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脾气虚胃溃疡大鼠胃黏膜生长抑素相关信号转导分子的变化

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解剖学报 2008年第6期39卷 894-900页

作者：杜娟王秀琴季凤清曾晓蓓尚宏伟孙海梅张立新首都医科大学组织学胚胎学教研室北京100069

目的探讨生长抑素及其信号传递分子与脾气虚胃溃疡的发生及转归的关系。方法选用成年Wistar大鼠,雌、雄性各35只,建立脾气虚胃溃疡大鼠模型;运用HE染色、免疫组织化学分析、RT-PCR及免疫印迹法,分别观察胃黏膜的组织结构、生长抑素含量... 详细信息

目的探讨生长抑素及其信号传递分子与脾气虚胃溃疡的发生及转归的关系。方法选用成年Wistar大鼠,雌、雄性各35只,建立脾气虚胃溃疡大鼠模型;运用HE染色、免疫组织化学分析、RT-PCR及免疫印迹法,分别观察胃黏膜的组织结构、生长抑素含量、2型生长抑素受体mRNA、细胞外信号传递激酶2(ERK2)表达的变化。结果脾气虚胃溃疡大鼠胃黏膜中,2型生长抑素的蛋白含量增加,生长抑素受体mRNA表达上调,(ERK2)表达下降。结论生长抑素信号传递途径中相关信号分子的变化可能是引起脾气虚胃溃疡发生的原因之一。

关键词：脾气虚胃溃疡生长抑素信号传递免疫组织化学反转录-聚合酶链反应免疫印迹法大鼠

龙胆苦苷对新生大鼠氧糖剥夺再灌注损伤海马神经元Caspase-3、Bax和Bcl-2表达的影响

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解剖学报 2016年第1期47卷 28-33页

作者：王建中雷有杰蒋红英王福青漯河医学高等专科学校解剖学教研室河南漯河462002 周口职业技术学院医学院人体教研室河南周口466000 许昌学院公共体育教学部河南许昌461000

目的探讨龙胆苦苷(GP)对新生大鼠氧糖剥夺再灌注损伤海马神经元的抗凋亡保护作用及机制。方法采用无糖培养基加缺氧法建立原代新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤模型,同时给予不同浓度的龙胆苦苷进行干预。应用Hoechst 33342染色法... 详细信息

目的探讨龙胆苦苷(GP)对新生大鼠氧糖剥夺再灌注损伤海马神经元的抗凋亡保护作用及机制。方法采用无糖培养基加缺氧法建立原代新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤模型,同时给予不同浓度的龙胆苦苷进行干预。应用Hoechst 33342染色法检测神经细胞的凋亡,并计算凋亡率;化学比色法测定神经细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率;RT-PCR和Western blotting技术检测凋亡相关因子Caspase-3、Bax和Bcl-2 m RNA和蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组Hoechst 33342染色神经元凋亡率明显升高,LDH漏出率增加,Caspase-3、Bax m RNA和蛋白的表达水平上调,Bcl-2 m RNA和蛋白的表达水平下降。与模型组比较,龙胆苦苷(40、20、10mg/L)可显著降低氧糖剥夺再灌注损伤神经元的凋亡率和LDH漏出率;龙胆苦苷(40mg/L)可明显抑制Caspase-3、Bax m RNA和蛋白的表达,升高Bcl-2 m RNA和蛋白的表达。结论龙胆苦苷对新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤所诱发的神经细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与上调Bcl-2表达,抑制Caspase-3、Bax表达有关。

关键词：龙胆苦苷氧糖剥夺再灌注损伤反转录-聚合酶链反应大鼠

小鼠造血干细胞体外衰老模型的构建及其相关生物学

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解剖学报 2010年第5期41卷 686-692页

作者：周玥杨斌姚欣王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的建立造血干细胞(HSCs)体外衰老模型,探讨其衰老的相关生物学调控机制,为寻找延缓HSC衰老方法奠定基础。方法用免疫磁性分选法分离、纯化小鼠Sca-1+HSCs,用流式细胞术鉴定分选细胞纯度,免疫荧光检测分选细胞Sca-1+表达。用三丁基过... 详细信息

目的建立造血干细胞(HSCs)体外衰老模型,探讨其衰老的相关生物学调控机制,为寻找延缓HSC衰老方法奠定基础。方法用免疫磁性分选法分离、纯化小鼠Sca-1+HSCs,用流式细胞术鉴定分选细胞纯度,免疫荧光检测分选细胞Sca-1+表达。用三丁基过氧化氢(t-BHP)100μmol/L诱导Sca-1+HSCs 6h,建立HSCs衰老体外模型。采用造血祖细胞集落培养,细胞周期分析和衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察衰老HSCs的生物学特点。DNA印迹法(Southern blotting)与TRAP-PCR SYBR Green染色法检测HSCs端粒长度和端粒酶活性。RT-PCR法检测衰老相关基因p16Ink4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1 mRNA的表达水平。结果免疫磁性分选法分离、纯化的Sca-1+HSCs纯度可达(87.33±1.25)%。100μmol/L的t-BHP作用Sca-1+HSCs 6h,其体外培养形成造血祖细胞集落能力,自我更新及多向分化潜能显著低于对照组,处于G1期细胞比例增加,SA-β-gal染色阳性细胞数增加。衰老Sca-1+HSCs的端粒缩短,端粒酶活性下降,p16Ink4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1mRNA的表达水平明显增高。结论用t-BHP能建立Sca-1+HSCs体外细胞衰老模型,提示p16Ink4a-Rb通路和p19Arf-Mdm2-p53-p21Cip1/Waf1通路在t-BHP诱导Sca-1+HSCs衰老过程中发挥重要作用。

关键词：造血干细胞衰老体外模型端粒端粒酶衰老相关β-半乳糖苷酶染色流式细胞术反转录-聚合酶链反应小鼠

无血清无饲养层人胚胎干细胞向胶质前体细胞的分化

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解剖学报 2011年第2期42卷 279-282页

作者：罗敏胡智兴梁道明昆明医学院药学院暨云南省天然药物药理重点实验室昆明650500 昆明医学院云南省生物医学工程中心昆明650500 昆明医学院药理学教研室昆明650500 昆明医学院第二附属医院昆明650031

目的建立无血清无饲养层人胚胎干细胞(hESCs)胶质前体细胞分化体系。方法将生长在层黏连蛋白包被的培养板上的人胚胎干细胞,悬浮培养诱导拟胚体(EBs)形成,将25d的EBs转移至含有胰岛素、5μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、20μg/L表... 详细信息

目的建立无血清无饲养层人胚胎干细胞(hESCs)胶质前体细胞分化体系。方法将生长在层黏连蛋白包被的培养板上的人胚胎干细胞,悬浮培养诱导拟胚体(EBs)形成,将25d的EBs转移至含有胰岛素、5μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、20μg/L表皮生长因子(EGF)和5μg/L三碘甲状腺素(T3)的胶质细胞分化培养基贴壁培养7～10d,诱导胶质前体细胞分化。收集成纤维样分化细胞,采用RT-PCR法检测胶质前体细胞早期基因的表达,细胞免疫荧光染色检测胶质前体细胞标记的表达。结果分化得到的细胞呈长梭形,表达神经胶质前体细胞标记NG2和血小板衍生生长因子受体α(PDGFRα),阳性率分别为37.2%和47.6%。该前体细胞可进一步分化为星形胶质细胞和少突胶质细胞,未见神经元。结论含有胰岛素、bFGF、EGF和T3的胶质细胞分化培养基可诱导hESCs向胶质前体细胞分化。

关键词：胚胎干细胞胶质前体细胞免疫荧光反转录-聚合酶链反应人

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输入性中东呼吸综合征胸部X线特点分析

中华放射学杂志 2016年第6期50卷 476-477页

作者：瞿嵘凌云罗裕锋广东省惠州市中心人民医院重症医学科 516001

患者男，43岁，韩国人，因背部酸痛7 d、发热2 d于2015年5月28日入院。主要临床表现：病程短，急性起病，以发热为主要表现。既往有甲状腺功能亢进病史7年。接触史：有明确中东呼吸综合征（middle east respiratory syndrome，MERS）患... 详细信息

患者男，43岁，韩国人，因背部酸痛7 d、发热2 d于2015年5月28日入院。主要临床表现：病程短，急性起病，以发热为主要表现。既往有甲状腺功能亢进病史7年。接触史：有明确中东呼吸综合征（middle east respiratory syndrome，MERS）患者接触史，为第二代MERS患者。体检：体温39.0℃，血压126/78 mmHg（1 mmHg＝0.133 kPa），心率98次/分，呼吸频率21次/min，双肺呼吸音稍粗，未闻及干湿性啰音，心律齐，腹部平软，肠鸣音正常。入院血常规：白细胞计数3.22×10^9/L，中性粒细胞2.35×10^9/L，血小板计数81×10^9/L，红细胞计数4.7×1012/L。病毒检测：5月29日中国疾病预防控制中心对3份咽拭子标本采用实时反转录-聚合酶链反应（real-time RT-PCR）方法进行中东呼吸综合征冠状病毒（middle east respiratory syndrome coronavirus，MERS-CoV）的3个标靶（upE/OPF1b/N2）核酸检测，结果显示均为阳性，血清标本、痰液、大便标本也呈阳性。

关键词：呼吸综合征 X线特点中东反转录-聚合酶链反应中国疾病预防控制中心输入性甲状腺功能亢进胸部

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从兔外周血直接克隆IgG重链可变区

解剖学报 2012年第6期43卷 762-766页

作者：周世权廖智杨林周吉航刘晓光舟山医院细胞分子学实验室舟山医院-中国科学院北京基因组研究所免疫基因组学联合实验室浙江舟山316004 浙江海洋学院海洋科学学院海洋生物资源及分子工程实验室浙江舟山316000

目的从兔外周血总RNA中直接扩增出IgG重链可变区基因。方法先从IMGT/GENE-DB数据库中获取编码大耳白兔免疫球蛋白(Ig)重链可变区(VH)的3个胚系基因片段VH(IGHV)、D(IGHD)和JH(IGHJ),以及编码γ重链恒定区(CH)基因Cγ(IGHG)的cDNA序列,... 详细信息

目的从兔外周血总RNA中直接扩增出IgG重链可变区基因。方法先从IMGT/GENE-DB数据库中获取编码大耳白兔免疫球蛋白(Ig)重链可变区(VH)的3个胚系基因片段VH(IGHV)、D(IGHD)和JH(IGHJ),以及编码γ重链恒定区(CH)基因Cγ(IGHG)的cDNA序列,然后设计嵌套引物,以兔外周血总RNA为模板,进行RT-PCR和Nested-PCR扩增,产物经胶回收后克隆到T载体,随机挑选白色克隆测序,最后将序列用Bioedit软件的Local Blast功能比对出Cγ的基因型,同时提交到IMGT/V-QUEST分析出所属的VH、D和JH胚系基因。结果获得25个克隆的插入子序列,每个克隆均为兔IgG重链可变区的编码基因,且包含了完整的VH、D、JH胚系基因片段,以及Cγ基因第1个外显子(CH1)序列的5’端部分,但没有任何2个克隆的序列完全相同。37个IGHV功能基因出现了2个;11个IGHD功能基因出现了8个;11个IGHJ功能基因出现了4个。VH-D-JH组合方式共出现18种,即使VH-D-JH组合方式相同,序列仍具有明显的差异。结论从兔外周血总RNA中直接扩增出了IgG重链可变区,自行设计的引物显示出了高度的特异性和良好的兼并性。

关键词：外周血免疫球蛋白重链可变区反转录-聚合酶链反应序列分析兔

卡铂诱导的听神经病模型大鼠脑干蜗神经核细胞凋亡因子的表达变化

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解剖学报 2015年第3期46卷 324-328页

作者：刘静李正莉何青黄红彦华中科技大学同济医学院附属同济医院耳鼻咽喉头颈外科武汉430030 华中科技大学同济医学院解剖学教研室武汉430030 武汉六七二中西医结合医院内科武汉430079

目的探讨卡铂(CBP)诱导的听神经病模型大鼠脑干蜗神经核细胞凋亡倾向及地塞米松(DEX)的神经保护作用。方法采用腹腔注射CBP制作听神经病模型。将SD大鼠随机分为3组,即生理盐水组(NS)、卡铂组(CBP)、地塞米松干预+卡铂组(DEX+CBP),每组18... 详细信息

目的探讨卡铂(CBP)诱导的听神经病模型大鼠脑干蜗神经核细胞凋亡倾向及地塞米松(DEX)的神经保护作用。方法采用腹腔注射CBP制作听神经病模型。将SD大鼠随机分为3组,即生理盐水组(NS)、卡铂组(CBP)、地塞米松干预+卡铂组(DEX+CBP),每组18只,并设3d及6d时间观察点。应用免疫组织化学方法观察各组大鼠脑干蜗神经核Caspase-3免疫反应性;RT-PCR技术检测凋亡酶激活因子1(Apaf-1)mRNA含量。结果在3d及6d时间点,CBP组大鼠脑干蜗神经核腹侧核(VCN)及背侧核(DCN)Caspase-3免疫反应性及Apaf-1mRNA含量明显强于NS组及DEX+CBP组(P反应性及Apaf-1 mRNA含量与NS组差异无显著性(P>0.05)。而6d时间点CBP组蜗神经核Apaf-1 mRNA含量显示强于3d时间点。结论卡铂诱导听神经损伤的同时,也可引起大鼠脑干蜗神经核细胞凋亡倾向,而地塞米松具有神经保护作用,减弱上述的凋亡效应。

关键词：蜗神经核听神经病免疫组织化学反转录-聚合酶链反应大鼠

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sox19b在斑马鱼胚胎眼睛发育中的作用

解剖学报 2013年第2期44卷 264-268页

作者：高明杨阳陈学冉史玮林浴霜郝爱军山东大学医学院组织学胚胎学教研室、教育部实验畸形学重点实验室济南250012

目的通过抑制sox19b基因的表达,探讨sox19b基因在斑马鱼胚胎眼睛发育和形成中的作用。方法通过显微注射sox19b吗啉寡聚核苷酸(MO)抑制sox19b基因的表达,观察胚胎发育过程中表型的变化;采用石蜡包埋组织切片及HE染色、RT-PCR和整封原位... 详细信息

目的通过抑制sox19b基因的表达,探讨sox19b基因在斑马鱼胚胎眼睛发育和形成中的作用。方法通过显微注射sox19b吗啉寡聚核苷酸(MO)抑制sox19b基因的表达,观察胚胎发育过程中表型的变化;采用石蜡包埋组织切片及HE染色、RT-PCR和整封原位杂交等方法探讨敲除sox19b后对斑马鱼胚胎眼睛发育的调控机制。结果敲除sox19b基因后,斑马鱼胚胎眼睛发育受到影响,表现为眼睛变小或缺失,视网膜及晶状体结构发育异常(n=57/93);眼睛发育过程中重要调控基因rx3、pax2a及vsx2等表达明显降低,进而影响眼睛的发育和形成。结论 sox19b基因作为转录调控因子,可以通过调节眼区转录因子的表达进而影响斑马鱼胚胎早期眼睛的发育和形成。

关键词： sox19b 吗啉寡聚核苷酸眼睛发育眼区转录因子原位杂交反转录-聚合酶链反应斑马鱼

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内皮素-1在烫伤大鼠脑血管损伤中的表达

解剖学报 2010年第1期41卷 104-108页

作者：林雪群戴育成祝高春万丽丹南昌大学医学院脑血管研究所解剖学教研室南昌330006 南昌大学第二附属医院分子医学重点实验室南昌330006

目的探讨内皮素-1(ET-1)在烫(烧)伤大鼠脑血管损伤的表达及其作用。方法应用组织学方法观察8只烫伤大鼠脑基底动脉组织结构的变化;应用RT-PCR测定48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1 mRNA的表达;应用Western blotting分析48只烫伤大鼠脑基底动... 详细信息

目的探讨内皮素-1(ET-1)在烫(烧)伤大鼠脑血管损伤的表达及其作用。方法应用组织学方法观察8只烫伤大鼠脑基底动脉组织结构的变化;应用RT-PCR测定48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1 mRNA的表达;应用Western blotting分析48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1的表达;应用放射免疫分析检测48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1水平的变化。结果烫伤大鼠脑基底动脉呈现病理学组织结构变化;烫伤后3h大鼠脑基底动脉ET-1 mRNA表达较正常对照组开始升高,6h达高峰;烫伤后6h大鼠脑基底动脉ET-1表达较正常对照组增强,12h达高峰;烫伤后各组大鼠脑基底动脉ET-1水平较正常对照组明显升高,6h达高峰。结论烫(烧)伤可诱发大鼠脑血管ET-1表达增加,增加表达的ET-1可能与烫(烧)伤大鼠脑血管损伤的病理发生有关。

关键词：内皮素-1 烫伤脑动脉免疫印迹法反转录-聚合酶链反应放射免疫分析大鼠