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反转录聚合酶链反应检测前列腺癌病人外周血中前列腺特异膜抗原

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中华检验医学杂志 2002年第1期25卷 45-46页

作者：马乐吴小晶潘柏年首都医科大学附属北京妇产医院 100006 北京大学第一医院

前列腺特异膜抗原（PSM）存在前列腺细胞上，患者列腺癌时，有很少量PSM进入血清，检测病人血清中PSM的水平，对前列腺癌的诊断有一定的临床意义，但该方法的敏感性和特异性均不理想。我们运用敏感的反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法... 详细信息

前列腺特异膜抗原（PSM）存在前列腺细胞上，患者列腺癌时，有很少量PSM进入血清，检测病人血清中PSM的水平，对前列腺癌的诊断有一定的临床意义，但该方法的敏感性和特异性均不理想。我们运用敏感的反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法，检测了33例前列腺癌病人外周血中PSM mRNA的表达，结合临床有关资料，探讨其临床意义。

关键词：前列腺癌外周血前列腺特异膜抗原反转录聚合酶链反应 PSM

实时定量荧光反转录-聚合酶链反应检测急性白血病AML1／ETO融合基因

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白血病．淋巴瘤 2009年第12期18卷 735-738页

作者：李斌喻镁佳梁洋李晓进胡杰陈琪李惠民云南省第二人民医院血液科昆明650021 成都军区昆明总医院血液科

目的建立实时定量荧光反转录-聚合酶链反应（RQRT—PCR）的方法并用来检测急性髓系白血病（AML）-M2患者中AML1／ETO融合基因的拷贝数，观察患者体内融合基因阳性率、该融合基因转录水平的变化情况及AML1／ETO融合基因阳性患者对治疗的... 详细信息

目的建立实时定量荧光反转录-聚合酶链反应（RQRT—PCR）的方法并用来检测急性髓系白血病（AML）-M2患者中AML1／ETO融合基因的拷贝数，观察患者体内融合基因阳性率、该融合基因转录水平的变化情况及AML1／ETO融合基因阳性患者对治疗的反应。方法利用含AML1／ETO融合基因的Kasumi-1细胞株构建质粒标准品并制作标准曲线，检测25例AML—M2患者的骨髓及外周血标本45份，个别患者连续监测融合基因转录表达水平。25例患者均同时行流式细胞术免疫分型检测及骨髓细胞染色体检查，确诊后给予MA方案进行诱导缓解。结果7例（28％）AML—M2初发确诊患者检测到AML1／ETO阳性（AML1／ETO：ABL为0．01～19．2），其中5例（20％）有t（8；21）（q22；q22）。连续监测患者融合基因转录表达水平与临床缓解和复发的变化情况相吻合。7例AML1／ETO融合基因阳性患者均在MA治疗1个疗程后达完全缓解，AML1／ETO融合基因下降3个数量级。其余18例完全缓解11例。连续监测7例AML1／ETO融合基因阳性患者6个月均处于完全缓解状态。结论RQRT—PCR技术成熟、操作简便，检测白血病融合基因结果准确稳定，对于临床明确诊断、具体分型、动态观测肿瘤负荷、选择治疗方案、评估治疗效果和预后都有较大价值。

关键词：白血病基因融合反转录聚合酶链反应 AML1/ETO

反转录聚合酶链反应和核酸探针检测禽呼肠孤病毒研究的概述

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广西畜牧兽医 2003年第5期19卷 195-198页

作者：谢芝勋刘加波廖敏庞耀珊谢志勤邓显文李康然唐小飞何竞铭广西兽医研究所广西南宁530001 广西大学动物科技学院广西南宁530005

根据禽呼肠孤病毒 (ARV )参考毒株S1 1 3 3S1基因序列 ,设计合成 4对引物而分别建立了RT -PCR、半套式PCR和一步法PCR三种用于检测ARV的方法。它们能检测到的最近ARVRNA量分别为 1pg、1fg和 0 1 6ngRNA ;研制出禽呼肠孤病毒地高辛核酸... 详细信息

根据禽呼肠孤病毒 (ARV )参考毒株S1 1 3 3S1基因序列 ,设计合成 4对引物而分别建立了RT -PCR、半套式PCR和一步法PCR三种用于检测ARV的方法。它们能检测到的最近ARVRNA量分别为 1pg、1fg和 0 1 6ngRNA ;研制出禽呼肠孤病毒地高辛核酸探针 ,并建立了地高辛核酸探针检测ARV的方法 ,该核酸探针最低能检测到 0 45ng的ARVRNA ;对广西部分鸡场血清学调查表明 ,ARV平均阳性率为 2 7% ;对广西ARV野毒株进行了分离和鉴定 ,并对获得的 2个地方分离株的S1基因片段进行测序及分析 ,两分离株与标准株S1 1 3 3的同源性分别为98 5 %和 98 3 % ;用所建立的RT -PCR和地高辛核酸探针方法对用ARV人工感染鸡采集的各种样品的检测 ,并和传统病原分离方法进行比较 ,结果RT -PCR检出率为 92 5 % ( 2 2 2 /2 40 ) ,地高辛核酸探针检出率为 74 2 % ( 1 78/2 40 ) ,病原分离鉴定方法检出率为 5 5 % ( 1 3 2 /2 40 )。用ARV强毒分别对免疫种鸡后代和无母源抗体或SPF的雏鸡进行攻毒试验 ,结果油苗免疫的种鸡后代对本病有很强的抵抗力 ,能抵抗ARV强毒的攻击 ,其平均保护率 90 8% ( 1 0 9/1 2 0 )。而无母源抗体或SPF的雏鸡攻毒后均 1 0 0 % ( 2 40 /2 40 )死亡。

关键词：反转录聚合酶链反应核酸探针检测禽呼肠孤病毒

反转录聚合酶链反应检测癌胚抗原信使核糖核酸诊断消化道恶性肿瘤

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中国综合临床 2002年第4期18卷 336-337页

作者：薛承岩白海洋刘艳华李桂洁承德医学院附属医院河北067000

目的通过分析不同病变组织表达癌胚抗原信使核糖核酸 ( CEA-m RNA)的差异 ,探讨 CEA-m RNA指标诊断消化道恶性肿瘤的应用价值。方法以 35例消化道恶性肿瘤患者和 12例非恶性肿瘤的良性消化道疾病患者为研究对象 ,收集新鲜肿瘤组织及其... 详细信息

目的通过分析不同病变组织表达癌胚抗原信使核糖核酸 ( CEA-m RNA)的差异 ,探讨 CEA-m RNA指标诊断消化道恶性肿瘤的应用价值。方法以 35例消化道恶性肿瘤患者和 12例非恶性肿瘤的良性消化道疾病患者为研究对象 ,收集新鲜肿瘤组织及其癌旁正常组织和非恶性肿瘤组织以及同体血液为检测标本 ,应用套式反转录聚合酶链反应 ( RT-PCR)检测组织标本中 CEA-m RNA、酶联免疫吸附试验 ( EL ISA)检测血液标本癌胚抗原 ( CEA)。结果恶性消化道肿物患者瘤组织标本 2 9例 ( 82 .9% )表达 CEA-m RNA,血液标本 15例 ( 42 .9% )表达 CEA-m RNA,两个指标表达情况相比具有显著性差异 ( P<0 .0 1)。癌旁正常组织非癌病理组织也分别检测 4例和 1例表达 CEA-m RNA阳性结果 ,组织标本 CEA-m RNA指标诊断恶性消化道肿瘤的特异性为 95 .0 %、敏感性为 82 .9%。结论在诊断消化道恶性肿瘤方面 ,CEA-m RNA是特异性和敏感性较好且很实用的指标之一。

关键词：消化道恶性肿瘤 CEA-mRNA 诊断反转录聚合酶链反应癌胚抗原

荧光定量反转录聚合酶链反应用于GⅠ型和GⅡ型诺如病毒的检测效能

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中国乡村医药 2021年第20期28卷 55-56页

作者：胡颖浙江磐安县第二人民医院检验科 322302

目的探讨荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)用于GⅠ型和GⅡ型诺如病毒的检测效能。方法选取2017年5月至2020年4月该院收治的有腹泻、腹痛、呕吐症状患儿40例,采集两份粪便样本检测GⅠ型和GⅡ型诺如病毒,均采用荧光定量RT-PCR与常规RT-... 详细信息

目的探讨荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)用于GⅠ型和GⅡ型诺如病毒的检测效能。方法选取2017年5月至2020年4月该院收治的有腹泻、腹痛、呕吐症状患儿40例,采集两份粪便样本检测GⅠ型和GⅡ型诺如病毒,均采用荧光定量RT-PCR与常规RT-PCR检测方式,对比两种检测方式的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确率。结果常规RT-PCR对诺如病毒的检测灵敏度为82.4%(28/34),特异度3/6,阳性预测值90.3%(28/31),阴性预测值3/9,准确率77.5%(31/40)。荧光定量RT-PCR对诺如病毒的检测灵敏度为100%(34/34),特异度5/6,阳性预测值97.1%(34/35),阴性预测值5/5,准确率97.5%(39/40)。结论荧光定量RT-PCR与常规RT-PCR对GⅠ型和GⅡ型诺如病毒均有一定的检测效果,但前者更准确。

关键词：荧光定量反转录聚合酶链反应诺如病毒检测

实时荧光定量反转录聚合酶链反应检测bcl-2基因mRNA表达

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中华医学遗传学杂志 2002年第5期19卷 412-415页

作者：张昭秀吕联煌兰小鹏胡建达林敏辉景全胜福建医科大学附属协和医院福建省血液病研究所福州350001

目的　建立实时荧光定量反转录聚合酶链反应 (reverse transcription- polymerase chain reac-tion,RT- PCR)法检测 bcl- 2基因 m RNA表达。方法　应用 T- A克隆技术构建含 bcl- 2基因的载体作为标准模板 ,采用荧光 Taq man方法及探针... 详细信息

ISBN: (纸本)None

目的　建立实时荧光定量反转录聚合酶链反应 (reverse transcription- polymerase chain reac-tion,RT- PCR)法检测 bcl- 2基因 m RNA表达。方法　应用 T- A克隆技术构建含 bcl- 2基因的载体作为标准模板 ,采用荧光 Taq man方法及探针标记技术 ,建立实时荧光定量 RT- PCR方法 ,制备标准曲线 ,检测bcl- 2反义核酸治疗前后人类 Burkitt's淋巴瘤裸鼠模型中瘤细胞的 bcl- 2 m RNA表达水平变化 ,并与半定量 RT- PCR检测结果进行比较。结果　实时荧光定量 RT- PCR检测 bcl- 2反义核酸治疗组的瘤细胞 bcl- 2m RNA表达明显降低 ,而 bcl- 2无义核酸对照组及空白对照组的瘤细胞 bcl- 2 m RNA表达仍较高 ,且显示无义核酸对照组与空白对照组的 bcl- 2 m RNA表达水平相近。半定量 RT- PCR结果显示 bcl- 2出现类似的变化趋势。结论　所建立的实时荧光定量 RT- PCR用于检测 bcl- 2 m RNA表达 ,结果用拷贝数表示 ,比半定量 RT- PCR更灵敏。

关键词：实时荧光定量反转录聚合酶链反应 bcl-2基因聚合酶链反应

排除β-肌动蛋白假基因对反转录聚合酶链反应的干扰

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中国职业医学 2006年第6期33卷 412-414,428页

作者：陈嘉昌李森华彭瑾瑜付艳艳叶伟超常弘中山大学生命科学学院广东广州510275 广东省职业病防治院广州510300

目的筛选合适的β-肌动蛋白(β-actin)引物以排除RNA样本中残存的DNA对人类基因表达分析的干扰。方法利用EMBL、PSEUDOGENE等生物信息数据库,寻找β-actin的假基因。同时自行设计和从国内外文献中筛选了众多β-actin引物。选用其中具有... 详细信息

目的筛选合适的β-肌动蛋白(β-actin)引物以排除RNA样本中残存的DNA对人类基因表达分析的干扰。方法利用EMBL、PSEUDOGENE等生物信息数据库,寻找β-actin的假基因。同时自行设计和从国内外文献中筛选了众多β-actin引物。选用其中具有代表性的5对跨过内含子的引物,分别将基因组DNA、未经逆转录的RNA、cDNA作为模板,对这5对引物进行聚合酶链反应(PCR)扩增。结果生物信息学分析发现β-actin有37个假基因并且发现绝大多数的研究者所使用的引物都存在假基因干扰问题。当分别用DNA和cDNA作为模板时,5对引物中的1对跨过内含子的引物能扩增出大小不同的条带。结论使用该对引物能有效发现和排除RNA样本中所残存的DNA的干扰,令人类基因表达分析得出更准确的结果。

关键词： β-肌动蛋白加工后假基因基因表达分析反转录聚合酶链反应

反转录聚合酶链反应检测血液标本癌胚抗原mRNA诊断消化系统恶性肿瘤

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中国综合临床 2001年第9期17卷 681-682页

作者：杜新生刘东坡杨桂梅薛承岩白海洋承德医学院附属医院河北承德067000

目的探讨癌胚抗原 m RNA(CEA-m RNA)在诊断与鉴别诊断消化系统恶性肿瘤价值。方法以 5 4例消化道恶性肿瘤患者 (肿瘤组 )和 42例非恶性肿瘤的良性消化道患者 (非肿瘤组 )为研究对象 ,应用反转录聚合酶链反应 (RT-PCR)检测血液标本 CEA-m... 详细信息

目的探讨癌胚抗原 m RNA(CEA-m RNA)在诊断与鉴别诊断消化系统恶性肿瘤价值。方法以 5 4例消化道恶性肿瘤患者 (肿瘤组 )和 42例非恶性肿瘤的良性消化道患者 (非肿瘤组 )为研究对象 ,应用反转录聚合酶链反应 (RT-PCR)检测血液标本 CEA-m RNA。结果血液标本 CEA-m RNA阳性检测结果为恶性肿瘤组 3 1例 (5 7.4% ) ,非肿瘤组 1例 (2 .4% ) ,两组阳性结果的差异具有显著性 (P<0 .0 1)。血液标本 RT-PCR检测 CEA-m RNA指标诊断恶性消化系统肿瘤的特异性为 97.5 %、敏感性为 5 7.4%。结论在诊断与鉴别诊断消化系统恶性肿瘤等方面 ,CEA-m RNA是一个特异性和敏感性比较好且很实用的指标。

关键词：消化系统恶性肿瘤癌胚抗原 mRNA 反转录聚合酶链反应诊断

反转录聚合酶链反应法检测端粒酶催化蛋白亚单位mRNA

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沈阳部队医药 2001年第4期14卷 294-295页

作者：邱广斌邱广蓉富伟能宫立国孙淼第202医院检验科 110003 中国医科大学医学遗传学教研室

为研究端粒酶催化蛋白亚单位(caltalytic protein subunits of telomerase,hTERT)mRNA在肿瘤组织中的表达情况,建立一种恶性肿瘤诊断的新方法,通过提取肿瘤组织总RNA,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法对76例各型肿瘤组织及5例恶性胞腹... 详细信息

为研究端粒酶催化蛋白亚单位(caltalytic protein subunits of telomerase,hTERT)mRNA在肿瘤组织中的表达情况,建立一种恶性肿瘤诊断的新方法,通过提取肿瘤组织总RNA,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法对76例各型肿瘤组织及5例恶性胞腹水进行了检测。结果表明,76例各型肿瘤组织中66例阳性,5例恶性胸腹水全部阳性,表明RT-PCR法检测hTERTmRNA是一种灵敏、简便的恶性肿瘤诊断的新方法。

关键词：端粒酶反转录聚合酶链反应恶性肿瘤诊断蛋白亚单位mRNA