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基于叠加elisa方法检测新西兰兔IFN-γ单克隆抗体的抗原结合位点

基于叠加ELISA方法检测新西兰兔IFN-γ单克隆抗体的抗原结合位点

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中国畜牧兽医学会养兔学分会成立大会暨第一届学术交流大会

作者：陶鸽如汪运舟刘贤勇索勋中国农业大学动物医学院

近年来,随着家兔实验动物学价值的日益突出和疫病防控的深入推进,对其拮抗疾病的免疫学检测具有重要意义。单克隆抗体(mAb)以其高度特异性,广泛用于临床医学的疾病诊断。而利用识别同一抗原不同抗原表位的抗体对进行的免疫学检测方法,... 详细信息

近年来,随着家兔实验动物学价值的日益突出和疫病防控的深入推进,对其拮抗疾病的免疫学检测具有重要意义。单克隆抗体(mAb)以其高度特异性,广泛用于临床医学的疾病诊断。而利用识别同一抗原不同抗原表位的抗体对进行的免疫学检测方法,还具有灵敏度高等特点。叠加elisa可在一次试验中分析多个单克隆抗体对抗原位点的特异性,而无需将抗体进行标记偶联。本研究基于叠加elisa方法,对获得的家兔IFN-γ单克隆抗体的抗原结合位点进行检测,以期获得识别不同抗原表位的单克隆抗体,为后续家兔免疫学研究提检测工具。本研究成功制备了7株家兔IFN-γ单克隆抗体(No.1、8、9、11、23、25、26),选取1号单克隆抗体作为基准,寻找与其识别不同抗原结合位点的单克隆抗体。第一步,以0.5μg/ml家兔IFN-γ重组蛋白包板,将所有单克隆抗体杂交瘤细胞培养上清由1:50开始倍比稀释,以寻找抗原抗体最佳反应浓度——即OD 450呈现线性关系的抗体稀释倍数。第二步,将0.5μg/ml家兔IFN-γ重组蛋白包板,每孔加入单个或两个不同组合的单克隆抗体,其稀释度均为上述呈线性关系的范围内,且加入的两个单克隆抗体量相等。第三步,将elisa测定的单个单克隆抗体与组合单克隆抗体的OD450以下述公式计算叠加系数:。在最佳抗原抗体稀释倍数,若两个mAb结合到不同的抗原决定簇时,,;当两个mAb所识别的是相同的抗原位点时,则,。考虑轻微的技术误差,当时即认为这两个单克隆抗体识别不同的抗原位点。实验结果证明:1,所用的单克隆抗体上清在稀释1:400至1:3200时,抗原抗体为最适配比;2、No.1与No.8所识别的是相同的抗原位点,与No.9、No.11、No.23、No.25、No.26识别的是不同的抗原位点。本研究利用叠加elisa方法检测了7株家兔IFN-γ单克隆抗体对IFN-γ重组蛋白的抗原识别位点,并发现五株与No.1单克隆抗体结合不同抗原表位的单克隆。为了更好地应用于临床样品的检验,对上述单克隆抗体识别天然抗原的能力还有待检验。获得的IFN-γ单克隆抗体抗体对将很好的应用于家兔IFN-γ的分泌水平的检测方法,例如夹心elisa、ELISpot、流式CBA等,为揭示家兔拮抗疾病的免疫应答与建立提供有力的工具。

关键词：家兔 IFN-γ 抗原识别位点叠加elisa

来源： cnki会议评论

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