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大鼠血管球囊损伤促进血小板活化、凝血酶受体及血管紧张素Ⅱ1型受体的mRNA表达

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基础医学与临床 2005年第5期25卷 468-472页

作者：李永红葛志明李志强郭明磊董果雄李震海张运山东大学齐鲁医院心内科山东济南250012 青岛市中级法院技术处山东青岛266071 青岛大学医学院附属医院山东青岛266003 青岛市卫生局卫生监督所山东青岛266033

目的该研究通过建立大鼠主动脉内皮球囊损伤模型,观察血小板活化、凝血酶受体及血管紧张素Ⅱ1型受体的变化。方法将大鼠随机分为对照组(n=24)和手术组(n=24),并于术后3、7、14和28d取主动脉,通过组织学检查、放射免疫法和反转录聚合酶... 详细信息

目的该研究通过建立大鼠主动脉内皮球囊损伤模型,观察血小板活化、凝血酶受体及血管紧张素Ⅱ1型受体的变化。方法将大鼠随机分为对照组(n=24)和手术组(n=24),并于术后3、7、14和28d取主动脉,通过组织学检查、放射免疫法和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测血管球囊损伤后内膜增生的过程、血小板表面GMP-140的数目、血管AT1受体和凝血酶受体mRNA表达的变化。结果①凝血酶受体mRNA在正常血管组织表达极弱,球囊损伤术后3d已显著增加,术后14d达峰值,术后28d开始下降。②AT1受体mRNA于术后3d明显增高,并持续至术后14d,术后28d恢复至对照水平。③GMP-140于术后3d明显升高,术后7d开始下降。④内皮损伤术后3d已有增殖的血管平滑肌细胞(VSMC)移行至内膜层,术后7d内膜开始增生,术后14dVSMC的增殖及内膜增生更为明显,术后28dVSMC的增殖明显减弱,细胞外基质增加,内膜继续增生。结论血小板活化、凝血酶受体和AT1受体mRNA表达增加参与了血管内皮损伤后内膜增生的过程。

关键词： mRNA表达凝血酶受体血管球囊损伤血小板活化大鼠血小板表面GMP-140 血管紧张素Ⅱ1型受体反转录聚合酶链反应 AT1受体mRNA 血管平滑肌细胞内膜增生血管内皮损伤 VSMC 主动脉内皮组织学检查放射免疫法细胞外基质

急性肝功能衰竭大鼠模型中程序性死亡-1及其配体的表达

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中华传染病杂志 2010年第9期28卷 532-535页

作者：侯伟王凤玲金茜于盈叶丹谢红东涂文辉陈永平浙江省台州市立医院感染科 318000 温州医学院附属第一医院感染科

的探讨程序性死亡-1（PD-1）/程序性死亡配体-1（PD-L1）在急性肝功能衰竭大鼠模型中的表达变化及其在肝脏急性炎性损伤中的作用.方法 SD大鼠分为2组：正常组6只,模型组30只,以D-氨基半乳糖（D-Gal）诱导急性肝功能衰竭大鼠模型.造模... 详细信息

的探讨程序性死亡-1（PD-1）/程序性死亡配体-1（PD-L1）在急性肝功能衰竭大鼠模型中的表达变化及其在肝脏急性炎性损伤中的作用.方法 SD大鼠分为2组：正常组6只,模型组30只,以D-氨基半乳糖（D-Gal）诱导急性肝功能衰竭大鼠模型.造模后分别在12、24、48、72和120 h取大鼠血及肝脏标本,采用RT-PCR法检测肝组织中PD-1 mRNA、PD-L1 mRNA的表达.计量资料组间比较用t检验,相关性检验用Pearson直线相关分析.结果造模后12 h,大鼠血ALT、AST明显升高,分别为（217.3±33.7）U/L和（397.2±101.3）U/L,显著高于正常组的（30.5±3.1）U/L和（78.6±4.2）U/L,差异有统计学意义（t=-8.921,-6.121,均P＜0.01）,至48 h达高峰.造模后12 h,模型组大鼠PD-1 mRNA表达（0.385±0.074）高于正常组（0.097±0.009）,差异有统计学意义（t=-7.725,P＜0.01）,48 h达高峰（0.927±0.132）,72 h则明显下降.PD-L1mRNA在正常大鼠肝组织中表达很少,模型组PD-L1 mRNA水平逐渐升高,48 h达高峰（0.593±0.105）（t=-10.076,P＜0.01）.造模后大鼠PD-1、PD-L1表达水平与血清ALT水平呈正相关（r=0.807,0.792,P＜0.01）.结论 PD-1/PD-L1表达在急性肝功能衰竭大鼠肝脏炎性损伤中可能起重要作用.

关键词：肝功能衰竭,急性疾病模型,动物 RNA,信使基因表达反转录聚合酶链反应细胞凋亡

特发性血小板减少性紫癜患儿骨髓单个核细胞CD_(40)/CD_(40)L表达的意义

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实用儿科临床杂志 2009年第15期24卷 1169-1171页

作者：邓彩艳王军王西阁冯建飞张彦洁郑州大学第三附属医院儿科郑州450052

目的测定共刺激分子CD40/CD40L及其mRNA在特发性血小板减少性紫癜(ITP)儿童骨髓单个核细胞中的表达,研究其与血小板抗体产生的关系,探讨其在ITP发病机制中的作用。方法收集34例ITP患儿。其中急性ITP22例,慢性ITP12例,对照组20例。ITP患... 详细信息

目的测定共刺激分子CD40/CD40L及其mRNA在特发性血小板减少性紫癜(ITP)儿童骨髓单个核细胞中的表达,研究其与血小板抗体产生的关系,探讨其在ITP发病机制中的作用。方法收集34例ITP患儿。其中急性ITP22例,慢性ITP12例,对照组20例。ITP患儿于治疗前收集骨髓标本,密度梯度离心法分离单个核细胞,应用流式细胞术检测其CD40/CD40L表达水平;提取细胞总RNA,采用RT-PCR、琼脂糖凝胶电泳法测定其CD40/CD40L mRNA表达;于收集骨髓前采集其外周血,采用ELISA法检测其血小板相关抗体(PAIgG)。应用SPSS15.0软件进行单因素方差分析和直线回归相关分析。结果与对照组比较,CD40在急性ITP组[(10.361±4.125)%]和慢性ITP组[(14.066±4.655)%]的表达均增高(Pa<0.01),CD40L在2组的表达亦均增高[分别为(5.094±3.154)%、(6.698±3.673)%,Pa<0.05],CD40在慢性ITP组的表达高于急性ITP组(P<0.05);CD40L mRNA在急性ITP组(0.677±0.111)和慢性ITP组(0.699±0.105)表达均增高(Pa<0.05),CD40 mRNA在慢性ITP组(0.868±0.121)表达高于急性ITP组(0.798±0.076)和对照组(Pa<0.05);CD40、CD40L的表达与PAIgG均呈正相关(r=0.741,0.826Pa<0.05)。结论ITP患儿骨髓单个核细胞CD40及CD40L表达增高,CD40和CD40 mRNA在慢性ITP组表达显著高于急性ITP组,表明CD40/CD40L在儿童ITP尤其是慢性ITP发病过程中可能起重要作用。

关键词：特发性血小板减少性紫癜 CD40 CD40L 流式细胞术反转录聚合酶链反应儿童

免疫组化检测非小细胞肺癌ALK融合基因表达异常

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临床与实验病理学杂志 2015年第5期31卷 542-547页

作者：侯丹阳邵璐徐傲冷再君伍权李传应陈柯徐修才操乐杰安徽医科大学附属省立医院呼吸内科合肥230001 蚌埠医学院第二附属医院呼吸内科蚌埠233000 安徽医科大学附属省立医院病理科合肥230001 安徽医科大学附属省立医院中心实验室合肥230001

目的探讨免疫组化(immunohistochemistry,IHC)在检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)融合基因表达异常的准确性,并观察ALK阳性患者的临床病理特征。方法收集NSCLC患者石蜡标本234例,使用兔单克隆D5F3抗体行ALK蛋白IHC检测,对其中ALK阳性标本采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测验证。结果 234例NSCLC中,IHC检测ALK融合基因蛋白阳性率为8.97%(21/234),经RT-PCR检测验证有14例存在ALK基因融合,阳性率为5.98%(14/234);与组织学类型、年龄、分期相关(P120时,二者符合率为100%。结论尽管IHC检测ALK融合基因蛋白表达存在一定假阳性,但当IHC()或组织化学评分>120时与其他辅助检查一致性高具有诊断价值,是较为可靠的ALK筛查方法。IHC筛查及随后RT-PCR检测验证是发现ALK阳性肺癌经济可行的辅助诊断。

关键词：肺肿瘤非小细胞肺癌间变性淋巴瘤激酶表皮生长因子受体免疫组织化学反转录聚合酶链反应

丝裂原活化蛋白激酶在肿瘤坏死因子α诱导滋养层细胞MMP-9基因表达中的作用

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中国实用妇科与产科杂志 2005年第4期21卷 220-222页

作者：张曦倩陈士岭邢福祺赵晓山南方医科大学南方医院生殖中心广州510515 广东省中医院广州510120

目的探讨早孕滋养层细胞有节制地侵入机制,研究肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导滋养层细胞基质金属蛋白酶9(MMP9)基因表达的调控机制。方法2004年南方医科大学南方医院将10-4g/LTNFα分别处理滋养层细胞0、5、10、20、30min后,应用细胞ELISA... 详细信息

目的探讨早孕滋养层细胞有节制地侵入机制,研究肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导滋养层细胞基质金属蛋白酶9(MMP9)基因表达的调控机制。方法2004年南方医科大学南方医院将10-4g/LTNFα分别处理滋养层细胞0、5、10、20、30min后,应用细胞ELISA法测定滋养层细胞中蛋白激酶的活性变化;预先给予丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的特异性抑制剂处理滋养层细胞30min,然后给予10-4g/LTNFα处理滋养层细胞24h,应用反转录聚合酶链反应(RTPCR)检测滋养层细胞MMP9基因表达的变化。结果发现10-4g/LTNFα均能迅速激活滋养层细胞的细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、cjun氨基末端激酶(JNK)、p38MAPK激酶活性。TNFα刺激滋养层细胞引起MMP9mRNA表达显著增加,其能被ERK或p38MAPK的特异性抑制剂所抑制。结论ERK和p38MAPK可能是TNFα诱导滋养层细胞MMP9基因表达增加的重要调节物质。

关键词：丝裂原活化蛋白激酶滋养层细胞基因表达基质金属蛋白酶-9(MMP-9) 肿瘤坏死因子α(TNF-α) 细胞外信号调节蛋白激酶 c-jun氨基末端激酶 p38MAPK激酶活性反转录聚合酶链反应特异性抑制剂南方医科大学 ELISA法 mRNA表达 2004年侵入机制调控机制南方医院

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人白细胞介素-15表达菌株的构建

河南师范大学学报（自然科学版） 2012年第3期40卷 116-118页

作者：张涛许崇利姜利保惠远峰谢莹吉林博德医学免疫制品有限公司吉林132013 吉林化工学院环境与生物工程学院吉林132022 国电吉林热电厂基建部吉林132021

从健康人外周血分离单核细胞,并提取总RNA,利用RT-PCR扩增出白细胞介素15(IL-15)基因.构建了重组表达菌株BL21(DE3)(pET28c(+)-IL-15).经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒(pET28c(+)-IL-15)含有IL-15基因.经Western blot鉴定证实... 详细信息

从健康人外周血分离单核细胞,并提取总RNA,利用RT-PCR扩增出白细胞介素15(IL-15)基因.构建了重组表达菌株BL21(DE3)(pET28c(+)-IL-15).经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒(pET28c(+)-IL-15)含有IL-15基因.经Western blot鉴定证实为IL-15,并实现了在大肠杆菌中的高效表达.表达产物占菌体总蛋白的32%,从而为进一步研究IL-15的生物学功能和临床应用奠定了基础.

关键词：大肠杆菌 IL-15基因反转录聚合酶链反应基因表达

不同预后尖锐湿疣组织中Toll样受体3、9的表达

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中华皮肤科杂志 2011年第5期44卷 354-356页

作者：张悦董冠英韩秀萍中国医科大学附属盛京医院皮肤科沈阳110004 辽宁医学院附属第一医院皮肤科

目的探讨不同预后尖锐湿疣（CA）患者皮损局部T0u样受体3（TLR3）和Toll样受体9（TLR9）表达定位及TLR3mRNA、TLR9mRNA的表达情况。方法免疫组化SP法及反转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测10例CA复发者、14例CA无复发者及10例包皮组织... 详细信息

目的探讨不同预后尖锐湿疣（CA）患者皮损局部T0u样受体3（TLR3）和Toll样受体9（TLR9）表达定位及TLR3mRNA、TLR9mRNA的表达情况。方法免疫组化SP法及反转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测10例CA复发者、14例CA无复发者及10例包皮组织中TLR3及TLR9表达情况。结果TLR3、TLR9在无复发CA皮损中表达以棘层、颗粒层为主；在复发组CA皮损中表达以基底层、棘层为主。无复发组CA组织中TLR3mRNA表达较对照组及复发组均明显升高（P〈0．01、P〈0．05），TLR9mRNA较对照组明显升高（P〈0．05），较复发组差异无统计学意义。结论表皮TLR3及TLR9的表达部位和表达量的改变可能与CA预后有关，TLR3的影响可能更大。

关键词： Toll样受体3 包皮组织尖锐湿疣预后反转录聚合酶链反应免疫组化SP法 TLR9 mRNA表达

急性白血病患者黑色素瘤特异性抗原基因的表达及其与FLT3基因比较的临床意义

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白血病．淋巴瘤 2010年第5期19卷 287-289页

作者：王丹蕾马保根张茵时杰郑州大学第一附属医院血液科 450052 河南省人民医院血液科

目的探讨黑色素瘤优先表达抗原（PRAME）基因在急性白血病（AL）患者中的表达及其临床意义.方法应用基于TaqMan探针的RT-PCR技术榆测119例AL患者骨髓中PRAME mRNA的表达,包括急性髓细胞性白血病（AML）97例,急性淋巴细胞性白血病（ALL... 详细信息

目的探讨黑色素瘤优先表达抗原（PRAME）基因在急性白血病（AL）患者中的表达及其临床意义.方法应用基于TaqMan探针的RT-PCR技术榆测119例AL患者骨髓中PRAME mRNA的表达,包括急性髓细胞性白血病（AML）97例,急性淋巴细胞性白血病（ALL）22例,并与FLT3 mRNA的表达相比较.结果 AML患者PRAME阳性表达为50例（51.5%）,ALL患者PRAME阳性表达为8例（36.4%）.11例健康对照及17例非血液病患者骨髓细胞中有5例PRAME mRNA呈微量表达.AL患者中AML 33例和ALL 5例患者PRAME和FLT3均阳性,AML 17例和ALL 3例患者PRAME阳性而FLT3阴性.短期观察,9例PRAME、FLT3均阳性的患者经化疗达完全缓解后,PRAME表达均有不同程度地下降.结论 PRAME基因在AL中阳性表达,其有望成为AL微小残留监测的标志性基因.

关键词：白血病,急性基因表达 PRAME FLT3 实时定量反转录聚合酶链反应

HeLa细胞感染痢疾杆菌前后差异表达的新EST序列的电子延伸及验证

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世界华人消化杂志 2007年第17期15卷 1905-1913页

作者：黄留玉史兆兴袁静胡福泉军事医学科学院疾病预防控制所北京市100071 中国人民解放军第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆市400038

目的:研究痢疾杆菌福氏2a入侵前和入侵后3h的人上皮细胞差异表达的新基因.方法:采用增毒的痢疾杆菌福氏2a 2457T侵袭HeLa细胞,检查HeLa细胞中细菌的数量并用RT-PCR方法从HeLa细胞中提取总RNA,制备探针.采用含有约3000个代表新基因的芯... 详细信息

目的:研究痢疾杆菌福氏2a入侵前和入侵后3h的人上皮细胞差异表达的新基因.方法:采用增毒的痢疾杆菌福氏2a 2457T侵袭HeLa细胞,检查HeLa细胞中细菌的数量并用RT-PCR方法从HeLa细胞中提取总RNA,制备探针.采用含有约3000个代表新基因的芯片进行芯片杂交,分析杂交结果.将所获得的新的156条EST序列为种子序列用cDNA微阵列实验,以人类EST数据库为基础库,应用siClone软件进行EST拼接、校对并尽可能延长获得大片段或全长cDNA.选取基因组未注释的编码区序列作为新基因进行RT-PCR实验验证.结果:共鉴定到≥3倍或≤0.33的差异表达的代表新基因的EST序列45条,其中25个延伸序列鉴定为与重要的肠道功能相关的已知基因,并有3个在痢疾杆菌侵袭期间高表达的存在显著差异的新EST序列,他们分别名为:NPCCKH12、ADBCSB02和HTBAMG05,这3个基因是新的人基因或假基因.结论:鉴定出了在HeLa细胞感染痢疾杆菌前后差异表达的新EST序列,为进一步研究痢疾杆菌与寄主相互作用奠定了基础.

关键词：痢疾杆菌福氏2a 表达序列标签:cDNA微阵列电子延伸反转录聚合酶链反应基因鉴定