检索结果-南通市图书馆

化学学报 2023年第12期81卷 1673-1680页

作者：李畅郑振东郑江南田瑞军南方科技大学理学院化学系深圳518055

糖蛋白在细胞活动和疾病发生发展过程中发挥着重要作用.然而,在复杂的生物样本中,糖蛋白的丰度往往较低,因而在质谱分析前必须对其进行富集以实现高灵敏质谱分析.目前,已经发展出诸多糖蛋白富集方法,其中肼化学法与肟点击化学法因对糖... 详细信息

糖蛋白在细胞活动和疾病发生发展过程中发挥着重要作用.然而,在复杂的生物样本中,糖蛋白的丰度往往较低,因而在质谱分析前必须对其进行富集以实现高灵敏质谱分析.目前,已经发展出诸多糖蛋白富集方法,其中肼化学法与肟点击化学法因对糖蛋白标记的普适性与无偏性受到了越来越多的关注.然而,由于这些方法以共价连接或者超高亲和力生物素结合的方式在固相载体上捕获糖蛋白,因此无法选择性地洗脱被富集的糖蛋白.传统的方法是在固相载体上直接进行酶解,因此无法排除非特异性吸附蛋白、内源性生物素化蛋白、固相载体上的链霉亲和素等无关蛋白对糖蛋白质谱分析产生的背景干扰.本工作设计并合成了三种可断裂的双功能探针[生物素-偶氮苯-氧胺(BAA)、生物素-N-1-(4,4-二甲基-2,6-二氧环亚己基)乙基-氧胺(BDA)、生物素-邻硝基苄基-氧胺(BNA)],通过温和的方式从固相载体上释放糖蛋白,从而排除非糖蛋白的干扰,提高糖蛋白富集的选择性.对三种探针的标记与富集效果、切割效率、蛋白回收率等性能进行了评估.结果显示,探针BDA与BNA的性能较为优越.最后,探针BNA被应用于细胞表面糖蛋白的分离富集与质谱鉴定中.与传统的在固相载体上直接进行酶解的方法相比,该方法中非糖蛋白数目从3564降到了2139,降幅达到了40.0%,糖蛋白的无标定量(LFQ)分析强度提升了104.2%.此外,切割方法极大降低了内源性生物素化蛋白的干扰.上述结果表明,可断裂双功能探针显著地提高了糖蛋白质谱鉴定的灵敏度与选择性,为生物与医学等领域中糖蛋白的深度解析提供了新的工具.

关键词：糖蛋白质谱富集肟点击化学可断裂探针

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