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牛轮状病毒RT-LAMP检测方法的建立

动物医学进展 2012年第5期33卷 39-43页

作者：李巍李宁袁万哲孙继国河北农业大学动物科技学院河北保定071000

建立一种适用于牛轮状病毒(BRV)的反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)的快速检测方法。根据GenBank中登录的BRV VP7基因序列,针对其保守区设计了4条引物,利用RT-LAMP方法进行检测,并优化了反应体系与反应时间,检测了该方法的特异性和灵敏... 详细信息

建立一种适用于牛轮状病毒(BRV)的反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)的快速检测方法。根据GenBank中登录的BRV VP7基因序列,针对其保守区设计了4条引物,利用RT-LAMP方法进行检测,并优化了反应体系与反应时间,检测了该方法的特异性和灵敏度。结果表明,该方法在等温条件下只需要50min就能检测出结果,与普通RT-PCR相比,具有较短的检测时间、良好的特异性和较高的灵敏度。论文针对BRV建立的RT-LAMP快速检测方法操作简便、无需昂贵设备、结果可视,适用于BRV在基层的快速检测。

关键词：牛轮状病毒反转录-环介导等温扩增反转录-聚合酶链反应

RRM2在上皮性卵巢肿瘤组织中的表达及其与血管生成的关系

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肿瘤防治研究 2011年第10期38卷 1151-1155页

作者：卢飞飞王黎明姚如永孙显璐青岛大学医学院附属医院妇科山东青岛266003 聊城市妇幼保健院山东聊城255000 青岛大学医学院附属医院中心实验室山东青岛266003 青岛大学医学院附属医院病理科山东青岛266003

目的探讨核糖核苷酸还原酶小亚基(RRM2)在上皮性卵巢肿瘤中的表达及其与血管生成的关系。方法采用免疫组织化学PV-6000二步法和RT-PCR法,检测RRM2、CD105(Endoglin)在正常卵巢、良性卵巢肿瘤、低度潜在恶性上皮性卵巢肿瘤和上皮性卵巢... 详细信息

目的探讨核糖核苷酸还原酶小亚基(RRM2)在上皮性卵巢肿瘤中的表达及其与血管生成的关系。方法采用免疫组织化学PV-6000二步法和RT-PCR法,检测RRM2、CD105(Endoglin)在正常卵巢、良性卵巢肿瘤、低度潜在恶性上皮性卵巢肿瘤和上皮性卵巢癌组织中的表达,用CD105(Endoglin)标记微血管密度(MVD),并分析RRM2 mRNA和CD105 mRNA表达的关系。结果 (1)低度潜在恶性上皮性卵巢肿瘤组织(1.586±0.650,66.67%)和上皮性卵巢癌组织(1.870±0.618,69.35%)的RRM2 mRNA表达量和蛋白阳性表达率均高于正常卵巢组织(0.771±0.495,0)和良性卵巢肿瘤组织(0.952±0.601,26.67%)(P<0.05)。(2)低度潜在恶性上皮性卵巢肿瘤组织(2.190±0.512,23.15±4.38)和上皮性卵巢癌组织(2.735±0.636,25.27±6.91)中的CD105 mRNA表达量和MVD均高于正常卵巢组织(0.686±0.637,3.40±1.78)和良性卵巢肿瘤组织(0.763±0.547,12.15±2.29)(P<0.05)。(3)RRM2 mRNA表达量和蛋白阳性表达率在低度潜在恶性组和FIGOⅠ～Ⅱ期卵巢癌组高于正常卵巢组和良性卵巢肿瘤组(P<0.05),在FIGOⅢ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期(t=-2.370,χ2=5.937,P<0.05)。(4)RRM2 mRNA和CD105mRNA之间表达呈正相关(r=0.713,P<0.05)。结论 RRM2可能参与上皮性卵巢癌发生的早期事件,对上皮性卵巢癌的血管生成可能有一定促进作用,有望成为一个新的早期诊断指标。

关键词：卵巢肿瘤 RRM2 免疫组织化学反转录-聚合酶链反应诊断

新型竹鼠源阿卡斑病毒RT-PCR检测方法的建立

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动物医学进展 2018年第12期39卷 27-31页

作者：唐海波彭可可陈凤莲白安斌刘金凤吴健敏广西兽医研究所广西南宁530001 广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001 广西中医药大学广西南宁530001 广西大学动物科学技术学院广西南宁530004

为了建立新型竹鼠源阿卡斑病毒RT-PCR的检测方法,通过对新型竹鼠源阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)及其同属各病毒基因序列进行比对分析,设计了针对AKAV M基因片段的一对特异性引物,经优化建立AVKV的RT-PCR检测方法。结果表明,在57℃退... 详细信息

为了建立新型竹鼠源阿卡斑病毒RT-PCR的检测方法,通过对新型竹鼠源阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)及其同属各病毒基因序列进行比对分析,设计了针对AKAV M基因片段的一对特异性引物,经优化建立AVKV的RT-PCR检测方法。结果表明,在57℃退火温度条件下,于3h内可完成目的片段扩增,目的片段大小为816bp;该方法能特异性地扩增新型竹鼠源AKAV,不能扩增竹鼠细小病毒、竹鼠圆环病毒、竹鼠内源性反转录病毒、竹鼠乳酸脱氢酶增高病毒;检验敏感性高,灵敏度可达23pg。对感染发病竹鼠样品的检测结果显示,本方法特异准确,能清楚分辨发病竹鼠不同组织中病毒核酸丰度。说明建立的RT-PCR方法简单特异、灵敏度高,不仅适用于实验室鉴定,还可应用于口岸、野外等的临床监测。

关键词：竹鼠阿卡斑病毒检测反转录-聚合酶链反应

猪环曲病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

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动物医学进展 2015年第10期36卷 26-29页

作者：范忠良李键岳华曹恭貌张斌四川省宝兴县农业局四川宝兴625700 西南民族大学生命科学与技术学院四川成都610041

为了解四川地区猪环曲病毒(PToV)的发病状况,针对PToV的保守区域S基因设计了一对特异性引物,建立检测PToV的RT-PCR方法,并对其敏感性、特异性和重复性进行了检测。结果显示,仅猪环曲病毒阳性模板可扩增得到约569bp大小的目的条带。敏感... 详细信息

为了解四川地区猪环曲病毒(PToV)的发病状况,针对PToV的保守区域S基因设计了一对特异性引物,建立检测PToV的RT-PCR方法,并对其敏感性、特异性和重复性进行了检测。结果显示,仅猪环曲病毒阳性模板可扩增得到约569bp大小的目的条带。敏感性试验显示,该方法能检测到的最低核酸含量为15pg。对采集于12个猪场27个腹泻样本和29个临床健康的样品进行了检测。结果显示,腹泻样本中检出率为33.3%(9/27),而在健康样本中检出率为6.9%(2/29)。以上结果表明本研究成功建立了一种敏感度高、特异性强、重复性良好的用于PToV的RT-PCR方法。

关键词：猪环曲病毒反转录-聚合酶链反应检测

乳腺浸润性导管癌中线粒体DNA ATPase6和ATPase8的转录水平及意义

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肿瘤防治研究 2015年第12期42卷 1202-1205页

作者：王储张默函金东洙周宪春延边大学医学院组织学与胚胎学教研室延吉133000 延边大学附属医院教育培训处延吉133000

目的检测线粒体DNA(mitochondrial DNA,mt DNA)在乳腺浸润性导管癌中的转录情况,探讨其在肿瘤发生及发展中的作用。方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),分别对25例乳腺浸润性导管癌患者的癌组织及癌旁组织的mt DNA ATPase6与ATPase8 m... 详细信息

目的检测线粒体DNA(mitochondrial DNA,mt DNA)在乳腺浸润性导管癌中的转录情况,探讨其在肿瘤发生及发展中的作用。方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),分别对25例乳腺浸润性导管癌患者的癌组织及癌旁组织的mt DNA ATPase6与ATPase8 m RNA进行检测,并观察其差异以及与相关临床病理参数的关系。结果 mt DNA ATPase6 m RNA的相对表达量在癌组织中明显高于癌旁组织(0.77±0.12 vs.0.32±0.07,P转录水平上调,并且可能在肿瘤的发生及转移过程起到一定的作用。

关键词：乳腺浸润性导管癌线粒体DNA 反转录-聚合酶链反应

2015年-2017年广西规模化猪场主要病毒性疫病流行调查

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动物医学进展 2019年第6期40卷 116-120页

作者：贺会利李军潘艳胡帅钟舒红冯世文柳锋谢永平陈泽祥广西兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室

为了解广西地区近3年规模化猪场主要病毒性传染病的流行情况,应用PCR及RT-PCR方法对2015年-2017年广西的1648份疑似猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪圆环病毒3型(PCV-3)、猪伪狂犬病病毒(PRV)... 详细信息

为了解广西地区近3年规模化猪场主要病毒性传染病的流行情况,应用PCR及RT-PCR方法对2015年-2017年广西的1648份疑似猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪圆环病毒3型(PCV-3)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的病料进行病原学检测。结果显示,CSFV、PRRSV、PRV、PCV-2、PCV-3、TGEV和PEDV的阳性率分别是2.06%(13/632)、14.43%(192/1331)、12.10%(88/727)、14.32%(132/922)、53.85%(42/78)、10.87%(20/184)和32.00%(72/225)。PRV、TGEV和PEDV的感染率呈逐年上升趋势,PCV-2的感染率呈逐年递减趋势。二重感染以PCV-2和其他病毒感染为主,其中PRRSV和PCV-2的二重感染率最高,平均感染率为2.93%。CSFV、PRRSV、PRV、PCV-2、PEDV的感染率在冬季比较高,分别为3.75%、23.86%、19.02%、27.73%和57.78%。检测结果表明,PRRSV和PCV-2是目前对广西规模化猪场危害较为严重的主要病毒性疫病。PCV-3作为一种新发现病毒,引起母猪皮炎肾病综合征与繁殖障碍和仔猪腹泻,对养猪业造成了一定的威胁。规模化猪场流行的腹泻性病毒主要是PEDV和TGEV。

关键词：规模化猪场病毒性疫病聚合酶链反应反转录-聚合酶链反应调查

MAT2B基因在肝癌组织的表达及其临床意义

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中华实验外科杂志 2017年第4期34卷 656-658页

作者：汪群陆卫军汪洋符常波尹涛湖北省肿瘤医院肝胆胰科武汉430079

目的探讨MAT2B基因在肝癌组织的表达及其在肝癌形成和发展中的作用。方法收集8例的手术切除肝癌组织标本分别由反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和62例病理组织切片免疫组织化学测定肝癌组织中MAT2B的表达，10例外伤正常肝组织作为对照... 详细信息

目的探讨MAT2B基因在肝癌组织的表达及其在肝癌形成和发展中的作用。方法收集8例的手术切除肝癌组织标本分别由反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和62例病理组织切片免疫组织化学测定肝癌组织中MAT2B的表达，10例外伤正常肝组织作为对照。对癌旁及肝癌组织MAT2B表达阳性患者进行随访。结果 MAT2B基因在正常肝组织中没有表达，肝癌组织中MAT2B的表达阳性率为80.65%，显著高于癌旁组织的62.90%。RT-PCR检测肝癌组织、癌旁组织的表达分别为1.05±0.12、0.48±0.06和0；MAT2B的表达与肝癌的大小以及是否合并有肝硬化明显相关，与患者年龄、性别、分化程度、分期无明显相关。癌旁组织MAT2B阳性者较癌旁组织MAT2B阴性者、肝癌组织MAT2B阳性者生存时间明显缩短。结论 MAT2B基因的表达与肝癌的形成及预后有关。

关键词： MAT2B基因肝癌免疫组织化学反转录-聚合酶链反应

内蒙古和西藏自治区野生反刍动物小反刍兽疫监测

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动物医学进展 2016年第3期37卷 124-126页

作者：王华包静月吴晓东刘春菊王淑娟王志亮中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032

为了解小反刍兽疫疫情在野生反刍动物中的流行情况,在风险较高且野生动物集中分布的内蒙古自治区赤峰市、呼伦贝尔市和兴安盟以及西藏自治区日喀则地区、山南地区、阿里地区和那曲地区,平行采集棉拭子样品和血清样品各78份。通过RT-PCR... 详细信息

为了解小反刍兽疫疫情在野生反刍动物中的流行情况,在风险较高且野生动物集中分布的内蒙古自治区赤峰市、呼伦贝尔市和兴安盟以及西藏自治区日喀则地区、山南地区、阿里地区和那曲地区,平行采集棉拭子样品和血清样品各78份。通过RT-PCR检测小反刍兽疫病毒核酸,同时用竞争ELISA检测反刍野生动物血清中的小反刍兽疫病毒特异性抗体。结果检测样品中未发现阳性样品。说明该批次样品中没有发现野生动物感染小反刍兽疫病毒。研究结果可为小反刍兽疫防控工作提供依据。

关键词：小反刍兽疫酶联免疫吸附试验反转录-聚合酶链反应野生反刍动物监测

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贝类中诺如病毒的研究进展

中国食品卫生杂志 2014年第2期26卷 200-204页

作者：寇晓霞吴清平薛亮张菊梅广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室广东广州510070 广东省微生物应用新技术公共实验室广东广州510070 广东省华南应用微生物重点实验室一省部共建国家重点实验室培育基地广东广州510070

从贝类中诺如病毒的污染现状、检测组织靶点、病毒浓缩方法及效率、检测方法有效性等多个方面评述贝类中诺如病毒的研究现状、进展、急需解决的问题和未来的发展方向,以期为制定诺如病毒检测技术标准及我国贝类进出口贸易提供参考。

关键词：诺如病毒贝类检测靶点病毒浓缩反转录-聚合酶链反应