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抗人可溶性间皮素相关蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第3期23卷 246-248页

作者：陈书成刘雅坤吴小华单保恩陈兴孙东霞王莉河北医科大学第四医院妇产科河北石家庄050011 河北医科大学第四医院科研中心河北石家庄050011 白求恩国际和平医院河北石家庄050000

目的:制备鼠抗人可溶性间皮素相关蛋白(SMR)的单克隆抗体(mAb),鉴定其生物学特性。方法:应用计算机通过综合预测对间皮素(MSLN)进行B-细胞表位预测。合成相应肽段并免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,利用免疫细胞化学和Western blo... 详细信息

目的:制备鼠抗人可溶性间皮素相关蛋白(SMR)的单克隆抗体(mAb),鉴定其生物学特性。方法:应用计算机通过综合预测对间皮素(MSLN)进行B-细胞表位预测。合成相应肽段并免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,利用免疫细胞化学和Western blot分析对所制备的mAb进行鉴定。结果:综合预测方法分析间皮素的抗原表位可能于153-162、282-292及471-481氨基酸残基或其附近,选择性合成了可能性最高的位于471-481氨基酸残基的可溶性间皮素相关蛋白表位,制备了mAb(2H10),经免疫细胞化学和Western blot分析该抗体具有较高的特异性。结论:成功地制备了鼠抗人可溶性间皮素相关蛋白的mAb(2H10),该抗体具有较高的特异性,为进一步利用ELISA对可溶性间皮素相关蛋白进行检测奠定了基础。

关键词：间皮素可溶性间皮素相关蛋白 B细胞表位单克隆抗体

可溶性间皮素相关蛋白和癌抗原125联合检测在卵巢癌诊断中的价值

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中国医师进修杂志 2011年第27期34卷 50-51页

作者：马娟文朱天垣谢秀英兰州市妇幼保健院妇科 730030

目的探讨联合检测血清可溶性间皮素相关蛋白（SMRP）和癌抗原125（CA125）在卵巢癌诊断中的价值。方法入选30例卵巢癌（卵巢癌组）、30例卵巢良性肿瘤（卵巢良眭肿瘤组）及30例健康志愿者（对照组），采用酶联免疫吸附法和化学发光法分... 详细信息

目的探讨联合检测血清可溶性间皮素相关蛋白（SMRP）和癌抗原125（CA125）在卵巢癌诊断中的价值。方法入选30例卵巢癌（卵巢癌组）、30例卵巢良性肿瘤（卵巢良眭肿瘤组）及30例健康志愿者（对照组），采用酶联免疫吸附法和化学发光法分别检测血清SMRP和CA125水平。结果卵巢癌组血清CA125和SMRP水平均显著高于卵巢良性肿瘤组和对照组（P〈0．05）。单独检测SMRP的敏感度和特异度分别为90．0％（27／30）和93．3％（28／30），单独检测CA125均为86．7％（26／30），两者平行联合检测分别为93．3％（28／30）和83．3％（25／30），两者系列联合检测分别为83．3％（25／30）和96．7％（29／30）。结论卵巢癌患者血清SMRP和CA125的表达呈一致性升高，两者联合检测更有助于卵巢癌的诊断，具有较好的临床应用价值。

关键词：卵巢肿瘤早期诊断抗原,肿瘤可溶性间皮素相关蛋白

抗人可溶性间皮素相关蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

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抗人可溶性间皮素相关蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

作者：刘雅坤河北医科大学

学位级别：硕士

目的:间皮素(mesothelin,MSLN)是由单克隆抗体K1在正常间皮细胞以及间皮瘤、卵巢癌、胰腺癌等恶性肿瘤中识别的抗原。间皮素cDNA长约2138bp,含有1884bp的开放阅读框,编码Mr 69 000多肽。间皮素的前体蛋白由628个氨基酸组成,含有4个糖基... 详细信息

目的:间皮素(mesothelin,MSLN)是由单克隆抗体K1在正常间皮细胞以及间皮瘤、卵巢癌、胰腺癌等恶性肿瘤中识别的抗原。间皮素cDNA长约2138bp,含有1884bp的开放阅读框,编码Mr 69 000多肽。间皮素的前体蛋白由628个氨基酸组成,含有4个糖基化位点,其中的一个或多个位点发生糖基化后,间皮素及被furin蛋白酶水解为Mr分别为40 000和31 000的两个片段,其中40 000的片段通过糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphtidylinositol)与胞膜相连,称之为间皮素;31 000的片段脱落,称为巨核细胞集落刺激因子(megakaryocyte-potentiating factor,MPF)。间皮素转录结构中的两个次级连接的存在使间皮素基因编码蛋白含有两个异构体,异构体2在翻译过程中保留了第16个和第17个外显子中间的内含子,造成翻译过程中的框移突变,蛋白翻译提前中止,使其从细胞表面脱落形成可溶性间皮素相关蛋白(soluble mesothelin-related protein,SMR)。SMR是一个Mr为42 000～45 000的NH2末端氨基酸序列,与间皮素的膜连接部分完全相同。SMR可以间皮素阳性肿瘤细胞的培养上清中及间皮素阳性肿瘤患者的腹水、血清中检测到,从而使之有可能成为新的恶性肿瘤监测指标。但到目前为止,国内仍无抗SMR的单克隆抗体和进行SMR检测的ELISA试剂盒。基于这一目的,本研究中选择性合成了鼠抗人SMR的多肽制备了单克隆抗体(mAb),并对其生物学特异性进行了鉴定。方法:1应用GOLDKEY软件对从NCBI蛋白质数据库中调出人MSLN氨基酸序列进行分析,对MSLN的Hopp & Woods亲水性参数、抗原性参数、可及性参数、β-转角等多参数分别进行预测,然后用吴氏法进行综合分析其准确性。2抗SMR抗体的制备应用方法1选取的SMR抗原表位的氨基酸序列,合成多肽抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合后,选出抗SMR抗原表位的阳性克隆,再进行亚克隆,将稳定分泌抗SMR抗原表位单克隆抗体的细胞株进行扩大培养。抗体效价用ELISA法检测。取一定量杂交瘤细胞给BALB/c小鼠腹腔注射,约两周后收集腹水,得到高效价抗SMR抗原表位的IgG,应用免疫细胞化学、SDS-PAGE和Western blot分析等方法对抗体进行特异性鉴定。3 mAb的效价、亚类及特异性鉴定3.1效价测定:利用SMR复合肽抗原(1μg/mL)1:1 000稀释包被微孔板,利用ELISA法检测腹水抗体效价。3.2抗体亚类测定:用mAb亚类分型试剂盒,按试剂盒说明书操作。用PH7.2-7.6 PBS稀释鼠抗SMR单克隆抗体,稀释度为1:20 000。取150μl稀释好的SMR单克隆抗体放入试管中,混匀,室温孵育30分钟。试管中插入试剂条反应5分钟,观察结果。3.3特异性鉴定:(1)免疫细胞化学(SP)法检测单克隆抗体与间皮素阳性卵巢癌细胞表面天然蛋白反应性。盖玻片常规浸酸、冲洗、高压灭菌后,放置于无菌6孔培养板中。选择经证实表达间皮素的处于对数生长期的人卵巢癌细胞系OVCAR-3、SKOV3、3AO分别加入各板,制成细胞爬片。3%过氧化氢室温孵育30min,以去除内源性过氧化氢,蒸馏水冲洗,磷酸盐缓冲溶液冲洗5min×3次,10%山羊血清封闭非特异性抗原20min,加入小鼠抗人间皮素抗体2H10或5B2,4℃过夜。磷酸盐缓冲液冲洗5min×3次,加入生物素标记的羊抗鼠IgG,37℃孵育30 min;加入辣根过氧化物酶标记的链霉素,自来水停染,苏木精复染,中性树胶封片。对照组用PBS代替一抗。(2)Western Blot分析制备的单克隆抗体与间皮素目的蛋白的反应性。从上述卵巢癌细胞中提取总蛋白质后,按考马斯亮蓝试剂盒说明测定蛋白质浓度,取50μg总蛋白质加入等体积(2×)上样缓冲液上样,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,先80V电泳30 min,后转为120 V电泳90 min。根据标准分子量蛋白质来确定待测蛋白质的位置(间皮素为40 000)进行转膜:由正极向负极按滤纸-膜-胶-滤纸的顺序,250mA 4小时,5%脱脂奶粉封闭1小时,加入小鼠抗人间皮素抗体2H10或5B2,4℃过夜。清晨洗膜20 min×3次,加入二抗,反应1小时,最后DAB显色。结果:1通过对MSLN氨基酸序列的B细胞抗原表位的多参数预测,所预测的一些抗原表位数目和所处的肽段位置有一些参数结果不同,但在氨基酸序列的153-162、282-292及471-481这三个肽段几种预测方法的结

关键词：间皮素可溶性间皮素相关蛋白抗原表位单克隆抗体免疫细胞化学

卵巢癌患者血清可溶性间皮素相关蛋白的检测及其意义

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中国实验诊断学 2014年第1期18卷 86-89页

作者：任玉霞吴京芳天水市第一人民医院妇产科甘肃天水714000

目的评价血清可溶性间皮素相关蛋白(SMRP)对卵巢癌的诊断价值。方法采用ELISA检测了63例卵巢癌患者、85例妇科良性疾病患者和51例健康对照个体血清SMRP水平。以受试者工作特征(ROC)曲线分析了SMRP对卵巢癌的诊断价值,并分析其与CA125联... 详细信息

目的评价血清可溶性间皮素相关蛋白(SMRP)对卵巢癌的诊断价值。方法采用ELISA检测了63例卵巢癌患者、85例妇科良性疾病患者和51例健康对照个体血清SMRP水平。以受试者工作特征(ROC)曲线分析了SMRP对卵巢癌的诊断价值,并分析其与CA125联合使用是否有助于提高卵巢癌的诊断准确性。结果卵巢癌患者血清SMRP水平显著高于妇科良性疾病患者和健康个体,且与患者的FIGO分期有关(P值均小于0.01)。CA125的ROC曲线下面积(AUC)与SMRP相近(CA125:SMRP=0.81:0.77,P=0.45)。SMRP的最佳诊断界值为1.67nmol/L,此时SMRP的诊断敏感性(95%可信区间)为0.82(0.73-0.90),特异性(95%可信区间)为0.66(0.54-0.78)。采用系列诊断实验联合CA125与SMRP时,其联合诊断敏感性为0.67,特异性为0.96;采用平行诊断实验联合CA125与SMRP时,其联合诊断敏感性为0.97,特异性为0.48。结论 SMRP对卵巢癌的诊断以及分期具有一定的价值,联合使用CA125与SMRP更有助于提高卵巢癌的诊断准确性。

关键词：可溶性间皮素相关蛋白卵巢癌诊断效能受试者工作特征曲线

沉默间皮素基因对可溶性间皮素相关蛋白表达及对上皮性卵巢癌生长转移的影响

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广东医学 2019年第10期40卷 1376-1380页

作者：陈春莹刘小乐程丽琴付艳霞中山大学附属第八医院(深圳福田)妇产科

目的探讨沉默间皮素(MSLN)基因对可溶性间皮素相关蛋白(SMRP)表达及对上皮性卵巢癌SKOV3细胞生长转移的影响。方法体外培养SKOV3细胞,实验分为3组,空白对照组不处理,阴性对照组转染MSLN siRNA阴性对照,沉默组转染MSLN siRNA。采用实时... 详细信息

目的探讨沉默间皮素(MSLN)基因对可溶性间皮素相关蛋白(SMRP)表达及对上皮性卵巢癌SKOV3细胞生长转移的影响。方法体外培养SKOV3细胞,实验分为3组,空白对照组不处理,阴性对照组转染MSLN siRNA阴性对照,沉默组转染MSLN siRNA。采用实时荧光定量PCR和Western blot检测MSLN和SMRP表达,采用MTT法和细胞集落形成实验检测细胞增殖,采用Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭、迁移,通过腹腔注射观察肿瘤细胞在小鼠体内生长转移情况。结果与空白对照组和阴性对照组比较,沉默组MSLN mRNA(0.10±0.02)表达显著降低(P蛋白(0.17±0.04)表达显著降低(P皮性卵巢癌SKOV3细胞体内、体外的生长转移。

关键词：间皮素可溶性间皮素相关蛋白上皮性卵巢癌生长转移

血清可溶性间皮素相关蛋白早期诊断大鼠恶性胸膜间皮瘤的实验研究

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医学研究杂志 2020年第9期49卷 32-35页

作者：江杰文亮吴莉谢晓洁赵雯韩丹昆明医科大学第一附属医院医学影像科 650032

目的通过定量检测大鼠恶性胸膜间皮瘤血清中SMRP的表达情况,探讨早期诊断恶性胸膜间皮瘤(MPM)的价值,为高危人群筛查、早期诊断提供理论依据及实验基础。方法采用ELISA法定量测定大鼠MPM SMRP的表达情况,分析MPM不同分期、不同病理类型... 详细信息

目的通过定量检测大鼠恶性胸膜间皮瘤血清中SMRP的表达情况,探讨早期诊断恶性胸膜间皮瘤(MPM)的价值,为高危人群筛查、早期诊断提供理论依据及实验基础。方法采用ELISA法定量测定大鼠MPM SMRP的表达情况,分析MPM不同分期、不同病理类型、不同分化程度的SMRP表达差异,应用受试者工作特征曲线(ROC曲线)获取早期诊断MPM的诊断效能。结果不同分期、不同分化程度的MPM SMRP表达比较差异有统计学意义(P0.05)。对T 1、T 2、T 3和T 4分期诊断AUC分别为0.83、0.86、0.92和0.85,敏感度、特异性分别为100.0%、88.2%,100.0%、85.7%,71.4%、100.0%和87.5%、100.0%,诊断阈值分别为1.90、4.53、8.73和11.97mmol/ml。对N 0、N 1、N 2分期诊断,AUC值为0.59、0.84、0.92,敏感度、特异性分别为100.0%、100.0%,47.1%、100.0%和64.0%、100.0%。对M 1分期诊断,AUC=0.88,敏感度、特异性分别为75.0%、100.0%。结论血清SMRP表达水平对筛查、早期诊断MPM具有重要价值,可作为MPM高危人群筛查的一项重要生化指标。

关键词：间皮素间皮瘤可溶性间皮素相关蛋白恶性胸膜间皮瘤

血清FOLR1、IL-1β及SMRP联合检测在上皮性卵巢癌早期诊断中的价值

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实用癌症杂志 2024年第5期39卷 734-737页

作者：张金磊张燕霞夏玉红河南省郑州人民医院 450000

目的分析血清叶酸受体-1(FOLR1)、白细胞介素-1(IL-1β)及可溶性间皮素相关蛋白(SMRP)联合检测在上皮性卵巢癌早期诊断中的价值。方法回顾性分析150例卵巢肿瘤患者的临床资料,以术后病理诊断结果为金标准,根据良恶性情况将其分为上皮性... 详细信息

目的分析血清叶酸受体-1(FOLR1)、白细胞介素-1(IL-1β)及可溶性间皮素相关蛋白(SMRP)联合检测在上皮性卵巢癌早期诊断中的价值。方法回顾性分析150例卵巢肿瘤患者的临床资料,以术后病理诊断结果为金标准,根据良恶性情况将其分为上皮性卵巢癌组(n=84)和非上皮性卵巢癌组(n=66)。比较2组入院时血清FOLR1、IL-1β、SMRP水平,采用ROC曲线分析入院时血清FOLR1、IL-1β、SMRP及联合检测对上皮性卵巢癌的早期诊断效能。根据上皮性卵巢癌组患者临床分期标准将其分为Ⅰ期组(n=12)、Ⅱ期组(n=27)、Ⅲ期组(n=31)、Ⅳ期组(n=14)4个亚组,比较不同临床分期的上皮性卵巢癌患者入院时血清FOLR1、IL-1β、SMRP水平差异。结果上皮性卵巢癌组患者入院时血清FOLR1、IL-1β、SMRP水平均高于非上皮性卵巢癌组(P皮性卵巢癌组患者入院时血清FOLR1、IL-1β、SMRP水平随临床分期升高而升高,且差异均有统计学意义(P皮性卵巢癌早期诊断中具有一定临床诊断价值,血清FOLR1、IL-1β、SMRP水平越高,说明卵巢肿瘤癌变情况越严重。临床治疗可根据血清FOLR1、IL-1β、SMRP水平提前采取治疗措施,以避免肿瘤进一步癌变。

关键词：叶酸受体-1 白细胞介素-1β 可溶性间皮素相关蛋白上皮性卵巢癌早期诊断

CT联合血清SMRP早期诊断大鼠恶性胸膜间皮瘤的研究

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放射学实践 2021年第2期36卷 152-157页

作者：江杰谢晓洁吴莉赵雯赵迅冉韩丹昆明医科大学第一附属医院医学影像科昆明650032

目的:探讨CT联合血清可溶性间皮素相关蛋白(SMRP)在提高早期诊断恶性胸膜间皮瘤(MPM)中的价值,为早期诊断MPM提供实验依据及理论基础。方法:采用右侧胸腔注射青石棉纤维混悬液诱发大鼠MPM,对大鼠行胸腹部CT平扫及增强扫描,对病变进行CT... 详细信息

目的:探讨CT联合血清可溶性间皮素相关蛋白(SMRP)在提高早期诊断恶性胸膜间皮瘤(MPM)中的价值,为早期诊断MPM提供实验依据及理论基础。方法:采用右侧胸腔注射青石棉纤维混悬液诱发大鼠MPM,对大鼠行胸腹部CT平扫及增强扫描,对病变进行CT分期,并比较CT对MPM不同分期的诊断价值。分析不同分期MPM的SMRP表达情况。分析CT联合SMRP早期诊断MPM的效能。结果:72例MPM中,CT诊断MPM 50例(69.4%),非MPM 5例(6.9%),未发现病变17例(23.7%)。基于CT鉴别MPM的受试者操作特征(ROC)曲线下面积(AUC)为0.65,敏感度为64.5%,特异度为71.2%。对T1、T2、T3、T4期诊断敏感度分别为35.7%、43.5%、89.3%、100.0%,特异度分别为44.4%、57.2%、90.0%、100%,AUC分别为0.68、0.82、0.95、1.00;对N、M分期诊断敏感度分别为72.5%、100.0%,特异度分别为75.0%、95.0%,AUC分别为0.82、0.85。MPM不同分期的血清SMRP表达差异具有统计学意义(P<0.05)。随着分期增高,SMRP表达量增加。CT检查联合血清SMRP检测诊断MPM的T分期,根据ROC曲线分析,AUC为0.97,敏感度为90.5%,特异度为92.5%;诊断N分期的AUC为0.96,敏感度为87.5%,特异度为92.5%;诊断M分期的AUC为0.95,敏感度为100%,特异度为98%,明显高于单独CT检查(Z分别为4.86、3.05、2.74,P<0.05)。结论:CT检查联合SMRP检测可用于MPM的早期诊断,可明显提高对早期MPM的诊断效能。

关键词：恶性胸膜间皮瘤体层摄影术,X线计算机间皮素可溶性间皮素相关蛋白

卵巢癌患者血清SMRP和HE4的表达及其临床意义

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中国老年学杂志 2011年第4期31卷 554-557页

作者：刘丽萍吴小华梁红霞河北医科大学妇产科教研室河北石家庄050011 解放军白求恩国际和平医院妇产科

目的探讨血清可溶性间皮素相关蛋白(SMRP)和人附睾蛋白-4(HE4)在卵巢癌早期诊断及病情监测中的临床意义。方法血清标本取自44例卵巢癌、56例良性肿瘤及40例健康志愿者。ELISA试剂盒测定血清HE4和SMRP,化学发光法测定CA125。结果卵巢癌... 详细信息

目的探讨血清可溶性间皮素相关蛋白(SMRP)和人附睾蛋白-4(HE4)在卵巢癌早期诊断及病情监测中的临床意义。方法血清标本取自44例卵巢癌、56例良性肿瘤及40例健康志愿者。ELISA试剂盒测定血清HE4和SMRP,化学发光法测定CA125。结果卵巢癌组血清CA125、HE4和SMRP高于其他两组。经过理想肿瘤减灭术的卵巢癌术后1 w血清CA125、HE4和SMRP水平明显减低。在诊断效能上,单独检测HE4特异度为100.00%,灵敏度86.36%;SMRP灵敏度77.27%,特异度97.92%;二者与CA125联合检测均可提高灵敏度或特异度。结论 HE4和SMRP补充完善了CA125用于卵巢癌的早期诊断和病情监测,具有较高的临床应用价值。

关键词：卵巢肿瘤早期诊断监测可溶性间皮素相关蛋白人附睾蛋白-4