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小鼠ob基因启动子中葡萄糖和胰岛素反应元件的鉴定

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2000年第5期32卷 541-544页

作者：王方年马春姑张艳玲张乃娴陈幼妹汤其群宋后燕上海医科大学分子遗传学研究室!上海200032

为了解葡萄糖和胰岛素调控小鼠ob基因表达调控的机制 ,应用荧光素酶报告基因、凝胶迁移率变动分析 (gelmobilityshiftassays,GMSA)、DNaseI足迹分析和突变分析技术对小鼠ob基因启动子中葡萄糖和胰岛素反应元件 (GLRE和IRE)进行了鉴定。... 详细信息

为了解葡萄糖和胰岛素调控小鼠ob基因表达调控的机制 ,应用荧光素酶报告基因、凝胶迁移率变动分析 (gelmobilityshiftassays,GMSA)、DNaseI足迹分析和突变分析技术对小鼠ob基因启动子中葡萄糖和胰岛素反应元件 (GLRE和IRE)进行了鉴定。转染及报告基因活性分析结果显示 ,在小鼠ob基因启动子 - 1719～ - 145 2bp之间存在负调控元件、GLRE和IRE。GMSA结果显示葡萄糖和胰岛素抑制转录因子与顺式元件结合。DNaseI足迹分析和突变分析显示此结合区为AGCAAAA ,位于ob基因启动子的 - 16 98～ - 16 92bp。以上结果说明 ,小鼠ob基因启动子 - 1719～ - 145 2bp之间存在小鼠ob基因表达的负调控元件 ,葡萄糖和胰岛素通过同一个途径 ,即通过抑制某转录因子与此顺式元件的结合促进小鼠ob基因的表达 ,位于小鼠ob基因启动子 - 16 98～- 16 92bp的顺式作用元件AGCAAAA为一新的GLRE和IRE。

关键词： ob基因瘦蛋白(leptin) 葡萄糖胰岛素反应元件

捕食应激对大鼠海马环一磷酸腺苷反应元件结合蛋白表达的影响

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中华医学杂志 2007年第47期87卷 3367-3371页

作者：王庆松吴渝宪王伟文向阳成都军区总医院神经内科 610083

目的探讨严重心理应激所致情感行为异常与认知功能受损的神经生物学机制。方法在大鼠捕食应激模型基础上,通过免疫组织化学与蛋白质免疫印迹检测,观测应激大鼠神经细胞核转录因子环一磷酸腺苷(cAMP)反应元件结合蛋白(cREB)、磷酸化 CREB... 详细信息

目的探讨严重心理应激所致情感行为异常与认知功能受损的神经生物学机制。方法在大鼠捕食应激模型基础上,通过免疫组织化学与蛋白质免疫印迹检测,观测应激大鼠神经细胞核转录因子环一磷酸腺苷(cAMP)反应元件结合蛋白(cREB)、磷酸化 CREB(pCREB)与 CREB 结合蛋白(CBP)表达的分布特点与动态变化规律。结果免疫组化研究显示,捕食应激后12 h 应激大鼠脑组织 CREB 阳性免疫反应信号明显弱于对照组(对照组海马与额叶皮质分别为1.78±0.40和1.18±0.26,应激大鼠分别为0.55±0.13和0.88±0.20,P反应信号则明显高于对照组(P<0.01),而 pCREB表达亦以海马细胞增强得更明显(与额叶皮质相比,P<0.05)。海马组织免疫印迹检测进一步揭示捕食应激后1 h 应激大鼠海马 CREB 即较对照组明显下调(应激大鼠为2.82±0.65,对照组为11.86±2.47,P<0.01),24 h 仍显著低于对照组(应激大鼠为5.12±1.13,对照组为10.56±2.38,P<0.01);CBP 表达则同步明显增多(1、24 h 应激大鼠分别为1.77±0.39和2.44±0.55,对照组分别为1.06±0.24和0.86±0.20,P<0.01);而 pCREB 表达仅于1、12 h 显著增高(1、12 h 应激大鼠分别为2.56±0.59和1.93±0.41,对照组分别为1.04±0.22和0.96±0.21,P<0.01)。结论捕食应激后中枢神经系统,特别是选择性海马结构的 CREB 转录途径的改变,在短暂严重心理应激所致长时程情感行为异常与空间学习和记忆等认知功能受损中可能有重要意义。

关键词：应激反应元件环AMP

双剪接型2·2kb乙型肝炎病毒基因组剪接变异体编码蛋白可反式激活GAL4反应元件

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病毒学报 2006年第6期22卷 431-435页

作者：陈婉南郭丹华柏世玉王林林建银林旭福建医科大学分子医学研究中心福州350004

为研究双剪接型2.2kb乙型肝炎病毒(HBV)基因组剪接变异体特异性新蛋白—yTPds的功能,以酵母双杂交系统的诱饵质粒pGBKT7克隆yTPds基因并转化酵母细胞AH109获得相应重组子,滤纸法及液相分析法测酵母转化子内β-半乳糖苷酶(-βgal)的活性... 详细信息

为研究双剪接型2.2kb乙型肝炎病毒(HBV)基因组剪接变异体特异性新蛋白—yTPds的功能,以酵母双杂交系统的诱饵质粒pGBKT7克隆yTPds基因并转化酵母细胞AH109获得相应重组子,滤纸法及液相分析法测酵母转化子内β-半乳糖苷酶(-βgal)的活性,证实yTPds蛋白可反式激活酵母GAL4反应元件(GAL4 responsive ele-ment)。在此基础上,为进一步探讨该蛋白反式激活作用的功能区域,以pGBKT7分段克隆yTPds基因,分别编码yTPds蛋白N端47个氨基酸(yTPds-N47)、N端75个氨基酸(yTPds-N75)、中部28个氨基酸(yTPds-M28)、C端92个氨基酸(yTPds-C92)、C端64个氨基酸(yTPds-C64)以及去除中部28个氨基酸的融合蛋白(yTPds-Fusion)。各重组载体转化酵母细胞AH109获得相应转化子。滤纸法定性检测酵母转化子内-βgal活性,结果显示yTPds-N75、yTPds-M28、yTPds-C92蛋白可反式激活GAL4反应元件,液相分析法显示酵母转化子内-βgal活性强弱为yTPds-M28>yTPds-N75>yTPds-C92>yTPds,提示yTPds蛋白反式激活作用的功能区域是其中部28个氨基酸,该区域对应于HBV preS1蛋白反式激活功能域。此研究证实双剪接型2.2kb乙型肝炎病毒(HBV)基因组剪接变异体特异性新蛋白具有反式激活作用,提示其可能具有重要的致病意义。

关键词：乙型肝炎病毒 RNA剪接反式激活 GALA 反应元件

碘缺乏对大鼠仔鼠海马环磷酸腺苷反应元件结合蛋白表达的影响

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中华预防医学杂志 2010年第6期44卷 557-560页

作者：董静刘万洋王毅魏薇陈杰中国医科大学公共卫生学院沈阳110001

碘是合成甲状腺激素所必需的微量元素,人类生存环境缺碘可造成碘缺乏病（iodine deficient disorder,IDD）.母体甲状腺激素的缺乏可直接导致子代脑发育关键期甲状腺激素供应不足,致使子代生长发育,尤其是中枢神经系统的发育分化障碍。

关键词：碘缺乏病环磷酸腺苷蛋白表达反应元件甲状腺激素海马仔鼠大鼠

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内皮细胞基因的切应力反应元件

国外医学（分子生物学分册） 1999年第3期21卷 159-163页

作者：李黔宁第三军医大学新桥医院神经内科重庆400037

内皮细胞与血流直接接触,血流产生的血管壁切应力直接调节内皮细胞基因的表达,其调节机制就是通过切应力反应元件调节基因的转录。切应力反应元件有κB位点、TRE(AP-1)位点、Egr-1位点和Spl位点。相关的基因有:PDGF-B、(人、猫、鼠)、t... 详细信息

内皮细胞与血流直接接触,血流产生的血管壁切应力直接调节内皮细胞基因的表达,其调节机制就是通过切应力反应元件调节基因的转录。切应力反应元件有κB位点、TRE(AP-1)位点、Egr-1位点和Spl位点。相关的基因有:PDGF-B、(人、猫、鼠)、tPA(人、猫、鼠)、TGF-β1(人、鼠)、Endothelin-1(人)、ec-NOS(人)、c-fos(人)、ICAM-1(人)、MCP-1(人)、VCAM-1(人);PDGF-A(人);组织因子(人)。

关键词：内皮细胞基因表达切应力反应元件基因调控

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糖皮质激素受体及其反应元件

生命的化学 1997年第4期17卷 13-16页

作者：孙琳琳宋亮年第二军医大学病理生理学教研室

糖皮质激素受体及其反应元件孙琳琳宋亮年（第二军医大学病理生理学教研室，上海２００４３３）关键词糖皮质激素受体糖皮质激素反应元件糖皮质激素受体（ＧＲ）是核受体超家族中的重要成员，也是一种典型的激素依赖性转录调节因子，与... 详细信息

糖皮质激素受体及其反应元件孙琳琳宋亮年（第二军医大学病理生理学教研室，上海２００４３３）关键词糖皮质激素受体糖皮质激素反应元件糖皮质激素受体（ＧＲ）是核受体超家族中的重要成员，也是一种典型的激素依赖性转录调节因子，与激素结合后通过和靶基因中的糖皮质激...

关键词：糖皮质激素受体糖皮质激素反应元件病理化学

受缺氧反应元件调控的荧光素酶报告基因在缺氧肿瘤细胞内的表达活性研究

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肿瘤研究与临床 2007年第1期19卷 5-7,10页

作者：沈晓娣张萍应磊葛盛芳钱关祥上海交通大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 200025

目的研究缺氧反应元件调控的荧光素酶报告基因在肿瘤细胞内的缺氧反应性。方法将pGL3—6HRE—TATA—luciferase—SV40pa报告载体以Lipofectamine2000介导瞬时转染Helas3和HepG2细胞，分别于缺氧（1％O2）和常氧（21％O2）培养后检测相... 详细信息

目的研究缺氧反应元件调控的荧光素酶报告基因在肿瘤细胞内的缺氧反应性。方法将pGL3—6HRE—TATA—luciferase—SV40pa报告载体以Lipofectamine2000介导瞬时转染Helas3和HepG2细胞，分别于缺氧（1％O2）和常氧（21％O2）培养后检测相对荧光素酶活性。结果pGL3—6HRE—TATA—luciferase—SV40pa报告载体转染细胞后，缺氧培养条件下相对荧光素酶的活性较常氧培养条件下显著上调，差异具有统计学意义（P〈0．01），并且该缺氧诱导性具有一定的时间依赖性，即Helas3细胞中，缺氧培养12—24h，相对荧光素酶的活性上升到了最高值；而HepG2细胞中，缺氧培养36h，相对荧光素酶的活性上升到了最高值。结论6HRE人工启动子在肿瘤细胞内具有显著的缺氧诱导性；6HRE人工启动子缺氧诱导性具有一定的时间效应，并且在不同肿瘤细胞中其诱导效应和时间效应可存在着差异。研究结果为实体肿瘤基因治疗奠定了理论和实验基础。

关键词：细胞系肿瘤反应元件细胞低氧 pGL3-6HRE-TATA-luciferase—SV40pa

构建由缺氧反应元件修饰的hTERT核心启动子引导FCY1基因表达的复制缺陷型腺病毒

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第四军医大学学报 2002年第12期23卷 1061-1064页

作者：李立文王臻苏明权马越云于文彬杨旻李哲第四军医大学西京医院全军骨科研究所陕西西安710033 第四军医大学西京医院临床分子生物学研究室陕西西安710033

目的　构建由缺氧反应元件串联重复体修饰的人端粒酶逆转录酶 (h TERT)核心启动子引导酵母胞嘧啶脱氨酶FCY1基因表达的复制缺陷型重组腺病毒 .方法　人工设计缺氧反应元件串联重复序列 ,克隆后插入 h TERT启动子上游并经测序证实 .将修... 详细信息

目的　构建由缺氧反应元件串联重复体修饰的人端粒酶逆转录酶 (h TERT)核心启动子引导酵母胞嘧啶脱氨酶FCY1基因表达的复制缺陷型重组腺病毒 .方法　人工设计缺氧反应元件串联重复序列 ,克隆后插入 h TERT启动子上游并经测序证实 .将修饰后的 h TERT启动子和酵母胞嘧啶脱氨酶基因 FCY1插入穿梭质粒 ,与辅助质粒共转染 HEK2 93细胞 ,重组产生复制缺陷型腺病毒 .结果　获得了由 3倍和 6倍缺氧反应元件修饰的 h TERT核心启动子引导 FCY1基因表达的复制缺陷型重组腺病毒 .结论　基于 Cre重组酶 / lox P的腺病毒载体构建系统操作简便。

关键词：低氧反应元件转录靶向端粒末端转移酶腺病毒科遗传载体

在脑缺血过程中CREB和cAMP反应元件介导的基因表达

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天津医药 2007年第8期 625-625页

作者：徐兰举杨卓

环腺苷酸(cAMP)反应元件结合蛋白(CREB)是所有细胞生长、增值、分化、存活所必须的,在所有器官中均有表达。在脑中,CREB和cAMP反应元件(CRE)介导的信号系统参

关键词：脑缺血磷酸化 cAMP 脑血管疾病 CREB 反应元件介导基因表达