检索结果-南通市图书馆

生物化学与生物物理进展 2008年第8期35卷 867-874页

作者：刘大飞刘春国刘明刘大程中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001 莱阳市城厢兽医站莱阳265200

流感病毒亚型众多,且极易发生变异,给防控带来很大困难,所以当务之急应加强其在致病机理、传播机制等方面的研究和加快新型流感疫苗的开发.近年来,反向遗传学技术的发展为流感病毒基因功能研究和疫苗制备方面开辟了新思路.

关键词：流感病毒反向遗传学技术功能研究标记疫苗

反向遗传学技术在PRRSV基础与应用领域中的研究进展

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中国预防兽医学报 2021年第8期43卷 895-901页

作者：祝徐航胡灵子牟泓晔宋厚辉王晓杜浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江杭州311300 浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductiveand respiratory syndrome virus,PRRSV)是一种球形、带囊膜的病毒。其基因组为单股正链、不分节段的RNA,大小约为15 kb[1-3],包含10个开放阅读框。PRRSV主要造成妊娠母猪流产、死胎和仔猪... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductiveand respiratory syndrome virus,PRRSV)是一种球形、带囊膜的病毒。其基因组为单股正链、不分节段的RNA,大小约为15 kb[1-3],包含10个开放阅读框。PRRSV主要造成妊娠母猪流产、死胎和仔猪呼吸道疾病,高致病性PRRSV(HP-PRRSV)甚至能引起各日龄的猪发病。根据病毒基因组和GP5的抗原性差异,可将PRRSV分为PRRSV-I和PRRSV-II,我国常见的是以NADC30-like、 HP-PRRSV为代表的PRRSV-II[4]。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒妊娠母猪流产高致病性PRRSV 抗原性差异猪呼吸道疾病病毒基因组 GP5 反向遗传学技术

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反向遗传学技术在负链RNA病毒中的应用

黑龙江畜牧兽医 2010年第4期 45-47页

作者：刘文涛江禹李泽鸿吉林农业大学生命科学学院吉林长春130118 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062

反向遗传操作(又称感染性克隆)在DNA水平上研究RNA病毒的基因组结构及功能和病毒宿主相互作用提供了重要手段,纵观反向遗传学技术研究进展,讨论反向遗传学技术在部分负链RNA病毒研究中的应用,将会为RNA病毒的分子生物学研究提供有效的... 详细信息

反向遗传操作(又称感染性克隆)在DNA水平上研究RNA病毒的基因组结构及功能和病毒宿主相互作用提供了重要手段,纵观反向遗传学技术研究进展,讨论反向遗传学技术在部分负链RNA病毒研究中的应用,将会为RNA病毒的分子生物学研究提供有效的方法。

关键词：反向遗传学技术负链RNA病毒感染性克隆病毒拯救

反向遗传学技术应用于猪繁殖与呼吸综合征病毒研究的进展

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中国预防兽医学报 2019年第10期41卷 1072-1076页

作者：郑海红孙竹筠张可煜高飞韦祖樟中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 广西大学动物科学技术学院广西南宁530005

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinere productive and respiratory syndrome virus, PRRSV)属于动脉炎病毒科(Arteriviridae)、动脉炎病毒属(Arterivirus)成员。根据血清学和遗传特性的差异,可将PRRSV分为欧洲型(1型)和美洲型(2型)[1]。随着反向遗传操作系统的建立,使对RNA病毒基因组在其cDNA分子水平上进行体外人工操作成为可能,如对基因进行点突变、缺失、插入、颠换、转位和互补等改造。近年来,科学家通过对PRRSV基因组的反向遗传操作[2-6],在研究PRRSV的基因复制、亚基因组转录与表达调控机理、PRRSV与宿主间的相互作用关系以及PRRSV用于异源基因表达载体来开发抗病毒疫苗等研究,取得了一些显著成果。本文就应用反向遗传学技术来研究PRRSV的进展报告做一综述。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传操作系统动脉炎病毒属遗传特性反向遗传学技术美洲型 RNA病毒基因复制

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狂犬病毒反向遗传学技术的研究及应用进展

中国生物工程杂志 2009年第3期29卷 89-93页

作者：任林柱史利军吉林大学畜牧兽医学院长春130062 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

反向遗传学技术是上世纪90年代在分子病毒学研究领域兴起的新技术,通常也被称为"病毒拯救"。综述了应用反向遗传学技术"拯救"狂犬病毒的主要技术体系以及反向遗传学技术在狂犬病毒致病机理、狂犬病毒疫苗及载体研究中的应用进展。

关键词：反向遗传学技术狂犬病毒拯救重组病毒

应用反向遗传学技术在哺乳动物细胞中产生甲型流感病毒

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病毒学报 2002年第3期18卷 193-197页

作者：陈稚峰张立国董婕吴昆昱陈爱珺孙梅生黄银霞齐立张智清郭元吉中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052

在国内首次应用反向遗传学技术将多个质粒共转染哺乳动物细胞 ,得到了具有活性的甲型流感病毒。采用自行构建的含有 polⅠ和polⅡ启动子和终止子序列的pIVV2质粒 ,将A/PR/8/34(H1N1)流感病毒基因组全部 8个RNA节段的cDNA分别克隆到该质... 详细信息

在国内首次应用反向遗传学技术将多个质粒共转染哺乳动物细胞 ,得到了具有活性的甲型流感病毒。采用自行构建的含有 polⅠ和polⅡ启动子和终止子序列的pIVV2质粒 ,将A/PR/8/34(H1N1)流感病毒基因组全部 8个RNA节段的cDNA分别克隆到该质粒的两个启动子之间 ,得到了 8个可在真核细胞中复制和表达的质粒。将这 8个质粒共转染 2 93T细胞 ,培养 4 8h后吸取上清液 ,转接入MDCK细胞中 ,再经过 72h培养 ,发现在MDCK细胞中有明显的流感样细胞病变产生 ,测上清病毒血凝滴度为 1:10。将MDCK细胞冻融液继续接种鸡胚和MDCK细胞 ,培养后将鸡胚尿囊液和MDCK细胞冻融上清液进行血凝和血凝抑制实验 ,证明所得病毒为A/PR/8/34(H1N1)。

关键词：反向遗传学技术哺乳动物细胞甲型流感病毒质粒共转染

利用反向遗传学技术拯救重组H1N1 pdm09亚型流感病毒

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南京医科大学学报(自然科学版) 2024年

作者：黎燕周克茹季旻珺王桂芹南京医科大学病原生物学系中科南京生命健康高等研究院

目的：利用反向遗传学技术拯救重组H1N1 pdm09病毒，评价其在MDCK细胞和鸡胚内的生长特性以及对BALB/c小鼠的致病性。方法：RT-PCR技术扩增A/Puerto Rico/8/1934（简称PR8）病毒基因片段，并克隆至pHW2000双向表达载体上。全球共享流感... 详细信息

目的：利用反向遗传学技术拯救重组H1N1 pdm09病毒，评价其在MDCK细胞和鸡胚内的生长特性以及对BALB/c小鼠的致病性。方法：RT-PCR技术扩增A/Puerto Rico/8/1934（简称PR8）病毒基因片段，并克隆至pHW2000双向表达载体上。全球共享流感数据倡仪组织（global initiative of sharing all influenza data,GISAID）数据库中下载A/Wisconsin/588/2019(H1N1)的血凝素（hemagglutinin,HA）和神经氨酸酶（neuraminidase,NA）序列，将其HA非编码区替换为A/California/07/2009(H1N1)的HA非编码区。全基因合成A/Wisconsin/588/2019的HA和NA片段，分别克隆至pHW2000双向表达载体上。将PR8病毒6个内部基因重组质粒与A/Wisconsin/588/2019的HA和NA重组质粒共转染293T细胞与MDCK细胞，拯救重组病毒。对重组病毒进行血凝效价测定和RT-PCR鉴定以判断是否拯救成功。将重组病毒接种MDCK细胞和9～10日龄鸡胚，评价其生长特性并绘制生长曲线。将重组病毒以滴鼻方式感染BALB/c小鼠，记录小鼠体重变化和生存率以评价其致病性。结果：成功拯救出重组A/Wisconsin/588/2019病毒，血凝效价为1∶8，测序鉴定其HA和NA序列与预期一致，重组病毒接种MDCK细胞后72 h，大部分细胞完全脱落，病毒滴度为105.38TCID50/mL，复制高峰期为接种后60 h，接种鸡胚后的血凝效价最高可达1∶28。重组病毒（病毒稀释比为1∶1）滴鼻BALB/c小鼠后第8天，小鼠全部死亡，对小鼠的半数致死剂量为10-1.38/50μL。结论：成功拯救一株重组H1N1pdm09病毒，该病毒在MDCK细胞上生长良好且具有良好的鸡胚适应性，对小鼠具有致病性和致死性，为反向遗传学技术快速拯救流感病毒提供新思路。

关键词：季节性流感 H1N1 反向遗传学技术

反向遗传学技术在麻疹病毒属病毒中的研究进展

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西北民族大学学报（自然科学版） 2020年第1期41卷 21-26页

作者：石晓玲和伟程潘晓梅田永强柏家林兰州交通大学化学与生物工程学院甘肃兰州730070 西北民族大学生物医学研究中心生物工程与技术国家民委重点实验室甘肃兰州730030 西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730030

RNA病毒的反向遗传学是采用病毒的遗传材料(感染性克隆),在培养细胞或易感宿主中重新拯救出活病毒或类似病毒物质的过程.该技术在麻疹病毒属病毒中研究应用较多,尤以牛瘟病毒的研究开创了消灭麻疹病毒属病毒的先例,小反刍兽疫病毒和犬... 详细信息

RNA病毒的反向遗传学是采用病毒的遗传材料(感染性克隆),在培养细胞或易感宿主中重新拯救出活病毒或类似病毒物质的过程.该技术在麻疹病毒属病毒中研究应用较多,尤以牛瘟病毒的研究开创了消灭麻疹病毒属病毒的先例,小反刍兽疫病毒和犬瘟热病毒的研究与应用还在进一步完善中.本文综述了反向遗传学技术在麻疹病毒属病毒基因结构与功能、致病机制、感染性克隆构建及新型疫苗研制等方面的研究进展.

关键词：病毒拯救麻疹病毒属病毒反向遗传学技术感染性克隆构建