,从蛋白质组学角度揭示两证之间差异。方法:取寻常型银屑病血热证、湿热证患者血清,... 详细信息

目的:应用同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)技术对寻常型银屑病(血热证、湿热证)患者与健康人差异且共有蛋白进行分析,探求两证之间差异性表达蛋白,从蛋白质组学角度揭示两证之间差异。方法:取寻常型银屑病血热证、湿热证患者血清,予纯化等处理后,SDS-PAGE电泳分离,经i TRAQ特异性标记酶解后的肽段,采用串联质谱分析与健康人比较寻找差异且两证共有蛋白,并将这些蛋白进行组间比较。结果:发现了19个显著性差异蛋白(P<0.05),其中,强显著性差异的蛋白有6个(P<0.01)。结论:寻常型银屑病血热证与湿热证血清中存在表达差异性蛋白质,如糖蛋白类、脂蛋白类、免疫类等。是否为证型之间的特征性差异蛋白,有待进一步证实。

关键词：银屑病血热证湿热证蛋白质组学同位素相对标记与绝对定量技术

基于iTRAQ蛋白组学技术的大肠癌和肝癌术后肝肾阴虚证血浆差异表达蛋白的研究

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中华中医药杂志 2017年第6期32卷 2626-2630页

作者：季青陆奕宇宋雅楠魏滨李晓燕孙阳罗运权王文海李琦苏式兵上海中医药大学复杂系统研究中心上海201203 上海中医药大学附属曙光医院上海201203 上海中医药大学附属第七人民医院肿瘤科上海200137

目的:筛选大肠癌和肝癌术后肝肾阴虚证的血浆差异表达蛋白,探索大肠癌和肝癌"异病同证"的物质基础。方法:纳入具有典型肝肾阴虚证的大肠癌和肝癌患者各10例,对照组为无证可辨的大肠癌和肝癌患者各10例。采集患者血浆并提取蛋白,然后进... 详细信息

目的:筛选大肠癌和肝癌术后肝肾阴虚证的血浆差异表达蛋白,探索大肠癌和肝癌"异病同证"的物质基础。方法:纳入具有典型肝肾阴虚证的大肠癌和肝癌患者各10例,对照组为无证可辨的大肠癌和肝癌患者各10例。采集患者血浆并提取蛋白,然后进行蛋白变性、还原及酶解,最后进行同位素相对标记与绝对定量技术(i TRAQ)标记和液相色谱串联质谱联用技术鉴定,得到的峰图采用Maxquant 1.***.0.5软件进行系统的蛋白差异表达分析。鉴定蛋白组间比值>1.5或素结合球蛋白(SHBG)、羧肽酶N催化链(CPN1)、血浆蛋白酶C1抑制剂(SERPING1)、间α胰蛋白酶抑制剂重链H1(ITHIH1)。这些蛋白主要与补体和凝血级联途径有紧密联系。结论:本研究证实i TRAQ结合液相色谱串联质谱联用技术能够快速、有效地进行差异蛋白质组学研究,发现KNG1,HBA2等蛋白可能是大肠癌和肝癌"异病同证"的物质基础之一。

关键词：大肠癌肝癌肝肾阴虚证蛋白质组学差异表达蛋白同位素相对标记与绝对定量技术

青蒿琥酯作用日本血吸虫童虫的iTRAQ定量蛋白质组学分析

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青蒿琥酯作用日本血吸虫童虫的iTRAQ定量蛋白质组学分析

作者：董可为浙江省医学科学院

学位级别：硕士

血吸虫病是一种由寄生在肠系膜门静脉系统的裂体吸虫引起的感染性疾病,是七大被忽视的热带病之一,构成了热带和亚热带逾76个国家和地区严重的公共卫生问题。全球范围内目前约有2.49亿人感染血吸虫病,约7亿人存在感染风险。尽管流行区内... 详细信息

血吸虫病是一种由寄生在肠系膜门静脉系统的裂体吸虫引起的感染性疾病,是七大被忽视的热带病之一,构成了热带和亚热带逾76个国家和地区严重的公共卫生问题。全球范围内目前约有2.49亿人感染血吸虫病,约7亿人存在感染风险。尽管流行区内实施了血吸虫病的防控工作,全球血吸虫病的发病率仍在上升。据估算,在2012年,中国约有24万人感染血吸虫病,日本血吸虫病依然是中国的一个重要的公共卫生问题。短期内除积极灭螺之外,药物化学治疗仍然是防治血吸虫病的有效方法。抗疟药青蒿素的衍生物青蒿琥酯,也发现有抗血吸虫的作用。从20世纪90年代开始,我国进行了大量抗血吸虫病的药物研究。研究显示青蒿琥酯能够有效杀灭日本血吸虫7d童虫,具有较好的防治日本血吸虫病的效果。虽然青蒿琥酯已经广泛地应用于血吸虫病的预防性治疗,但是青蒿琥酯抗日本血吸虫的确切机制仍不清楚。目的研究青蒿琥酯作用日本血吸虫童虫的蛋白质组差异表达谱,分析青蒿琥酯抗日本血吸虫童虫蛋白质基础,为进一步青蒿琥酯作用日本血吸虫童虫的分子机制研究奠定基础。方法新西兰兔经贴片法感染日本血吸虫尾蚴(2000条/只)7d后,实验组以8mg/kg剂量灌服青蒿琥酯(溶于1%羧甲基纤维素钠),对照组灌服同体积的1%羧甲基纤维素钠,10d后经肝门静脉系统灌流收集童虫,提取虫体总蛋白。应用iTRAQ结合高效液相串联质谱技术鉴定青蒿琥酯给药前后日本血吸虫童虫的蛋白质组,通过数据库检索筛选差异表达的蛋白质。运用qRT-PCR技术对质谱鉴定的部分差异表达蛋白进行验证。生物信息学方法分析差异表达蛋白的定位与功能分类。结果本研究共鉴定得到日本血吸虫童虫蛋白2835个。青蒿琥酯给药后表达量有显著性差异的蛋白75个(含3个未知蛋白),其中表达量上调的蛋白23个,下调的蛋白52个。差异表达蛋白质的qRT-PC验证结果与iTRAQ鉴定结果相一致。生物信息学分析表明,差异表达的蛋白质主要参与了童虫的代谢、生物调节和细胞稳态等过程,同时与应激,细胞组织和生成等密切相关。结论首次应用iTRAQ定量蛋白质组学技术研究了青蒿琥酯作用日本血吸虫童虫的蛋白质差异表达谱,为青蒿琥酯抗日本血吸虫的分子机制研究奠定了基础。

关键词：日本血吸虫童虫青蒿琥酯同位素相对标记与绝对定量技术荧光定量PCR