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PCR-反向点杂交法检测HBV基因型和耐药突变的应用研究

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PCR-反向点杂交法检测HBV基因型和耐药突变的应用研究

作者：劳诗欣广州中医药大学

学位级别：硕士

研究目的：对HBV基因型(国内最常见的B、C和D三种型别)及4种核苷(酸)类药物的耐药突变位点(野生型：rt180L、rt204M、rt207M、rt207V、rt181A、rt236N;突变型：rt180M、rt204V、rt204I、rt207I、rt181V、rt236T)进行检测,以了解HBV基因型别分布情况、HBV耐药突变情况、HBV患者或携带者耐药情况、HBV基因型别与HBV DNA载量的关系以及PCR-反向点杂交法检测HBV基因型和耐药突变的方法学性能。研究方法：采用PCR-反向点杂交法对2012年10月-2013年9月期间在我院门诊和住院的接受核苷(酸)类药物治疗的424例乙型肝炎患者或携带者进行HBV基因型和耐药突变位点检测,并随机抽取50例经PCR-反向点杂交法检测为阳性的标本进行DNA序列测定,以评价PCR-反向点杂交法检测HBV基因型和耐药突变的方法学性能。数据统计学分析采用SPSS19.0软件。研究结果：在424例乙肝患者或携带者中,检出基因型别364例,未检出基因型别60例,其中有5例未检出基因型别,但检出野生型位点。HBV B型250例(58.96%),HBVC型92例(21.07%),HBV D型1例(0.24%),HBVB/C混合型13例(3.07%),HBVB/D混合型8例(1.89%)。检出耐药突变位点的有76例,rt180M检出率21.30%,rt204V检出率24.07%,rt204I检出率33.33%,rt181V检出率11.11%,rt236T检出率8.33%。对核苷(酸)类药物的耐药情况,B型耐药的有37例,其耐药率为40.22%,C型耐药的有17例,其耐药率为18.48%;B/C混合型耐药9例,其耐药率为69.23%;B/D混合型耐药4例,其耐药率为80.00%,经x2检验B和C型两组病例的耐药情况(x2=9.694,P=0.0021,P0.05)。与DNA测序法比较,PCR-RDB法检测HBV基因型和耐药突变基因的敏感度、特异度和准确度为98.19%、100%、99.56%,阳性预测值为100%、阴性预测值为99.41%、阳性似然比为∞、阴性似然比为0.018,两种方法检测结果一致性极好(Kappa值为0.958),符合率为98.12%(109/111),差异无统计学意义(χ2=45.97,p=0.000)。研究结论：1、HBV感染以HBV B和HBV C型为主,同时存在一定比例的B/C、B/D混合型,耐药突变位点检出率从高到低依次为rt204I、rt204V、rt180M、rt181V、rt236T、rt207I。2、HBV B、C型对核苷(酸)类药物的耐药情况存在差异,前者高于后者。对二种药物联合耐药者发生率高,但三重耐药者不多。3、HBV B和C型患者HBV DNA载量无明显差异。4、PCR-反向点杂交法检测HBV基因型和耐药突变基因位点的敏感度、特异度和准确度都能满足临床检测要求,且操作简便,结果快速,适合临床实验室使用。

关键词：肝炎病毒乙型基因型耐药突变核苷(酸)类药物核酸扩增反向点杂交技术

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67例β-地中海贫血的基因分析与临床

中国小儿血液 2004年第5期9卷 201-203页

作者：曾毓华梁昌达饶兆英周红萍江西省儿童医院 330006

目的　了解β地中海贫血基因分析与临床的关系。方法　 6 7例病人根据临床表现 ,血红蛋白 (Hb)电泳、HbA2 、HbF含量测定为β地中海贫血 ,然后应用聚合酶链反应 (PCR)结合反向点杂交技术 (PDB)方法作基因分析。结果　 6 7例 β地贫... 详细信息

目的　了解β地中海贫血基因分析与临床的关系。方法　 6 7例病人根据临床表现 ,血红蛋白 (Hb)电泳、HbA2 、HbF含量测定为β地中海贫血 ,然后应用聚合酶链反应 (PCR)结合反向点杂交技术 (PDB)方法作基因分析。结果　 6 7例 β地贫共检出了 8种基因突变类型 ,1 5种基因组合形式。结论　不同的基因类型致临床表现不同 ,β°纯合子 1 6例 ,β°/ β°双重杂合子 36例 ,临床表现均严重 ,发病早 ( 2个月～ 6个月 ) ,肝、脾肿大明显 ,重度贫血 ,靠输血维持生命 ,幼儿期夭折。β+/ β°双重杂合子 1 5例 ,发病年龄较晚。

关键词： β-地中海贫血基因分析聚合酶链反应反向点杂交技术基因突变

100例β-地中海贫血患者产前基因诊断分析

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检验医学与临床 2009年第10期6卷 805-806页

作者：严菱唐宁柳州医学高等专科学校附属中等卫生学校广西柳州545002 广西壮族自治区柳州市妇幼保健院

目的应用基因诊断技术对携带β-地中海贫血基因的夫妇所孕胎儿进行β-地中海贫血产前诊断,避免重型地中海贫血患儿的出生。方法应用聚合酶链技术(PCR)结合反向点杂交技术(RDB),对羊水样本进行中国人常见的17种β-地中海贫血突变基因的... 详细信息

目的应用基因诊断技术对携带β-地中海贫血基因的夫妇所孕胎儿进行β-地中海贫血产前诊断,避免重型地中海贫血患儿的出生。方法应用聚合酶链技术(PCR)结合反向点杂交技术(RDB),对羊水样本进行中国人常见的17种β-地中海贫血突变基因的检测。结果在受检的100例羊水样本中,共检出正常基因33例、杂合子49例、纯合子或双重杂合子18例。结论运用RDB-PCR技术对β-地中海贫血进行产前基因诊断,是降低出生缺陷的好办法。

关键词： β-地中海贫血聚合酶链技术反向点杂交技术产前诊断

应用不同方法在新婚夫妇中进行地中海贫血筛查分析

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国际医药卫生导报 2005年第17期11卷 61-62页

作者：莫清萍姚倩瑜钟鸣叶庆娟东莞市计划生育服务中心广东东莞523079

目的了解本市新婚夫妇地中海贫血筛查情况。方法对7778例接受检查的新婚夫妇用平均红细胞体积测定法(MCV)、红细胞脆性一管定量法(一管法)进行地中海贫血筛查,对筛查阳性者应用聚合酶链反应(PCR)及反向点杂交技术(RDB)确诊检测。结果MC... 详细信息

目的了解本市新婚夫妇地中海贫血筛查情况。方法对7778例接受检查的新婚夫妇用平均红细胞体积测定法(MCV)、红细胞脆性一管定量法(一管法)进行地中海贫血筛查,对筛查阳性者应用聚合酶链反应(PCR)及反向点杂交技术(RDB)确诊检测。结果MCV法检出率16.8%(1308/7778),一管法检出率14.2%(1106/7778),进一步确诊的150例用PCR及RDB检测α、β地贫基因,阳性符合率为85.8%。结论使用MCV法、一管法两法串联试验,经PCR检测结果表明,串联试验符合率达85.8%,比并联试验符合率26.09%更具有较好的诊断价值。

关键词：地中海贫血婚前诊断红细胞指数 PCR 筛查分析新婚夫妇聚合酶链反应(PCR) 红细胞脆性一管定量法阳性符合率反向点杂交技术

曲靖市某医院女性患者人乳头瘤病毒检测及基因分型结果分析

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实用检验医师杂志 2019年第1期11卷 22-25页

作者：毛德超孙继芹陶娅琳冷丽包锐曲靖市第二人民医院检验科云南曲靖655000

目的了解本院女性患者人乳头瘤病毒(HPV)感染情况及HPV基因型分布情况,为临床诊治HPV感染提供依据。方法选取2016年1月1日—2018年11月30日在曲靖市第二人民医院进行HPV检测的20岁及以上女性患者作为研究对象,采用聚合酶链反应(PCR)-反... 详细信息

目的了解本院女性患者人乳头瘤病毒(HPV)感染情况及HPV基因型分布情况,为临床诊治HPV感染提供依据。方法选取2016年1月1日—2018年11月30日在曲靖市第二人民医院进行HPV检测的20岁及以上女性患者作为研究对象,采用聚合酶链反应(PCR)-反向点杂交技术定性检测HPV并进行基因分型。统计检测结果,分析HPV各年龄段感染率、人群分布以及基因型分布。结果共纳入3 221例受检者,486例患者感染HPV,感染率15.09%;其中408例感染高危型,感染率12.67%。HPV基因分型为16型的患者数量最多,为106例(占21.81%);73型最少,为1例(占0.20%)。体检人群的HPV感染率明显低于门诊和住院患者(10.12%比18.36%、16.25%,P0.05)。结论本院体检人群的HPV感染率最低;老年人群的HPV感染率最高;高危型HPV16型、52型、58型以及低危型HPV40型、44型是曲靖市女性HPV感染的主要基因分型。

关键词：曲靖市女性人乳头瘤病毒聚合酶链反应反向点杂交技术基因分型