检索结果-南通市图书馆

作者：夏铸重庆医科大学

学位级别：硕士

PPARγ(peroxisome proliferator activatived receptor γ，过氧化物酶体增殖物激活受体)是核激素受体超家族中的非常重要成员之一，除在脂肪组织中高表达外，在肺、结肠、乳腺、卵巢等组织也有不同程度的高表达。PPARγ既可参与调控... 详细信息

PPARγ(peroxisome proliferator activatived receptor γ，过氧化物酶体增殖物激活受体)是核激素受体超家族中的非常重要成员之一，除在脂肪组织中高表达外，在肺、结肠、乳腺、卵巢等组织也有不同程度的高表达。PPARγ既可参与调控细胞内脂肪代谢和糖代谢，又可抑制肿瘤细胞增殖、分化以及促进细胞凋亡、转运等。因此，PPARγ是肿瘤细胞信号传导途径中的重要靶点蛋白，现已成为热点研究的核受体之一。外源性制备hPPARγ重组蛋白(Human Peroxisome proliferator-activated receptor γ)，能够为其相关分子靶向药物的筛选打下坚实的基础。为此，本文拟制备可溶性全长hPPARγ重组蛋白，并对其活性进行研究，其主要研究内容及结果如下： 1.采用带有六个组氨酸[His]的泛素化小修饰蛋白(SUMO)为融合表达标签，设计并构建可溶性全长hPPARγ重组蛋白的表达质粒pReceiver-B13-SUMO-hPPARγ，经质粒转化，细菌培养，在优化条件(16℃、IPTG浓度0.5mM、诱导时间20h)下，表达出可溶性全长[His]-SUMO-hPPARγ重组蛋白，经SDS-PAGE电泳分析，与hPPARγ蛋白的理论分子量(67.2kDa，包括[His]-SUMO)是一致的。 2.采用Ni2+亲和色谱柱于变性条件下一步纯化目标蛋白，优化纯化条件，可获得纯度为90%的全长[His]-SUMO-hPPARγ变性重组蛋白。变性目标蛋白经透析复性后，能获得可溶性全长[His]-SUMO-hPPARγ重组蛋白。 3.利用DEAE-52阴离子交换树脂在非变性条件下一步纯化目标蛋白，用NaCl溶液梯度洗脱目标蛋白，从每升LB培养介质中可获得135mg、纯度为80%的可溶性全长[His]6-SUMO-hPPARγ重组蛋白。 4.采用分子排阻色谱-高效液相色谱法(size exclusion chromato-graphy-high performance chromatography，SEC-HPLC)，测定了全长[His]6-SUMO-hPPARγ重组蛋白与Ros(Rosiglitazone，罗格列酮)配体结合活性，其Kd值为492nM，结合率约为70%。综上所述，本文建立以带有[His]6组氨酸的泛素化小修饰蛋白为融合表达标签的质粒、重组表达、纯化得到具有生物学活性的可溶性全长[His]6-SUMO-hPPARγ重组蛋白的制备方法，采用DEAE-52阴离子交换树脂一步纯化法，从每升培养液中可制备得到135mg、纯度为80%的全长[His]6-SUMO-hPPARγ重组蛋白。为建立基于全长hPPARγ重组蛋白为作用靶点蛋白的抗肿瘤药物筛选平台奠定了基础。

关键词： hPPARγ 可溶性重组蛋白全长 hPPARγ重组蛋白制备活性

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马缨杜鹃查尔酮异构酶(RdCHI1)重组蛋白的制备及功能验证

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福建农业学报 2023年第5期38卷 574-582页

作者：王聿晗孙世宇鞠志刚孙威徐小蓉贵州师范大学生命科学学院/植物生理与发育调控重点实验室贵州贵阳550025 贵州中医药大学药学院贵州贵阳550025 西南喀斯特山地生物多样性保护重点实验室贵州贵阳550025

【目的】制备马缨杜鹃(Rhododendron delavayi)查尔酮异构酶(Chalcone isomerase,CHI)基因表达的重组蛋白并验证其活性,为解析查尔酮异构酶功能提供理论依据,为改良植物花色、增加药用成分奠定基础。【方法】根据所获得的马缨杜鹃查尔... 详细信息

【目的】制备马缨杜鹃(Rhododendron delavayi)查尔酮异构酶(Chalcone isomerase,CHI)基因表达的重组蛋白并验证其活性,为解析查尔酮异构酶功能提供理论依据,为改良植物花色、增加药用成分奠定基础。【方法】根据所获得的马缨杜鹃查尔酮异构酶RdCHI1基因的序列信息设计引物,构建其原核表达载体,优化RdCHI1可溶性重组蛋白最佳诱导表达条件,制备可溶性重组蛋白并检测其活性。【结果】成功构建RdCHI1原核表达载体,RdCHI1重组蛋白可在上清中表达,最佳诱导条件为:15℃、36 h,IPTG浓度0.35 mmol·L^(-1)。经镍柱纯化得到质量较好的RdCHI1重组蛋白,通过体外酶活反应确定,与对照组相比,RdCHI1可以更快地催化柚皮素查尔酮(Naringenin chalcone)反应生成柚皮素(Naringenin)。【结论】RdCHI1为I型CHI,可极大提高柚皮素查尔酮生成柚皮素的速率,增加黄酮类物质积累量。

关键词：马缨杜鹃查尔酮异构酶原核表达载体可溶性重组蛋白酶活测定

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日本蛇根草CHI基因原核表达载体的构建及重组蛋白的纯化

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贵州师范大学学报(自然科学版) 2018年第4期36卷 36-39页

作者：申欢林建李欲轲潘蓉蓉彭贵孙威贵州师范大学生命科学学院/植物生理与发育调控重点实验室

在克隆得到日本蛇根草查尔酮异构酶基因(OjCHI 702 bp)的基础上,完成OjCHI原核表达载体p ET32aCHI的构建,并对OjCHI可溶性重组蛋白的诱导表达条件进行摸索。结果显示,OjCHI可溶性重组蛋白的诱导表达条件为:IPTG浓度0.35 mmol/L,30℃下诱... 详细信息

在克隆得到日本蛇根草查尔酮异构酶基因(OjCHI 702 bp)的基础上,完成OjCHI原核表达载体p ET32aCHI的构建,并对OjCHI可溶性重组蛋白的诱导表达条件进行摸索。结果显示,OjCHI可溶性重组蛋白的诱导表达条件为:IPTG浓度0.35 mmol/L,30℃下诱导10 h。按照上述条件制备并纯化获得大量符合预期大小(45.018KD)的OjCHI可溶性重组蛋白,该结果为后续研究OjCHI基因的生物学功能奠定了基础。

关键词： OjCHI 原核表达载体可溶性重组蛋白

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环鸟苷二磷酸代谢相关基因PXO_03877的原核表达

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生物技术通报 2011年第12期27卷 162-165页

作者：王红敏田芳陈华民何晨阳中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193

分别利用表达载体pET-32a(+)和pGEX-4T-1,对水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzaepv.oryzae,简称Xoo)中环鸟苷二磷酸代谢相关基因PXO_03877进行了原核表达,并进行可溶性检测。结果显示,用pET-32a(+)载体构建的表达质粒载体经诱导后,重组... 详细信息

分别利用表达载体pET-32a(+)和pGEX-4T-1,对水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzaepv.oryzae,简称Xoo)中环鸟苷二磷酸代谢相关基因PXO_03877进行了原核表达,并进行可溶性检测。结果显示,用pET-32a(+)载体构建的表达质粒载体经诱导后,重组蛋白大多位于沉淀而非上清中,经诱导条件优化后,蛋白仍以包涵体形式存在;而利用pGEX-4T-1载体表达的含有GST标签的重组蛋白为可溶性蛋白,可用于下一步纯化后进行功能分析。

关键词：水稻白叶枯病菌 PXO_03877 可溶性重组蛋白 pET-32a(+) pGEX-4T-1

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