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可视法脑片膜片钳技术观察大鼠前庭内侧核神经元毒蕈碱样胆碱能受体的电生理特性

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2007年第1期42卷 48-52页

作者：张宇孔维佳刘邦华郭长凯孙大为夏交朱云张建华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻咽喉科武汉430022

目的建立大鼠前庭内侧核脑片可视法膜片钳实验技术,探讨前庭内侧核神经元毒蕈碱样胆碱能受体(muscarinic cholinergic receptor,M 受体)介导电流的生物学特性。方法选用15只Wistar 大鼠用于制备前庭内侧核脑片,应用红外微分干涉相差(inf... 详细信息

目的建立大鼠前庭内侧核脑片可视法膜片钳实验技术,探讨前庭内侧核神经元毒蕈碱样胆碱能受体(muscarinic cholinergic receptor,M 受体)介导电流的生物学特性。方法选用15只Wistar 大鼠用于制备前庭内侧核脑片,应用红外微分干涉相差(infrared differential interferencecontrast,IR-DIC)技术结合电荷耦合式感光成像(charge coupled device-camera,CCD-camera)系统,在可视法膜片钳全细胞记录模式下对20个正常功能状态的前庭内侧核神经元 M 受体的通道电流性质进行观察和分析。结果可视法脑片膜片钳技术可对神经元直接进行准确定位和功能状态的筛选。前庭内侧核神经元给予毒草碱后电流-电压(I-V)曲线斜率增加,毒蕈碱引发效应电流的反转电位为(-88.4±4.9)mV(±s,下同),表明 M 受体去极化效应是由钾电导的减少所介导;M 受体介导电流的电压敏感性测试显示:毒蕈碱引发的效应曲线呈线性关系,反转电位为(-86.7±3.5)mV,提示毒蕈碱所阻断的钾电流为非电压敏感性的漏钾电流。结论可视法脑片膜片钳实验技术克服了盲法脑片膜片钳技术的缺陷,提高了神经元封接的成功率。通过对前庭内侧核神经元 M 受体通道电流性质的分析,进一步揭示毒蕈碱样胆碱能机制的兴奋性调节作用,为临床抗胆碱药物的应用提供新思路。

关键词：前庭神经核受体,毒蕈碱膜片钳术

苯环喹溴铵的毒蕈碱样乙酰胆碱受体亚型选择性研究

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中国新药与临床杂志 2010年第1期29卷 45-49页

作者：李娟何海霞周远大陈小平重庆医科大学附属第一医院临床药理研究室重庆400016 北京世桥生物制药有限公司北京100131

目的探讨苯环喹溴铵对毒蕈碱样乙酰胆碱受体(M受体)亚型的选择性。方法以表达单一M受体亚型的CHO细胞株进行细胞与[3H]-QNB的饱和实验,并进行竞争抑制药和[3H]-QNB与M受体亚型的竞争结合实验,计算Kd值和Ki值。通过离体膀胱肌条实验评价... 详细信息

目的探讨苯环喹溴铵对毒蕈碱样乙酰胆碱受体(M受体)亚型的选择性。方法以表达单一M受体亚型的CHO细胞株进行细胞与[3H]-QNB的饱和实验,并进行竞争抑制药和[3H]-QNB与M受体亚型的竞争结合实验,计算Kd值和Ki值。通过离体膀胱肌条实验评价苯环喹溴铵干预乙酰胆碱对离体膀胱肌条的收缩作用,计算pA2值。观察苯环喹溴铵对麻醉犬心率、心电图的影响及其对小鼠气管分泌功能的影响。结果苯环喹溴铵对3种细胞的抑制强度为CHOM3>CHOM1>CHOM2,对CHOM3和CHOM1的抑制能力相似,明显高于对CHOM2的抑制能力(P碱对离体膀胱肌条的收缩作用,使量效曲线平行右移,PA2值为7.09±s0.06。与溶媒组相比,苯环喹溴铵经鼻给药后对麻醉犬的心率和心电图无明显影响(P>0.05)。苯环喹溴铵大剂量组给药后1h、2h和中剂量组给药后2h能明显减少小鼠气管分泌物的分泌(P受体亚型的拮抗药。

关键词：受体,毒蕈碱乙酰胆碱 CHO细胞苯环喹溴铵

咪达唑仑对健康成年大鼠和东莨菪碱大鼠脑内M受体的影响

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北京大学学报（医学版） 2006年第3期38卷 284-288页

作者：张捷吴新民左萍萍北京大学第一医院麻醉科北京100034 中国医学科学院基础医学研究所药理室

目的:观察预先腹腔注射咪达唑仑对健康成年大鼠和东莨菪碱大鼠大脑皮层及海马组织中胆碱能毒蕈碱样受体(MR)的近期和远期影响。方法:(1)近期影响组38只SD大鼠随机分为4组:对照组(Con,n=9),咪达唑仑组(Mid,n=9),东莨菪碱组(Sco,n=10),咪... 详细信息

目的:观察预先腹腔注射咪达唑仑对健康成年大鼠和东莨菪碱大鼠大脑皮层及海马组织中胆碱能毒蕈碱样受体(MR)的近期和远期影响。方法:(1)近期影响组38只SD大鼠随机分为4组:对照组(Con,n=9),咪达唑仑组(Mid,n=9),东莨菪碱组(Sco,n=10),咪达唑仑+东莨菪碱组(Mid+sco,n=10)。第1,2,3天,Mid组和Mid+sco组大鼠每天腹腔注射咪达唑仑50mg/kg,Con组和Sco组大鼠每天腹腔注射同体积的生理盐水。第4,5,6天,Sco组和Mid+sco组大鼠每天腹腔注射东莨菪碱0.8mg/kg,Con组和Mid组大鼠每天腹腔注射同体积的生理盐水。(2)远期影响组36只SD大鼠随机分为4组:对照组(Con,n=9),咪达唑仑组(Mid,n=9),东莨菪碱组(Sco,n=9),咪达唑仑+东莨菪碱组(Mid+sco,n=9)。第1,2,3天,Mid组和Mid+sco组大鼠每天腹腔注射咪达唑仑50mg/kg,Con组和Sco组大鼠每天腹腔注射同体积的生理盐水。第10,11,12天,Sco组和Mid+sco组大鼠每天腹腔注射东莨菪碱0.8mg/kg,Con组和Mid组大鼠每天腹腔注射同体积的生理盐水。(3)给药完毕后急性处死大鼠,分离脑组织的皮层和海马,用放射配体结合分析法测定MR与[3H]QNB的特异性结合量。选择近期影响组大鼠的海马组织进行MR受体饱和实验,用Scatchard曲线分析受体的平衡解离常数(Kd)和最大结合容量(Bmax)的变化。结果:(1)近期影响组海马MR与[3H]QNB特异性结合量Con组高于Mid组、Sco组和Mid+Sco组(均P碱大鼠海马MR与[3H]QNB的特异性结合量与海马MR密度和亲和力发生改变有关,对健康成年大鼠和东莨菪碱大鼠海马MR与[3H]QNB的特异性结合量无长期影响。

关键词：咪达唑仑东莨菪碱受体,毒蕈碱

高脂血症对雄性兔膀胱功能的影响及其可能机制

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中华医学杂志 2013年第42期93卷 3338-3342页

作者：刘希高唐渊虞巍吴士良金杰山东大学齐鲁医院泌尿外科济南250012 北京大学第一医院泌尿外科暨北京大学泌尿外科研究所

目的单纯高脂饲料饲养雄性新西兰兔建立高脂血症动物模型,研究高脂血症对膀胱功能、形态学的影响及可能机制.方法选取体重2.5～3.0 kg成年雄性新西兰兔30只,依次编号后采用随机抽签法随机分成高脂饲料（高脂组）及普通饲料（对照组）... 详细信息

目的单纯高脂饲料饲养雄性新西兰兔建立高脂血症动物模型,研究高脂血症对膀胱功能、形态学的影响及可能机制.方法选取体重2.5～3.0 kg成年雄性新西兰兔30只,依次编号后采用随机抽签法随机分成高脂饲料（高脂组）及普通饲料（对照组）两组,分别进行在体膀胱尿动力学检查及离体逼尿肌肌条张力实验评估膀胱功能,HE染色观察膀胱壁及髂内动脉形态变化,透射电镜下观察膀胱逼尿肌肌细胞微结构变化,以及免疫组织化学方法确定膀胱逼尿肌及黏膜层胆碱能（M）2、3受体表达情况.结果喂养至第12周时,高脂组（n=14）在体膀胱尿动力学检查显示储尿期膀胱逼尿肌不自主收缩增加者高于对照组（n=13）（10/14比1/13,P〈0.05）、顺应性变差[（2.16±0.17）比（4.18±0.21） ml/cm H2O,P〈0.01];高脂组逼尿肌离体肌条在M受体激动剂卡巴胆碱刺激下收缩力减弱;在选择性M3受体拮抗剂索利那新作用下肌条张力下降幅度更明显.HE染色示高脂组髂内动脉内膜增厚;膀胱平滑肌层肌纤维排列紊乱且其间纤维结缔组织增加,透射电镜发现高脂组膀胱逼尿肌胞质内线粒体肿胀改变;免疫组织化学半定量结果显示M2受体在两组中差异无统计学意义（P〉0.05）,M3受体在高脂组中表达高于对照组（膀胱黏膜层：146±14 比108±9,P〈0.01;膀胱平滑肌层：131±17比116±15,P〈0.05）,且在黏膜层表达增加更为明显.结论高脂血症雄性新西兰兔出现顺应性变差、不自主收缩次数增多及收缩力减弱等膀胱功能改变,考虑可能与高脂血症引起的膀胱慢性缺血和膀胱黏膜层和肌层M3受体表达增加有关.

关键词：高脂血症膀胱受体,毒蕈碱

M受体拮抗剂对提高慢性阻塞性肺疾病患者调节性T细胞表达的影响

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中华结核和呼吸杂志 2010年第1期33卷 33-36页

作者：张建初王佩熊先智邓莉辛建保马万里施焕中华中科技大学同济医学院附属协和医院呼吸科卫生部呼吸系疾病重点实验室武汉430022

目的观察COPD稳定期患者体内是否存在CD8^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞（Treg细胞），以及M受体拮抗剂噻托溴铵对其表达的影响。方法2007年10月至2008年3月，选择23例COPD稳定期患者，每日1次吸入噻托溴铵18μg，连续治疗3个月。分别... 详细信息

目的观察COPD稳定期患者体内是否存在CD8^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞（Treg细胞），以及M受体拮抗剂噻托溴铵对其表达的影响。方法2007年10月至2008年3月，选择23例COPD稳定期患者，每日1次吸入噻托溴铵18μg，连续治疗3个月。分别在治疗前后检查患者的肺功能和检测外周血中T细胞亚群的数量。两组间均数比较采用配对t检验，相关分析采用直线相关分析。结果COPD稳定期患者在吸入噻托溴铵治疗后，外周血中CD4为（36±6）％，CD8^＋CD25^＋Treg细胞为（21±21）％，明显高于治疗前的（28±10）％和（8±8）％；CD4^＋CD25^＋为（4±3）％，明显低于治疗前的（10±7）％，差异均有统计学意义（t值为2．72—3．78，P〈0．01和P〈0．05）。CD8、CD8^＋CD25^＋和CD4^＋CD25^＋Treg细胞均有表达，但治疗前后无明显变化。治疗后肺通气功能得到明显改善，FEV1、FEV1占预计值％和FEV1／FVC分别由（1．0±0．3）L、（35±10）％和（41±8）％提高到（1．1±0．3）L、（40±11）％和（45±11）％，差异均有统计学意义（t值为2．37～2．65，均P〈0．05）。相关分析结果表明，治疗前后CD4^＋和CD25^＋的变化差值与CD8^＋CD25^＋Treg细胞的变化率呈显著负相关（r值分别为-0．61和-0．72，P〈0．05和P〈0．01）。结论M受体拮抗剂噻托溴铵可能具有增强细胞免疫和免疫抑制的功能。CD8^＋CD25^＋Treg和CD4^＋CD25^＋Treg可能成为了解患者免疫状况，判断疗效和疾病免疫分型的一组新指标。

关键词：肺疾病,慢性阻塞性 T淋巴细胞,调节性受体,毒蕈碱

Ca^(2+)-钙调蛋白在M_3R介导逼尿肌细胞收缩中的作用(英文)

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中国临床康复 2006年第28期10卷 188-189页

作者：卢根生周占松陈志文宋波李卫兵熊恩庆解放军第三军医大学西南医院泌尿中心重庆市400038

背景:毒蕈碱受体在调节逼尿肌细胞收缩过程中起重要作用,其受体亚型M3R直接介导逼尿肌细胞收缩。Ca2+是刺激逼尿肌细胞收缩的直接因素,Ca2+有数十种受体结合蛋白质,Ca2+通过与不同受体蛋白结合调节不同反应。目的:探讨Ca2+-钙调蛋白在M3... 详细信息

背景:毒蕈碱受体在调节逼尿肌细胞收缩过程中起重要作用,其受体亚型M3R直接介导逼尿肌细胞收缩。Ca2+是刺激逼尿肌细胞收缩的直接因素,Ca2+有数十种受体结合蛋白质,Ca2+通过与不同受体蛋白结合调节不同反应。目的:探讨Ca2+-钙调蛋白在M3R介导逼尿肌细胞收缩中的作用。设计:以逼尿肌细胞为观察对象,对比观察。单位:解放军第三军医大学西南医院泌尿中心。材料:实验在重庆西南医院中心实验室完成,实验动物选择健康雌性Wistar大鼠。方法:将原代培养逼尿肌细胞分为实验组和对照组,接种于6孔培养板上培养,实验组培养细胞70%融合时加入1×10-4mmol/L卡巴胆碱和毒蕈碱受体亚型M2R拮抗剂,分别阻断M3R、M2R,采用Ca2+浓度和钙调蛋白活性检测试剂盒分别测定两组逼尿肌细胞Ca2+浓度和钙调蛋白活性。主要观察指标:两组细胞内[Ca2+]i浓度、钙调蛋白活性变化。结果:实验组的[Ca2+]i和钙调蛋白的平均通道荧光对数值高于对照组(3.26±0.38,2.06±0.12,P<0.01);(2.87±0.34,2.14±0.24,P<0.05)。结论:实验结果提示Ca2+-钙调蛋白以信号传导途径参与了M3R介导逼尿肌细胞收缩的调节过程。

关键词：受体,毒蕈碱钙钙调蛋白

迷走神经-M受体通路在鞘内吗啡后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

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中华麻醉学杂志 2015年第5期35卷 612-615页

作者：何伟天蒋玲玲何淑芳胡军张野安徽医科大学第二附属医院麻醉科合肥市230601

目的：评价迷走神经-M受体通路在鞘内吗啡后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法鞘内置管成功的健康成年雄性SD大鼠70只，体重250～350 g，采用随机数字表法分为7组（ n＝10）：假手术组（ Sham组）、心肌缺血再灌注组（ I∕... 详细信息

目的：评价迷走神经-M受体通路在鞘内吗啡后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法鞘内置管成功的健康成年雄性SD大鼠70只，体重250～350 g，采用随机数字表法分为7组（ n＝10）：假手术组（ Sham组）、心肌缺血再灌注组（ I∕R组）、鞘内注射吗啡后处理组（ MP组）、颈部双侧迷走神经离断组（ VT组）、VT＋MP 组、M受体拮抗剂阿托品＋MP 组（ ATP＋MP 组）和ATP组。采用结扎左冠状动脉缺血30 min恢复灌注的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。 MP组于再灌注即刻鞘内输注吗啡3μg∕kg 10μl，持续5 min；I∕R组输注生理盐水10μl，持续5 min；VT＋MP组于再灌注前10 min离断颈部双侧迷走神经；ATP＋MP 组于再灌注前10 min静脉输注阿托品0．1 mg∕kg 0．5 ml，持续5 min。于再灌注30 min内记录室性心律失常[室性早搏（ PVCs）及室速∕室颤（VT∕VF）]发生次数。于再灌注120 min时处死大鼠后取心肌组织，测定梗死区（IS）和缺血危险区（ AAR）体积，计算IS∕AAR比值。结果与Sham组比较，其余各组PVCs和VT∕VF发生次数增加， IS∕AAR比值升高（P＜0．05）；与I∕R组比较，MP 组PVCs和VT∕VF发生次数减少，IS∕AAR比值降低（P＜0．05）；与MP组比较，VT＋MP组和ATP＋MP组PVCs和VT∕VF发生次数增加，IS∕AAR比值升高（ P＜0．05）。结论迷走神经-M受体通路参与了鞘内吗啡后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的过程。

关键词：迷走神经受体,毒蕈碱吗啡注射,脊髓心肌再灌注损伤缺血后处理

非去极化肌松药致支气管痉挛的M胆碱受体介导机制

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中国新药与临床杂志 2005年第5期24卷 413-416页

作者：陈炯杰陈红专上海第二医科大学药物研究所上海200025

非去极化肌松药(NDMR)引起支气管痉挛的机制仍未完全清楚,组胺释放并不能很好的解释之。最近研究揭示NDMR很可能通过M胆碱受体介导机制诱发支气管痉挛:在生理条件下,位于气道副交感神经节后纤维上的M2受体兴奋后,可抑制神经肌肉接头处... 详细信息

非去极化肌松药(NDMR)引起支气管痉挛的机制仍未完全清楚,组胺释放并不能很好的解释之。最近研究揭示NDMR很可能通过M胆碱受体介导机制诱发支气管痉挛:在生理条件下,位于气道副交感神经节后纤维上的M2受体兴奋后,可抑制神经肌肉接头处乙酰胆碱的过量释放,抑制副交感神经兴奋(如插管时)引起的支气管收缩。NDMR选择性阻断此M2受体亚型,从而引起支气管痉挛的发生。对此机制的探讨为NDMR新药靶标研究和不良反应的防治提供了极为重要的药理学依据。

关键词：受体,毒蕈碱神经肌肉去极化药支气管痉挛

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冠状动脉M-受体的研究进展

实用心脑肺血管病杂志 2006年第11期14卷 850-851页

作者：张鹏蒋锦琪上海交通大学附属胸科医院急诊科上海市200041

毒蕈碱受体存在于冠状动脉内皮细胞及平滑肌细胞表面,内皮细胞表面的毒蕈碱受体被胆碱能激动剂激活后介导内皮细胞释放内皮舒张因子,导致冠状动脉舒张。对于内皮细胞及平滑肌细胞表面存在何种M-受体亚型目前尚有争议。本文对冠状动脉毒... 详细信息

毒蕈碱受体存在于冠状动脉内皮细胞及平滑肌细胞表面,内皮细胞表面的毒蕈碱受体被胆碱能激动剂激活后介导内皮细胞释放内皮舒张因子,导致冠状动脉舒张。对于内皮细胞及平滑肌细胞表面存在何种M-受体亚型目前尚有争议。本文对冠状动脉毒蕈碱受体及其作用进行综述。

关键词：冠状血管受体,毒蕈碱内皮细胞内皮依赖性舒张反应