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发根农杆菌对黄瓜的遗传转化

Acta Botanica Sinica 1998年第5期40卷 470-473页

作者：施和平李玲潘瑞炽华南师范大学生物系

发根农杆菌对黄瓜的遗传转化施和平李玲潘瑞炽（华南师范大学生物系广州５１０６３１）关键词发根农杆菌，黄瓜，毛状根，冠瘿碱ＧＥＮＥＴＩＣＴＲＡＮＳＦＯＲＭＡＴＩＯＮＯＦＣＵＣＵＭＩＳＳＡＴＩＶＵＳＢＹＡＧＲＯＢＡＣＴＥ... 详细信息

发根农杆菌对黄瓜的遗传转化施和平李玲潘瑞炽（华南师范大学生物系广州５１０６３１）关键词发根农杆菌，黄瓜，毛状根，冠瘿碱ＧＥＮＥＴＩＣＴＲＡＮＳＦＯＲＭＡＴＩＯＮＯＦＣＵＣＵＭＩＳＳＡＴＩＶＵＳＢＹＡＧＲＯＢＡＣＴＥＲＩＵＭＲＨＩＺＯＧＥＮＥＳＳＨＩ...

关键词：发根农杆菌黄瓜毛状根冠瘿碱

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发根农杆菌介导的菜用豌豆遗传转化体系构建

园艺学报 2024年第10期51卷 2439-2448页

作者：冯志娟刘娜卜远鹏张古文王斌龚亚明农业农村部南方豆类蔬菜种质创新与分子育种重点实验室(部省共建) 省部共建农产品质量安全危害因子与风险防控国家重点实验室浙江省农业科学院蔬菜研究所杭州310000

创建了一套由发根农杆菌介导,简单高效的菜用豌豆遗传转化体系。以播种于无菌基质中菜用豌豆‘浙豌1号’为材料,以在子叶节和下胚轴连接处切割后的上部幼苗为外植体,用导入pCAMBIA3301-GUS载体的发根农杆菌AR1193诱导外植体生成毛状根,... 详细信息

创建了一套由发根农杆菌介导,简单高效的菜用豌豆遗传转化体系。以播种于无菌基质中菜用豌豆‘浙豌1号’为材料,以在子叶节和下胚轴连接处切割后的上部幼苗为外植体,用导入pCAMBIA3301-GUS载体的发根农杆菌AR1193诱导外植体生成毛状根,毛状根诱导率为100%。7 d苗龄幼苗更有利于毛状根的诱导,平均生根数为14.60。对毛状根进行GUS基因RT-PCR检测及GUS染色验证,发现外源GUS基因可在毛状根中成功表达,毛状根转化率为35.21%。

关键词：菜用豌豆发根农杆菌苗龄毛状根遗传转化转基因根

发根农杆菌介导的荔枝LcMYB1转化烟草叶片的研究

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园艺学报 2020年第4期47卷 635-642页

作者：秦雅琪胡桂兵赵杰堂华南农业大学园艺学院亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室华南地区园艺作物生物学与种质创制农业部重点实验室广东省荔枝工程技术中心广州510642

利用荔枝果皮花青苷生物合成的关键调节基因LcMYB1为标记,构建植物表达载体pBA002-LcMYB1,电转法转入发根农杆菌A4菌株,通过叶盘法转化烟草K326。结果表明,烟草叶片侵染一周后长出白色的毛状根,约3周后部分毛状根逐渐变成红色,毛状根诱... 详细信息

利用荔枝果皮花青苷生物合成的关键调节基因LcMYB1为标记,构建植物表达载体pBA002-LcMYB1,电转法转入发根农杆菌A4菌株,通过叶盘法转化烟草K326。结果表明,烟草叶片侵染一周后长出白色的毛状根,约3周后部分毛状根逐渐变成红色,毛状根诱导率为100%,红色毛状根诱导率为19.9%。当筛选培养基中添加5 mg·L^-1 Basta,毛状根诱导率降低为33.3%,但红色毛状根诱导率提高到75%。高效液相色谱分析表明,红色毛状根中积累矢车菊素-3-葡萄糖苷和矢车菊素-3-芸香糖苷,PCR检测证实红色毛状根是由LcMYB1的转入引起的。实时荧光定量PCR表明转LcMYB1可以诱导烟草毛状根中花青苷生物合成相关的结构基因和调节基因表达。

关键词：荔枝花青苷 MYB 发根农杆菌烟草转基因毛状根

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发根农杆菌转化怀地黄再生植株

分子细胞生物学报 2007年第4期40卷 223-231页

作者：周延清牛敬媛郝瑞文林雪贾敬芬郝建国卢龙斗河南师范大学生命科学学院新乡453007 西北大学生命科学学院西安710069

利用发根农杆菌15834菌株感染怀地黄组培苗子叶、叶柄和茎切段,建立了有效的毛状根培养及其植株再生体系。毛状根可直接从受伤的外植体产生,能在无外源激素的1/2MS固体和液体培养基上自主生长,表现出典型的发根特征。用100μmol/L乙酰... 详细信息

利用发根农杆菌15834菌株感染怀地黄组培苗子叶、叶柄和茎切段,建立了有效的毛状根培养及其植株再生体系。毛状根可直接从受伤的外植体产生,能在无外源激素的1/2MS固体和液体培养基上自主生长,表现出典型的发根特征。用100μmol/L乙酰丁香酮处理对数生长期的农杆菌菌液感染子叶获得了46.7%的最高转化频率;在附加0.2mg/L KT和3.0mg/L 6/BA的1/2 MS培养基上,毛状根能100%形成愈伤组织,51.49%分化出芽;分化芽在1/2 MS培养基上100%生根,形成具有矮化、节间短和根系发达等特征的转化再生植株且移栽后生长旺盛;1个转化毛状根克隆的梓醇含量为0.557mg/g,是鲜地黄梓醇含量的48.5%,是生地鲜重梓醇含量的18%。rolB基因PCR、Southem blot分析、冠瘿碱纸电泳和RT-PCR扩增检测证明农杆菌Ri质粒上的T-DNA整合到怀地黄基因组中并表达。

关键词：怀地黄发根农杆菌毛状根植株再生 Southern blot 冠瘿碱纸电泳

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发根农杆菌介导西瓜转基因过表达体系的建立

果树学报 2019年第12期36卷 1763-1770页

作者：王平勇徐永阳赵光伟贺玉花孔维虎张健刘水苗户克云侯冲王兰菊徐志红中国农业科学院郑州果树研究所郑州450009 河南农业大学园艺学院郑州450002

【目的】建立发根农杆菌介导的西瓜转基因不定根过表达体系。【方法】探索利用野生型发根农杆菌K599侵染西瓜材料‘Sugar Baby’,诱导西瓜产生不定根的实验方法。借助该方法,将含有GUS基因和EGFP基因的过表达载体pCAMBIA3301和pCAMBIA13... 详细信息

【目的】建立发根农杆菌介导的西瓜转基因不定根过表达体系。【方法】探索利用野生型发根农杆菌K599侵染西瓜材料‘Sugar Baby’,诱导西瓜产生不定根的实验方法。借助该方法,将含有GUS基因和EGFP基因的过表达载体pCAMBIA3301和pCAMBIA1300-ProSuper导入发根农杆菌K599,侵染西瓜材料‘Sugar Baby’,通过常规PCR、qRTPCR、GUS染色和激光共聚焦显微镜检测,评价该过表达体系的效果。【结果】利用野生型和导入外源质粒的发根农杆菌均能成功诱导西瓜‘Sugar Baby’产生不定根。PCR检测结果显示,携带pCAMBIA3301和pCAMBIA1300-ProSuper载体的发根农杆菌K599诱导产生的不定根阳性率达到100%。qRT-PCR、GUS染色和激光共聚焦显微镜检测均能成功检测到GUS基因和EGFP基因的过量表达。【结论】利用发根农杆菌K599诱导西瓜产生不定根介导基因过表达的方法,具有周期短,操作方便,转化率高的特点,可实现基因功能的快速验证,为西瓜根系相关基因的功能研究提供技术支持。

关键词：西瓜发根农杆菌 K599 过表达

发根农杆菌介导的白花草木樨毛状根转化体系的建立

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草地学报 2021年第11期29卷 2591-2599页

作者：王升升段珍张吉宇兰州大学草地农业生态系统国家重点实验室兰州大学草地农业科技学院甘肃兰州730020

白花草木樨(Melilotus albus *** Desr.)是草木樨最常见的栽培用种之一,具有较强的抗逆性和固氮能力。为了开发一套高效的草木樨转化体系,本研究以白花草木樨为材料,以结瘤基因MaROP6为目的基因,建立了发根农杆菌(Agrobacterium rhizoge... 详细信息

白花草木樨(Melilotus albus *** Desr.)是草木樨最常见的栽培用种之一,具有较强的抗逆性和固氮能力。为了开发一套高效的草木樨转化体系,本研究以白花草木樨为材料,以结瘤基因MaROP6为目的基因,建立了发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)介导的高效白花草木樨毛状根转化体系。结果表明:利用该方法可以在两周左右获得毛状根,其发生率可达78%,MaROP6基因的毛状根转化率可达70.8%。qRT-PCR鉴定结果表明,MaROP6转基因毛状根的平均相对表达量为对照的36.87倍。毛状根转化体系的建立为白花草木樨基因功能的验证奠定了基础。

关键词：白花草木樨发根农杆菌毛状根转化基因表达

发根农杆菌介导的星油藤毛状根遗传转化体系建立

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植物生理学报 2023年第2期59卷 373-382页

作者：林凯张育华柴霞付乾堂耿显宸倪军徐增富广西大学林学院亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室国家林业和草原局中南速生材繁育重点实验室广西高等学校亚热带人工林培育与利用重点实验室南宁530004 中国科学院西双版纳热带植物园热带植物资源可持续利用重点实验室云南勐腊666303

木本油料植物星油藤(Plukenetia volubilis)的种子油富含α-亚麻酸,是一种新型健康食用油料植物,然而其遗传转化体系的缺乏极大地限制了该植物的基因功能和分子育种研究。本研究基于裸眼可视报告基因RUBY系统,分析了发根农杆菌(Agrobact... 详细信息

木本油料植物星油藤(Plukenetia volubilis)的种子油富含α-亚麻酸,是一种新型健康食用油料植物,然而其遗传转化体系的缺乏极大地限制了该植物的基因功能和分子育种研究。本研究基于裸眼可视报告基因RUBY系统,分析了发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)菌株类型、侵染方式以及抽真空处理对星油藤毛状根诱导和遗传转化效率的影响,初步建立了发根农杆菌介导的星油藤毛状根遗传转化体系。研究结果表明:利用发根农杆菌K599菌株进行幼苗切根和下胚轴基部裹菌处理是最优的诱导星油藤产生毛状根的方法,可获得含有超量表达RUBY毛状根的嵌合植株,并且转基因毛状根可进一步诱导形成愈伤组织。该毛状根遗传转化体系的建立为进一步开展星油藤的遗传转化和基因功能研究提供参考。

关键词：星油藤发根农杆菌毛状根 RUBY

发根农杆菌介导的箭筈豌豆毛状根遗传转化体系的建立

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中国草地学报 2020年第5期42卷 1-7页

作者：梅错刘志鹏草地农业生态系统国家重点实验室/兰州大学草地农业科技学院甘肃兰州730020

首次建立了箭筈豌豆的毛状根遗传转化体系,利用ARqua1和K599两种发根农杆菌成功诱导出阳性转基因毛状根,其中更适合诱导箭筈豌豆毛状根的是ARqua1菌株。在无菌和非无菌条件下,ARqua1菌株的阳性毛状根诱导效率分别为81.7%、35.4%,而K599... 详细信息

首次建立了箭筈豌豆的毛状根遗传转化体系,利用ARqua1和K599两种发根农杆菌成功诱导出阳性转基因毛状根,其中更适合诱导箭筈豌豆毛状根的是ARqua1菌株。在无菌和非无菌条件下,ARqua1菌株的阳性毛状根诱导效率分别为81.7%、35.4%,而K599菌株的阳性毛状根诱导效率分别为70.0%、33.3%。PCR检测和GUS染色结果表明,GUS基因在毛状根中稳定表达,毛状根遗传转化体系可应用于箭筈豌豆分子和蛋白水平的初步研究。

关键词：箭筈豌豆发根农杆菌毛状根遗传转化

发根农杆菌介导的柑橘黄龙病抗性快速评价体系优化及应用

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中国农业科学 2024年第16期57卷 3182-3191页

作者：曹鹏周金环王新亮李楚欣李佳欣姜培刘金香宋震西南大学柑桔研究所全国农业技术推广服务中心

【目的】黄龙病（Huanglongbing,HLB）是一种毁灭性柑橘病害，主要由韧皮部杆菌属亚洲种（Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas）侵染引起。本研究旨在探究侵染初期CLas在柑橘毛状根中的增长规律，优化发根农杆菌（Agrobacterium rh... 详细信息

【目的】黄龙病（Huanglongbing,HLB）是一种毁灭性柑橘病害，主要由韧皮部杆菌属亚洲种（Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas）侵染引起。本研究旨在探究侵染初期CLas在柑橘毛状根中的增长规律，优化发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）介导的黄龙病抗性快速评价体系并应用于抗菌肽的抗性评价。【方法】基于植物表达载体pGNGM1300，通过发根农杆菌K599介导的毛状根转化体系转化不同柑橘品种，筛选毛状根诱导快、转化率高的品种；接种CLas后，利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)对毛状根中的CLas进行定期检测，揭示其增长规律；在优化黄龙病抗性评价体系的基础上，通过CLas和相关基因的（RT-）qPCR、胼胝质含量检测、显微结构观察和症状观察等开展抗菌肽的黄龙病抗性评价。【结果】供试的11个柑橘品种中，香橼（Citrus medica）的毛状根诱导最快（15 d）、诱导率最高（73.75%），并且毛状根中转基因阳性率高（53.54%）。qPCR定期监测结果显示，在接种后第20—30天（days post inoculation,dpi）,CLas开始在根中定殖；在30—50 dpi,CLas含量呈显著上升的趋势；CLas含量在60—120 dpi时略有波动，但与50 dpi时差异不显著。抗菌肽MaSAMP(stable antimicrobial peptide)、HBD-4(homo sapiens defensin beta 4)和CB(cecropin B)的抗性评价结果分析显示，在50—120 dpi,MaSAMP和CB表达植株中CLas含量均低于对照，且差异显著，除90 dpi外HBD-4表达植株中CLas含量也显著低于对照。3种抗菌肽表达植株中的胼胝质含量均显著低于对照（60 dpi），韧皮部细胞壁增厚不明显，未出现明显的淀粉粒和胼胝体沉积，并且均未发现根部死亡等现象（90 dpi）。【结论】揭示了侵染早期CLas在柑橘毛状根中的增长规律；优化了发根农杆菌介导的黄龙病抗性快速评价体系；明确转基因过表达抗菌肽MaSAMP、HBD-4和CB可显著抑制CLas的增殖，减少胼胝质沉积，减轻黄龙病症状，具有用于黄龙病防控实践的潜力。

关键词：柑橘黄龙病抗菌肽发根农杆菌毛状根转化抗性评价