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受体相互作用蛋白140敲低对小鼠小胶质瘤细胞增殖的影响

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中华医学杂志 2008年第40期88卷 2857-2861页

作者：晁爽郁卫东杜军保曾超美梁蓉杨丽君陈敏霞赵贺华郭静竹北京大学人民医院儿科 100044 北京大学人民医院临床分子生物学研究所 100044 北京大学第一医院儿科

目的探讨受体相互作用蛋白（RIP）140基因敲低对小鼠小胶质瘤细胞（BV-2）增殖的影响。方法用脂质体转染方法将RIP140-短发夹RNA（shRNA）质粒导入BV-2细胞，用嘌呤霉素筛选稳定表达RIP140-shRNA的细胞系，用实时定量PCR和Western印迹... 详细信息

目的探讨受体相互作用蛋白（RIP）140基因敲低对小鼠小胶质瘤细胞（BV-2）增殖的影响。方法用脂质体转染方法将RIP140-短发夹RNA（shRNA）质粒导入BV-2细胞，用嘌呤霉素筛选稳定表达RIP140-shRNA的细胞系，用实时定量PCR和Western印迹法检测RIP140敲低的效果，用四甲基偶氮唑蓝（MTY）法检测RIP140敲低对细胞增殖的影响。结果成功构建稳定表达RIP140-shRNA的BV-2-71674和BV-2-71080；与BV-2细胞相比，BV-2-71674和BV-2-71080细胞中RIP140的表达无论mRNA水平还是蛋白质水平均明显低，下调率（mRNA）分别为73％和75％（均P〈0．01）；MTT法检测显示，BV-2细胞在24、48、72、96h 4个时间点增殖率分别为3．03±0．01、7．36±0．08、14．15±0．25、23．35±0．09，BV-2-71674细胞则分别为2．15±0．03、6．43±0．08、11．77±0．31、18．47±0．04，BV-2-71080细胞分别为1．77±0．03、4．74±0．25、10．03±0．02、17．66±0．21；BV-2-71674和BV-2-71080细胞增殖率均明显低于BV-2细胞，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论RIP140敲低可以抑制BV-2细胞的增殖。

关键词：神经胶质瘤细胞增殖受体相互作用蛋白140

受体相互作用蛋白140在脓毒症急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞中的表达及其作用

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第三军医大学学报 2015年第9期37卷 851-857页

作者：雷传江焦艳王关嵩戢福云王建春第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037

目的探讨受体相互作用蛋白140（receptor interacting protein140,RIP140）在脓毒症急性肺损伤（acute lung injury,ALI）大鼠肺泡巨噬细胞中的表达及其在炎症反应过程中的作用。方法 36只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假... 详细信息

目的探讨受体相互作用蛋白140（receptor interacting protein140,RIP140）在脓毒症急性肺损伤（acute lung injury,ALI）大鼠肺泡巨噬细胞中的表达及其在炎症反应过程中的作用。方法 36只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术组和盲肠结扎穿孔术（CLP）致脓毒症肺损伤3、6、12、24 h组。HE染色观察肺组织病理变化;免疫组化检测RIP140在肺组织的表达分布;Western blot及免疫荧光观察肺泡巨噬细胞RIP140的表达变化及定位;RT-q PCR测定肺泡巨噬细胞IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA水平变化。结果 CLP组可见明显肺损伤病理改变且随时间进展逐渐加重。RIP140在脓毒症肺损伤大鼠肺组织中主要表达于炎性渗出细胞,且随时间进展,表达RIP140的细胞数量逐渐增多。CLP术后6 h大鼠肺巨噬细胞RIP140蛋白表达水平较正常对照组开始升高（P〈0.05）,至12~24 h维持一较高水平,且主要表达于细胞核。CLP术后3 h大鼠肺巨噬细胞IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA水平较正常对照组开始升高（P〈0.05）,至12~24 h维持一较高水平,下调肺泡巨噬细胞RIP140的表达可明显抑制IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA的表达。结论脓毒症肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞可通过上调RIP140表达增强肺组织炎症反应,从而参与早期急性肺损伤的炎症应答。

关键词：受体相互作用蛋白140 急性肺损伤肺泡巨噬细胞脓毒症

受体相互作用蛋白140对吡格列酮改善胰岛β细胞糖脂毒性损伤的影响

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中国糖尿病杂志 2016年第12期24卷 1094-1099页

作者：薛君力曾姣娥代喆彭湾湾徐焱成湖北省荆州市中心医院内分泌科 434020 武汉大学中南医院内分泌科

目的探讨过氧化物酶增殖活化受体-γ(PPAR-γ)激动剂吡格列酮对胰岛β细胞糖脂毒性损伤的保护及受体相互作用蛋白140(RIP140)在其中的介导机制。方法将胰岛β细胞株MIN6细胞分为NC组、高糖高脂组、吡格列酮干预组。稳定过表达RIP140的M... 详细信息

目的探讨过氧化物酶增殖活化受体-γ(PPAR-γ)激动剂吡格列酮对胰岛β细胞糖脂毒性损伤的保护及受体相互作用蛋白140(RIP140)在其中的介导机制。方法将胰岛β细胞株MIN6细胞分为NC组、高糖高脂组、吡格列酮干预组。稳定过表达RIP140的MIN6细胞(O-RIP140-MIN6)和过表达绿色荧光蛋白(GFP)的MIN6细胞(GFP-MIN6)。分别予高糖高脂(25 rmmol/L葡萄糖+500μmol/L棕榈酸)和/或10/μmol/L吡格列酮干预。利用MTT分别检测各组细胞增殖率、流式细胞仪检测凋亡率、RT-PCR检测RIP140 mRNA、Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达、硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)水平及黄嘌呤氧化酶法检测超氧化合物歧化酶(SOD)含量。结果 NC组、高糖高脂组及吡格列酮干预组MTT吸光值分别为:24 h(1.80±0.04)、(0.95±0.04)及(0.97±0.03);48 h(2.70±0.11)、(1.04±0.06)及(1.30±0.03)。NC组与高糖高脂组比较,差异有统计学意义(24 h:t=25.94,P140表达量分别为(1.13±0.11)、(2.34±0.21)(vs NC组,t=9.69,P140-MIN6和GFP-MIN6细胞分别给予高糖高脂及吡格列酮处理后,两组MTT吸光值:24 h(1.04±0.07)vs(1.40±0.16)(t=5.01,P140表达来抑制高糖高脂对胰岛β细胞的损伤。

关键词：受体相互作用蛋白140 吡格列酮胰岛β细胞糖脂毒性

受体相互作用蛋白140在小鼠原代小胶质细胞中的表达分析

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中日友好医院学报 2010年第3期24卷 167-170,F0004页

作者：章利琴郁卫东谢丽娜严荔煌曾超美郭静竹北京大学人民医院儿科北京100044 北京大学人民医院临床分子生物学研究所北京100044 北京大学人民医院妇产科北京100044

目的:分离、纯化和原代培养小鼠的小胶质细胞并检测该细胞中受体相互作用蛋白140(RIP140)的表达模式。方法:以McCarthy等的经典培养方法为基础进行小鼠小胶质细胞的分离,以不换液营养缺失法、机械振摇法纯化和培养小鼠小胶质细胞;用CD11... 详细信息

目的:分离、纯化和原代培养小鼠的小胶质细胞并检测该细胞中受体相互作用蛋白140(RIP140)的表达模式。方法:以McCarthy等的经典培养方法为基础进行小鼠小胶质细胞的分离,以不换液营养缺失法、机械振摇法纯化和培养小鼠小胶质细胞;用CD11b(MAC-1)对分离的小鼠小胶质细胞进行鉴定;采用实时-聚合酶链反应和western免疫印迹法检测RIP140mRNA和蛋白质在小鼠原代小胶质细胞中的表达模式;用免疫细胞化学确定RIP140在小胶质细胞中的定位表达模式。结果:成功对小鼠小胶质细胞进行了分离、纯化和培养;mRNA和蛋白表达分析显示,RIP140在小鼠原代小胶质细胞中确有表达,免疫组化结果提示RIP140主要在小鼠小胶质细胞的细胞核中表达。结论:利用McCarthy经典改良方法可成功分离纯化出高纯度小鼠原代小胶质细胞;小鼠原代小胶质细胞确实表达RIP140,以细胞核表达为主。

关键词：小胶质细胞受体相互作用蛋白140 表达

高脂饮食肥胖模型小鼠脂肪组织受体相互作用蛋白140基因的表达

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中国组织工程研究 2014年第18期18卷 2892-2896页

作者：翟焱盼王娈马瑞欣青岛大学医学院附属医院内分泌科山东省青岛市266003

背景:受体相互作用蛋白140基因敲除小鼠可通过增加线粒体生物功能、脂肪酸氧化、氧化磷酸化等代谢途径来抵抗高脂饮食诱导的肥胖。目的:构建高脂饮食致肥胖模型小鼠,观察脂肪组织受体相互作用蛋白140 mRNA表达水平变化及胰岛素抵抗的关... 详细信息

背景:受体相互作用蛋白140基因敲除小鼠可通过增加线粒体生物功能、脂肪酸氧化、氧化磷酸化等代谢途径来抵抗高脂饮食诱导的肥胖。目的:构建高脂饮食致肥胖模型小鼠,观察脂肪组织受体相互作用蛋白140 mRNA表达水平变化及胰岛素抵抗的关系。方法:将C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组和高脂饮食组,分别喂养14周后,测量2组小鼠体质量,选取高脂饮食组中体质量大于对照组小鼠平均体质量20%的小鼠作为肥胖组小鼠。结果与结论:高脂饮食组小鼠中有12只符合标准计入肥胖组。肥胖组小鼠三酰甘油、总胆固醇、空腹血糖、空腹胰岛素水平和胰岛素抵抗指数均明显高于对照组(P受体相互作用蛋白140 mRNA的表达高于对照组(P受体相互作用蛋白140 mRNA表达水平与三酰甘油水平、胰岛素抵抗指数呈正相关(r=0.526,P0.05)。

关键词：实验动物组织构建受体相互作用蛋白140 核受体能量平衡肥胖胰岛素抵抗脂肪组织小鼠

较高浓度神经肽Y抑制人脂肪干细胞增殖并促进其分化

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第2期32卷 185-190页

作者：吴尉胡平安梁芳宋小琴刘敏中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院老干头颈内科湖南长沙410013 中南大学湘雅三医院内分泌科湖南长沙410013 中南大学湘雅三医院营养科湖南长沙410013

目的研究不同浓度神经肽Y(NPY)对人脂肪干细胞(h ADSC)增殖及分化的影响。方法分离h ADSC,用(10^(-6)~10^(-15))mol/L NPY诱导刺激h ADSC,MTT法检测其增殖;分别用完全培养基、NPY和胰岛素处理h ADSC,油红O染色观察h ADSC的分化;Western ... 详细信息

目的研究不同浓度神经肽Y(NPY)对人脂肪干细胞(h ADSC)增殖及分化的影响。方法分离h ADSC,用(10^(-6)~10^(-15))mol/L NPY诱导刺激h ADSC,MTT法检测其增殖;分别用完全培养基、NPY和胰岛素处理h ADSC,油红O染色观察h ADSC的分化;Western blot法检测各组过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、诱导细胞死亡的d FF45样效应因子C(Cidec)和受体相互作用蛋白140(RIP140)的表达水平。结果 (10^(-11)~10^(-15))mol/L NPY促进h ADSC增殖,(10^(-6)~10^(-10))mol/L NPY抑制h ADSC增殖;(10^(-7)、10^(-9)、10^(-11))mol/L NPY均诱导h ADSC分化,并增加PPARγ、C/EBPα蛋白表达,同时促进白色脂肪组织特异性标志Cidec、RIP140蛋白的表达。结论较低浓度NPY促进h ADSC增殖,较高浓度NPY抑制h ADSC增殖并促进其分化。

关键词：神经肽Y 人脂肪干细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ CCAAT增强子结合蛋白α 诱导细胞死亡的DFF45样效应因子C 受体相互作用蛋白140

RIPl40过表达对神经母细胞瘤细胞迁移及增殖的影响

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中华医学杂志 2014年第32期94卷 2540-2543页

作者：冯霄郁卫东梁荣石程赵竹然郭静竹北京大学人民医院儿科 100044 北京大学人民医院临床分子生物研究所 100044 北京大学人民医院生殖研究中心 100044

目的探讨受体相互作用蛋白140（RIPl40）过表达对小鼠神经母细胞瘤细胞（N2a细胞）迁移和增殖的影响。方法采用脂质体转染法将RIPl40过表达质粒导入N2a细胞，经G418筛选出稳定过表达RIPl40的细胞系，利用实时定量PCR及Westem印迹法对构... 详细信息

目的探讨受体相互作用蛋白140（RIPl40）过表达对小鼠神经母细胞瘤细胞（N2a细胞）迁移和增殖的影响。方法采用脂质体转染法将RIPl40过表达质粒导入N2a细胞，经G418筛选出稳定过表达RIPl40的细胞系，利用实时定量PCR及Westem印迹法对构建的细胞模型进行鉴定；分别采用Transwell小室和活细胞计数试剂盒（CCK）8检测RIPl40过表达对N2a细胞迁移和增殖的影响。结果将RIPl40过表达质粒导入N2a细胞，成功构建RIPl40过表达的N2a细胞模型N2a-ripl40，与N2a细胞相比，N2a-ripl40细胞中RIPl40mRNA及蛋白表达量均增高。迁移检测显示N2a细胞迁移数明显高于N2a-ripl40细胞[（70±20）个比（5±4）个，P〈0．05]。细胞增殖检测显示N2a细胞在24、48、72h的增殖率分别为1．567±0．107、3．018±0．212、4．112±0．221，而N2a-ripl40细胞为1．561±0．281、2．232±0．235、4．025±0．217，两种细胞在3个时间点的增殖率差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论RIPl40过表达抑制N2a细胞的迁移行为，但不影响其增殖行为。

关键词：神经母细胞瘤细胞迁移分析细胞增殖受体相互作用蛋白140

RIP140在H2O2诱导MIN6细胞损伤中的作用机制研究

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中华内分泌代谢杂志 2014年第6期30卷 516-519页

作者：薛君力邓浩华曾姣娥陈小奇代喆邹润梅孙家忠徐焱成武汉大学中南医院内分泌科 430071 湖北省荆州市中心医院内分泌科 434020

MIN6细胞给予400 μmol/L H2O2处理分为正常对照组、正常加H2 O2组、Scramble siRNA（Small interfering RNA）组和RIP140 siRNA组,400 μmol/L H2O2能增加MIN6细胞的凋亡率（27.89％±1.91％对3.74％±0.55％,P＜0.01）和丙二醛含量[（35.17±6.26对20.07±1.86） nmol/mg,P＜0.05],明显减少MIN6细胞活力（24和48 h,均P＜0.01）、总超氧化合物歧化酶水平[SOD,（4.79±0.85对3.09±0.60） U/mg,P＜0.05].下调受体相互作用蛋白140（RIP140）表达能减少H2O2诱导的MIN6细胞凋亡率（11.45％ ±2.27％对30.39％±5.32％,P＜0.01）和丙二醛含量[（22.32±1.94对33.42±2.51）nmol/mg,P＜0.01],增加总SOD水平[（5.32±0.40对3.09 ±0.15）nmol/mg,P＜0.01）].

关键词：受体相互作用蛋白140 过氧化氢 MIN6细胞增殖细胞凋亡

糖尿病肾病患者外周血单个核细胞RIP140 mRNA表达变化及意义

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山东医药 2015年第46期55卷 44-45页

作者：朱双双王娈马瑞欣青岛大学附属医院山东青岛266003

目的观察糖尿病肾病(DN)患者外周血单个核细胞受体相互作用蛋白140(RIP140)mRNA的表达变化并探讨其意义。方法 65例2型糖尿病患者分为单纯2型糖尿病30例(糖尿病组)和DN 35例(DN组),另选28例健康体检者为对照组,采用RT-PCR法检测各组外... 详细信息

目的观察糖尿病肾病(DN)患者外周血单个核细胞受体相互作用蛋白140(RIP140)mRNA的表达变化并探讨其意义。方法 65例2型糖尿病患者分为单纯2型糖尿病30例(糖尿病组)和DN 35例(DN组),另选28例健康体检者为对照组,采用RT-PCR法检测各组外周血单个核细胞的RIP140、TNF-α、IL-6 mRNA。采用ELISA法测定各组血清TNF-α、IL-6。结果外周血单个核细胞中RIP140、TNF-α、IL-6 mRNA表达及血清IL-6水平均为DN组>糖尿病组>对照组,P均140 mRNA表达与IL-6 mRNA(r=0.374,P=0.046)、TNF-αmRNA(r=0.505,P=0.002)、血清TNF-α水平(r=0.593,P=0.001)呈正相关。结论 DN患者外周血单个核细胞RIP140mRNA表达升高,其可能通过调控微炎过程参与DN的发生、发展。

关键词：糖尿病肾病受体相互作用蛋白140 肿瘤坏死因子α 白细胞介素6 外周血单个核细胞