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可溶性vegf受体sflt-1载体的构建

中国微循环 2002年第5期6卷 313-314页

作者：曹翔陆超殷莲华金惠铭复旦大学上海医学院生理与病理生理学系上海200032

目的本文以逆转录病毒作为载体将sflt-1基因结构中前3个免疫球蛋白区域的编码序列插入 ,构建成含有sflt-1的载体 ,为抑制肿瘤的血管新生提供基础。方法与结果1、sflt-1基因制备购买新鲜胎盘 ,用异硫氰酸胍提取总RNA。经RT -PCR制备sflt-... 详细信息

目的本文以逆转录病毒作为载体将sflt-1基因结构中前3个免疫球蛋白区域的编码序列插入 ,构建成含有sflt-1的载体 ,为抑制肿瘤的血管新生提供基础。方法与结果1、sflt-1基因制备购买新鲜胎盘 ,用异硫氰酸胍提取总RNA。经RT -PCR制备sflt-1基因 ,引物设计如下 :P1 :5’ -GGAATTCCGCGCTCAC CATGGTCAGC -3’ ;P2 :5’ -TTGGATCCTACCGCTTGCCAGCTACG GTTT-3’。目的基因共1080bp,包含sflt-1前三个免疫球蛋白区域 ,两端分别加上EcoRI和BamHI位点。PCR反应设定 :94℃5min,使模板充分变性 ,94℃1min ,55℃1min ,72℃1min30s ,共30个循环 ,72℃10min。PCR产物有目的片断和600bp的杂带 ,经调整复性温度不能去除 ,将含目的片断的凝胶条带切下并提取DNA。2、sflt—1基因片断的克隆与测序用 pUC -T-vector将目标DNA接入质粒 ,DNA片断A -tailing:2μl10Xbuffer,1UTaq酶 ,0 .5μl10mMdNTP ,纯化的DNA片断 ,共组成201反应体系。72℃15min。纯化DNA连接反应 ,1μlpUC_mT ,1μl2Xbuffer,1150 %PEG8000 ,纯化的DNA产物70g,0 .5μlT4DNA连接酶 ,加适量水组成10μl反应体系 ,20℃温育8h ,22℃温育8h ,连接反应产物转化感受态细菌 ,置于含50g/m1青霉素的LB平板 ,37℃过夜 ,挑取克隆在LB中扩增 ,提取质粒后用EcoRI和BamHI酶切 ,

关键词：可溶性vegf受体 sflt-1 载体构建逆转录病毒肿瘤血管新生基因克隆

可溶性vegf受体FLT-1克隆、表达及其对血管生成的抑制作用

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中国肿瘤生物治疗杂志 2002年第1期9卷 15-18页

作者：周彩存谈立松唐亮粟波上海市肺科医院肿瘤科上海200433

目的 :克隆vegf受体sFLT 1片段 1 3区 ,并使之在原核中进行表达以探讨其对内皮细胞增殖和血管生成方面的抑制作用。方法 :提取脐静脉血管内皮细胞总RNA ,克隆sFLT 1基因 1 3区 ,并使之在QIA表达系统进行表达 ;Ni2 + Sepharose6B亲和层... 详细信息

目的 :克隆vegf受体sFLT 1片段 1 3区 ,并使之在原核中进行表达以探讨其对内皮细胞增殖和血管生成方面的抑制作用。方法 :提取脐静脉血管内皮细胞总RNA ,克隆sFLT 1基因 1 3区 ,并使之在QIA表达系统进行表达 ;Ni2 + Sepharose6B亲和层析纯化、复性。应用MTT和鸡胚绒毛尿囊膜血管生成模型 ,探讨重组蛋白对血管生成的抑制作用。结果 :该表达系统能表达sFLT 1基因片段 ,表达量低。纯化后 ,经复性 ,sFLT 1具有与vegf特异结合功能 ,1μg重组sFLT 1蛋白能抑制 10ngvegf诱导的脐静脉内皮细胞增殖和 2 0ngvegf诱导的鸡胚绒毛尿囊膜血管生成。结论 :sFLT 1基因片段能在QIA表达系统中得到表达 ,复性后重组蛋白具有与vegf结合和拮抗vegf生物学活性的功能。

关键词：可溶性vegf受体 FLT-1 克隆血管内皮细胞生长因子原核表达血管新生肿瘤

人可溶性血管内皮细胞生长因子受体Flt-1基因在链霉菌中的克隆表达

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微生物学报 2002年第4期42卷 411-417页

作者：姜自彬李元中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所北京100050

应用RT PCR技术 ,从人脐静脉内皮细胞中扩增出编码人可溶性血管内皮细胞生长因子 (vegf)受体Flt 1胞外区前四个结构域的基因片段 ,亚克隆至pUCl8质粒进行测序 ,将目的基因片段连接至链霉菌表达载体pSGLgpp ,获得重组质粒pSGLgpp F ,将... 详细信息

应用RT PCR技术 ,从人脐静脉内皮细胞中扩增出编码人可溶性血管内皮细胞生长因子 (vegf)受体Flt 1胞外区前四个结构域的基因片段 ,亚克隆至pUCl8质粒进行测序 ,将目的基因片段连接至链霉菌表达载体pSGLgpp ,获得重组质粒pSGLgpp F ,将其转化至Streptomy ceslividansTK2 4 ,获得基因工程菌株Sreptomyceslividans (pSGLgpp F) ,对其培养上清液进行SDS PAGE及Westernblot分析 ,结果显示 ,在 6 3 6kD处有特异性条带出现 ,表明sFLT 1在链霉菌中获得了成功表达 ,受体配基结合实验显示表达产物与vegf可特异性结合。

关键词：人可溶性血管内皮细胞生长因子受体 Flt-1 链霉菌可溶性vegf受体基因表达基因克隆

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生物标志物与非小细胞肺癌治疗结局相关

中国处方药 2010年第2期9卷 52-52页

作者： Hanrahan EO Lin HY Kim ES

血管内皮生长因子（vegf）和可溶性vegf受体2（svegfR-2）由vegf通路抑制因子所调控，化疗、vegfR抑制剂或两者联合治疗是否可引起细胞因子和血管生成因子（CAFs）的改变，而这些改变是否又能预示临床获益？

关键词：联合治疗非小细胞肺癌生物标志物可溶性vegf受体血管内皮生长因子 EGFR抑制剂血管生成因子抑制因子