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猿猴病毒40T抗原转化的人脐静脉内皮细胞系PUMC-HUVEC-T1的建立

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解剖学报 2013年第2期44卷 199-203页

作者：冯海凉王春景顾蓓杨振丽刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心北京100005

目的建立猿猴病毒40(SV40)T抗原转化的人脐静脉内皮细胞(HVUEC)模型,为内皮研究提供可利用资源。方法分离人脐静脉内皮细胞,原代培养。感染含有SV40大T、小T抗原的慢病毒,连续传代培养。对感染后的HUVEC,RT-PCR检测大T的表达,免疫细胞... 详细信息

目的建立猿猴病毒40(SV40)T抗原转化的人脐静脉内皮细胞(HVUEC)模型,为内皮研究提供可利用资源。方法分离人脐静脉内皮细胞,原代培养。感染含有SV40大T、小T抗原的慢病毒,连续传代培养。对感染后的HUVEC,RT-PCR检测大T的表达,免疫细胞化学检测vWF、CD31、CD34的表达及结合凝集素能力,透射电镜观察内皮细胞的超微结构,Matrigel检测管状成型,进行染色体核型分析,皮下接种BABL/c-nu裸鼠检测致瘤性,PCR法进行种属鉴定及支原体检测,短串联重复序列(STR)检测鉴定细胞身份。结果转化后的人脐静脉内皮细胞命名为PUMC-HUVEC-T1,扁平多角状,汇合时典型铺路石排列,体外传代40代以上(1∶3～4);细胞中有SV40LT mRNA的表达;vWF、CD31、CD34表达均阳性,可结合荆豆凝集素-1(UEA-1);电镜可见WP小体;不同代数细胞核型正常稳定,裸鼠体内接种不成瘤。PUMC-HUVEC-T1种属鉴定为人源性,STR结果与原代HUVEC一致,无支原体的污染,国家实验细胞资源共享平台收藏。结论建立了易获得、背景清楚、质量可靠的SV40 T抗原转化的HUVEC细胞系PUMC-HUVEC-T1。

关键词：人脐静脉内皮 SV40 反转录-聚合酶链反应免疫组织化学透射电镜

环境钙对中华大蟾蜍肾脏斯钙素-1基因表达与质膜Ca^(2+)-ATP酶活性的影响

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解剖学报 2012年第5期43卷 685-689页

作者：贾永芳李嘉雯张东芳崔海燕袁红旭李卫国河南师范大学生命科学学院河南新乡453002

目的探讨血浆钙水平对肾组织斯钙素-1(STC1)基因表达与质膜Ca2+-ATP酶(PMCA)活性的影响。方法将72只成体中华大蟾蜍随机分为3组,分别暴露于添加0.1mol/L CaCl2的自来水、添加0.03mol/L乙二胺四乙酸(EDTA)的自来水及自来水中,于暴露前及... 详细信息

目的探讨血浆钙水平对肾组织斯钙素-1(STC1)基因表达与质膜Ca2+-ATP酶(PMCA)活性的影响。方法将72只成体中华大蟾蜍随机分为3组,分别暴露于添加0.1mol/L CaCl2的自来水、添加0.03mol/L乙二胺四乙酸(EDTA)的自来水及自来水中,于暴露前及暴露后12、24、48、72、96、120和144h取血浆和肾脏,利用比色法和半定量RT-PCR法分别检测血浆钙水平、PMCA活性和STC1 mRNA水平,利用免疫组织化学染色确定STC1免疫反应。结果 0.1mol/L CaCl2暴露致中华大蟾蜍血浆钙水平在12和24h时升高,48h时降至正常水平,48h后持续升高;12～48h内肾组织PMCA活性增强,STC1 mRNA水平上调,72h后回复至正常水平。而0.03mol/L EDTA暴露则引起血浆钙水平下降,但肾组织PMCA活性和STC1 mRNA水平与对照组相比未出现明显变化。免疫组织化学技术显示,肾脏远曲小管和集合管上皮细胞出现STC1免疫反应,且0.1mol/L CaCl2暴露可致STC1免疫反应增强。结论血浆钙水平升高致肾小管和集合管上皮细胞PMCA活性增强,STC1表达上调,而STC1表达上调又使血浆钙水平下降;但血浆钙水平持续升高则使PMCA活性下降,STC1基因表达下调。

关键词：肾脏斯钙素质膜Ca2+ -ATP酶反转录-聚合酶链反应免疫组织化学中华大蟾蜍

生殖细胞核因子及Oct-4在P19细胞系诱导分化中的表达

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解剖学报 2013年第3期44卷 349-352页

作者：王菊熊承良高启云李红钢王苗赵凯周宗瑶石河子大学医学院组织学胚胎学教研室新疆石河子832002 华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心武汉430030

目的体外培养未成熟畸胎瘤细胞(P 19细胞)并诱导分化,检测生殖细胞核因子(GCNF)及Oct-4在P 19细胞诱导分化前后的表达。方法用全反式维甲酸(ATRA)诱导P 19细胞分化,通过间接免疫荧光染色和RT-PCR方法检测GCNF及Oct-4在P 19细胞诱导分化... 详细信息

目的体外培养未成熟畸胎瘤细胞(P 19细胞)并诱导分化,检测生殖细胞核因子(GCNF)及Oct-4在P 19细胞诱导分化前后的表达。方法用全反式维甲酸(ATRA)诱导P 19细胞分化,通过间接免疫荧光染色和RT-PCR方法检测GCNF及Oct-4在P 19细胞诱导分化前后的表达。结果 Oct-4在P 19细胞诱导前呈强阳性表达,诱导2 d后表达下降;而GCNF在P 19细胞诱导前呈阴性表达,诱导2 d后呈阳性表达。结论 GCNF参与了恶性生殖细胞肿瘤的体外分化。GCNF可能是通过下调Oct-4基因的表达参与了恶性生殖细胞肿瘤的分化。

关键词： Oct4 生殖细胞核因子 P 19细胞分化间接免疫荧光反转录-聚合酶链反应

亚硒酸钠抑制人胃癌SGC-7901细胞系增殖和hTERT的表达

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解剖学报 2011年第2期42卷 180-184页

作者：苏衍萍王慧葛丽刘立伟魏丽华泰山医学院组织学胚胎学教研室山东泰安271000

目的探讨亚硒酸钠对人胃癌SGC-7901细胞系增殖和hTERT表达的作用及其机制。方法用含亚硒酸钠(0μmol/L、0.5μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、8μmol/L)的培养液培养SGC-7901细胞24h、48h、72h、96h,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测... 详细信息

目的探讨亚硒酸钠对人胃癌SGC-7901细胞系增殖和hTERT表达的作用及其机制。方法用含亚硒酸钠(0μmol/L、0.5μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、8μmol/L)的培养液培养SGC-7901细胞24h、48h、72h、96h,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测亚硒酸钠对SGC-7901的增殖的影响,免疫细胞化学SABC法和RT-PCR检测亚硒酸钠对人胃癌细胞系SGC-7901hTERT蛋白和hTERTmRNA表达的作用。结果亚硒酸钠对人胃癌SGC-7901细胞具有明显的抑制作用,且随亚硒酸钠浓度的增加和培养时间的延长对SGC-7901细胞生长抑制作用逐渐加强。SGC-7901细胞hTERT蛋白免疫细胞化学染色的平均吸光度(AA),随0.5μmol/L、2.5μmol/L亚硒酸钠组培养时间增加逐渐降低,96h时明显低于空白对照组(P<0.01),5μmol/L、8μmol/L亚硒酸钠组的AA每个时间点均比空白对照组明显降低(P<0.01)。0.5μmol/L亚硒酸钠组SGC-7901 hTERTmRNA的表达无明显的变化;在2.5μmol/L亚硒酸钠组则随时间增加逐渐降低,48h后明显低于空白对照组;5μmol/L、8μmol/L亚硒酸钠组均明显低于空白对照组(P<0.01),72h后明显低于其他低硒组。结论亚硒酸钠抑制人胃癌SGC-7901细胞生长,下调hTERT表达。

关键词：亚硒酸钠 SGC-7901细胞系端粒酶反转录酶反转录-聚合酶链反应

北京市2007年手足口病暴发疫情的病原学分析

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中华流行病学杂志 2009年第8期30卷 784-787页

作者：李仁清陈丽娟张合润王玉梅贺雄北京市疾病预防控制中心 100013

目的对北京市2007年5—7月间发生并收集到的8起手足口病暴发疫情进行病原学分析及鉴定。方法采用RT-PCR技术，对手足口病患儿的疱疹液或咽拭子标本，直接进行肠道病毒（EV）分型；采用RD传代细胞，对标本进行病毒分离培养，再对其阳性... 详细信息

目的对北京市2007年5—7月间发生并收集到的8起手足口病暴发疫情进行病原学分析及鉴定。方法采用RT-PCR技术，对手足口病患儿的疱疹液或咽拭子标本，直接进行肠道病毒（EV）分型；采用RD传代细胞，对标本进行病毒分离培养，再对其阳性培养物进行EV分型。对其中部分原始标本和阳性分离物中的EV VP1区进行核苷酸序列及预测的氨基酸序列分析。结果北京市2007年发生在大兴区的2起疫情由EV71引起，其他4个区的6起疫情均由柯萨奇病毒A16型（Cox A16）引起。大兴区2起疫情的EV71都属于C基因型的C4亚型，但分别处于VP1基因亲缘性系统发生树的不同分支，其核苷酸和氨基酸分别存在3．7％和0．8％的差异；来源于顺义区的CoxA16与其他病毒分别处于不同分支，其核苷酸和氨基酸分别存在3．7％和0％的差异。结论北京市2007年手足口病疫情主要由EV71和CoxA16两种病原引起，而每种病原都存在2个或2个以上流行株病毒；且CoxA16的传播似乎较EV71更为广泛。

关键词：手足口病肠道病毒71型柯萨奇病毒A16型反转录-聚合酶链反应

建立卵泡刺激素受体单位点基因突变体的卵巢癌SKOV3细胞和裸鼠模型

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解剖学报 2012年第6期43卷 767-771页

作者：姚济芬俞利平董小龙卢玲芬张晓光王亚云韦兰芳王水英黄荷凤杭州师范大学附属医院妇产科杭州310015 杭州师范大学实验动物科学实验室杭州310036 浙江大学医学院附属妇产科医院杭州310006

目的建立转染卵泡刺激素受体(FSHR)307和680位点突变的上皮性卵巢癌SKOV3细胞系和裸鼠动物模型。方法将人卵巢颗粒细胞(来自体外受精取卵时废弃的颗粒细胞),行原代培养后用于FSHR RNA提取;FSHR和FSHR307、680位点突变重组蛋白构建;将FSH... 详细信息

目的建立转染卵泡刺激素受体(FSHR)307和680位点突变的上皮性卵巢癌SKOV3细胞系和裸鼠动物模型。方法将人卵巢颗粒细胞(来自体外受精取卵时废弃的颗粒细胞),行原代培养后用于FSHR RNA提取;FSHR和FSHR307、680位点突变重组蛋白构建;将FSHR和FSHR307、680位点突变蛋白转染SKOV3细胞株;将处理后的3组SKOV3细胞接种到裸鼠皮下,8周后处死裸鼠,并取瘤组织验证。结果建立了307和680位点突变的FSH受体高表达的上皮性卵巢癌SKOV3细胞系和裸鼠动物模型。结论成功地建立了307和680位点突变的FSH受体高表达的SKOV3上皮性卵巢癌细胞系和裸鼠移植瘤模型,为FSH在上皮性卵巢癌中的作用和治疗提供了一种新的细胞模型和动物模型。

关键词：卵泡刺激素受体突变上皮性卵巢癌 SKOV3细胞系反转录-聚合酶链反应裸鼠

松果体摘除及褪黑素对大鼠胸腺上皮细胞白细胞介素-7表达的影响

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解剖学报 2008年第6期39卷 901-905页

作者：黄云梅刘卉魏建恩林晋周瑞祥福建中医学院福建省高校中西医结合基础重点实验室福建中西医结合研究院福建医科大学人体解剖学与组织胚胎学系神经生物学研究中心福州350108

目的探讨松果体摘除及褪黑素对大鼠胸腺上皮细胞白细胞介素7(IL-7)表达的影响及其意义。方法1.培养大鼠胸腺上皮细胞,应用广谱角蛋白抗体进行免疫细胞化学显色鉴定;MTT法观察褪黑素(1×10-3～10-9mol/L)干预对细胞生长的影响;细胞分空... 详细信息

目的探讨松果体摘除及褪黑素对大鼠胸腺上皮细胞白细胞介素7(IL-7)表达的影响及其意义。方法1.培养大鼠胸腺上皮细胞,应用广谱角蛋白抗体进行免疫细胞化学显色鉴定;MTT法观察褪黑素(1×10-3～10-9mol/L)干预对细胞生长的影响;细胞分空白对照组、褪黑素10-8mol/L处理组和褪黑素10-6mol/L处理组,RT-PCR法观察细胞IL-7mRNA的表达;2.选用清洁级雄性SD大鼠110只,分为正常对照组、假手术对照组、松果体摘除组、松果体摘除+褪黑素7.5mg/(kg.d)腹腔注射组和松果体摘除+褪黑素15mg/(kg.d)腹腔注射组。术后4周和8周取材,运用免疫组织化学和RT-PCR方法观察胸腺上皮细胞IL-7表达的变化。结果褪黑素干预对大鼠胸腺上皮细胞的生长无显著影响,但能使IL-7mRNA的表达水平呈剂量依赖性升高;松果体摘除对大鼠胸腺上皮细胞表达IL-7无显著影响,补充褪黑素15mg/(kg.d)4周后IL-7表达显著增高,8周后均下降至正常水平。结论松果体及褪黑素可能通过影响大鼠胸腺上皮细胞IL-7的表达,从而调节胸腺细胞的分化发育。

关键词：松果体褪黑素胸腺上皮细胞白细胞介素7 免疫组织化学反转录-聚合酶链反应大鼠

氧化损伤对骨髓源性肝前体细胞恶性转化的影响

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解剖学报 2015年第6期46卷 780-784页

作者：文朝阳史争鸣赵娜薛晓伟丰平王学江首都医科大学医学生物学实验教学中心北京100069 北京积水潭医院外科北京100035 首都医科大学生理学与病理生理学系北京100069

目的探讨活性氧自由基对骨髓源性肝前体细胞恶性转化的影响。方法取经过鉴定的3代骨髓间充质干细胞(BMSCs)分为3组:对照组(BMSCs),生长因子诱导组(BMSCs+HGF+EGF),过氧化氢刺激组(BMSCs+HGF+EGF+H2O2)。分别在细胞培养的第7天、14天、2... 详细信息

目的探讨活性氧自由基对骨髓源性肝前体细胞恶性转化的影响。方法取经过鉴定的3代骨髓间充质干细胞(BMSCs)分为3组:对照组(BMSCs),生长因子诱导组(BMSCs+HGF+EGF),过氧化氢刺激组(BMSCs+HGF+EGF+H2O2)。分别在细胞培养的第7天、14天、21天、28天用RT-PCR方法检测各组细胞的白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)、角蛋白18(CK18)mRNA的表达。用免疫细胞化学方法检测细胞γ-谷氨酰转酞酶(γ-GT)的表达,用Schiff染色方法检测细胞DNA含量,用流式细胞仪检测非整倍体细胞。结果生长因子诱导组及过氧化氢刺激组细胞有ALB mRNA、AFP mRNA及CK18 mRNA的表达,过氧化氢刺激组细胞AFP mRNA、CK18mRNA、!-GT的表达、DNA含量及非整倍体细胞均高于生长因子诱导组(P<0.05)。结论骨髓间充质干细胞在体外诱导成为肝前体细胞,活性氧自由基可促使肝前体细胞过度增殖并恶性转化。

关键词：骨髓间充质干细胞氧化损伤恶性分化肝癌微环境反转录-聚合酶链反应大鼠

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人类β-防御素在眼表组织中的表达(英文)

中国组织工程研究与临床康复 2009年第50期13卷 9826-9831页

作者：辜臻晟盛耀华祝肇荣周建珍陆上麟上海交通大学医学院附属新华医院眼科上海市200092

背景:人类β-防御素主要定位于多种组织的表皮或上皮。在眼表中也存在防御素,但其在眼表中的分布及眼表疾病中的作用尚不十分清楚。目的:观察人类β-防御素在眼表组织中的分布,分析其在眼表疾病中的潜在作用。设计、时间及地点:以眼表... 详细信息

背景:人类β-防御素主要定位于多种组织的表皮或上皮。在眼表中也存在防御素,但其在眼表中的分布及眼表疾病中的作用尚不十分清楚。目的:观察人类β-防御素在眼表组织中的分布,分析其在眼表疾病中的潜在作用。设计、时间及地点:以眼表组织为观察对象体外对照实验,于2006-10/2007-12在上海交通大学医学院附属新华医院中心实验室和中国科学院上海分院细胞生化所完成。材料:18个炎性结膜样本中包括6个胬肉表面球结膜、4个球结膜囊肿、4个酸烧伤结膜组织、2个热烧伤结膜组织和2个结膜肉芽肿组织;15个炎性角膜样本中包括6个病毒性角膜炎、4个霉菌性角膜炎、3个细菌性角膜炎和2个角膜穿孔伤后摘除眼球;9个尸体眼正常球结膜样本,8个尸体眼正常角膜样本。方法:RT-PCR法及免疫组织化学法检测50份样本人类β-防御素表达。主要观察指标:人类β-防御素1～3三种蛋白因子在正常及炎症眼表组织的表达和定位。结果:RT-PCR检测发现,人类β-防御素1,3在所有被检角结膜组织中均显示阳性;人类β-防御素2在大部分炎症眼表组织中显示阳性,在正常眼表组织几乎不表达。免疫组织化学结果显示,大多数炎性眼表组织中均同时表达人类β-防御素1,2,分布于上皮细胞层,以基底层为主,偶见基质细胞的浸润,仅少数无人类β-防御素2表达;正常角膜和球结膜样本中均有人类β-防御素1表达,分布于上皮细胞层,以基底层为主,仅极少数同时存在人类β-防御素2表达。结论:人类β-防御素1,3呈组成式表达于正常及炎性眼表组织上皮细胞表皮与基底上皮细胞表层和基底层,人类β-防御素2则呈诱导式表达于大多数炎性眼表组织上皮细胞表皮与基底上皮细胞表层和基底层,均以基底层居多;3种人类β-防御素在对抗眼表感染和促进眼表损伤修复中可能起重要作用。

关键词：人类β-防御素反转录-聚合酶链反应免疫组织化学法眼表组织