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斑马鱼心肌肌钙蛋白TNNT2a基因反义rna探针的制备与鉴定

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基础医学与临床 2015年第8期35卷 1113-1115页

作者：刘文林湛威张燕刘海燕杨矗立刘强广东医学院附属医院内科学广东湛江524023 深圳市龙华新区人民医院妇科广东深圳518109

斑马鱼是一种新型的模式脊椎动物，其生长周期短，饲养成本低，幼体透明，近年来被广泛应用于心血管疾病的实验研究中。本实验旨在制作地高辛标记的斑马鱼心肌肌钙蛋白（danio rerio troponinTtype2a，TNNT2a）基因的反义rna探针，通过... 详细信息

斑马鱼是一种新型的模式脊椎动物，其生长周期短，饲养成本低，幼体透明，近年来被广泛应用于心血管疾病的实验研究中。本实验旨在制作地高辛标记的斑马鱼心肌肌钙蛋白（danio rerio troponinTtype2a，TNNT2a）基因的反义rna探针，通过斑马鱼整体原位杂交技术（Whole-mount in situhybridization，WISH）鉴定探针的灵敏度和特异性，为斑马鱼心血管疾病模型生化标志物的实验研究提供方法。

关键词：反义rna探针心肌肌钙蛋白斑马鱼 a基因鉴定心血管疾病模型制备实验研究

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非放射性反义rna探针的原位杂交技术探讨

河南医科大学学报 1996年第1期31卷 6-9页

作者：王一菱郑乃刚丁一吴景兰张晋平丰艳河南医科大学分子细胞生物学研究中心河南省临床检验中心长治医学院组织学胚胎学教研室

以自制的反义ＲＮＡ探针研究了非放射性标记原位杂交技术。结果表明：①以小柱装置（ｍｉｎｉｃｏｌｕｍｎ）提取质粒ＤＮＡ，方法快速、简便、且纯度好；②以线性化的质粒ＤＮＡ为模板进行体外转录，加Ｂｉｏ－１４－ＣＴＰ标记，需用... 详细信息

以自制的反义ＲＮＡ探针研究了非放射性标记原位杂交技术。结果表明：①以小柱装置（ｍｉｎｉｃｏｌｕｍｎ）提取质粒ＤＮＡ，方法快速、简便、且纯度好；②以线性化的质粒ＤＮＡ为模板进行体外转录，加Ｂｉｏ－１４－ＣＴＰ标记，需用ｐＨ８．０的转录缓冲液；③实验中需防止ＲＮａｓｅ污染，但也可应用ＲＮａｓｅ作为实验对照和减低背景；④杂交液中以不加硫酸葡聚糖为宜，杂交温度以４２℃为佳。

关键词：反义rna探针非放射性标记原位杂交

以反意义rna为探针的原位杂交组织化学方法

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生物化学与生物物理进展 1990年第4期17卷 314-317页

作者：马维骏杨胜利邹冈中国科学院上海药物研究所

原位杂交组织化学方法是在组织及细胞水平上研究基因表达及调控的重要方法之一。我们利用一个由体外转录产生的与小鼠阿黑促皮原(POMC)mrna顺序互补的反意义rna为探针,直接在大鼠垂体的组织切片上进行杂交反应。结果表明,杂交在反意义RN... 详细信息

原位杂交组织化学方法是在组织及细胞水平上研究基因表达及调控的重要方法之一。我们利用一个由体外转录产生的与小鼠阿黑促皮原(POMC)mrna顺序互补的反意义rna为探针,直接在大鼠垂体的组织切片上进行杂交反应。结果表明,杂交在反意义rna探针及POMC mrna之间进行,并形成稳定的杂交分子。放射自显影影像显示出垂体中POMC mrna的分布及相对含量。

关键词：原位杂交组织化学反义rna探针

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斑马鱼胚胎发育过程中Mef2c的表达

复旦学报（医学版） 2006年第1期33卷 89-91,F0002页

作者：刘学飞王跃祥蒋璆钱林溪高广文董永新钟涛宋后燕复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-分子医学教育部重点实验室上海200032 美国Vanderbilt大学医学院心血管研究室 tn37027

目的探讨Mef2c在斑马鱼胚胎骨骼肌和心肌中表达的时相变化。方法收集不同发育时期的AB野生型斑马鱼胚胎,采用整体原位杂交技术检测Mef2c在骨骼肌和心肌的转录情况。结果Mef2c在体节中的表达约在13hpf,而在心脏中的表达出现在13hpf以后,... 详细信息

目的探讨Mef2c在斑马鱼胚胎骨骼肌和心肌中表达的时相变化。方法收集不同发育时期的AB野生型斑马鱼胚胎,采用整体原位杂交技术检测Mef2c在骨骼肌和心肌的转录情况。结果Mef2c在体节中的表达约在13hpf,而在心脏中的表达出现在13hpf以后,与体节中的表达时间基本平行。另外,Mef2c在体节和心脏中的表达一直维持到48hpf。结论明确了Mef2c在斑马鱼胚胎骨骼肌和心肌发育的表达时相变化,为研究斑马鱼早期骨骼肌和心肌发育的调控机制提供了一定的理论基础。

关键词： Mef2c 斑马鱼反义rna探针整体原位杂交

整体原位杂交法研究斑马鱼(Danio rerio)胚胎发育过程中胸苷酸合成酶(TS)的表达

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海洋与湖沼 2011年第1期42卷 81-85页

作者：牛荣丽梁丽英华侨大学分子药物学研究所教育部分子药物工程中心厦门361021

收集不同发育时期的斑马鱼胚胎,制备DIG标记的TS反义rna探针,采用整体原位杂交方法研究胸苷酸合成酶(TS)基因在斑马鱼胚胎发育各期的时空表达状况。结果表明,在所取样的各个阶段,TS基因均有转录,但其部位不同,中囊胚过渡前后mrna显现的... 详细信息

收集不同发育时期的斑马鱼胚胎,制备DIG标记的TS反义rna探针,采用整体原位杂交方法研究胸苷酸合成酶(TS)基因在斑马鱼胚胎发育各期的时空表达状况。结果表明,在所取样的各个阶段,TS基因均有转录,但其部位不同,中囊胚过渡前后mrna显现的部位仅存在于受精卵的动物极,10hpf时存在于整个胚胎的外围,至24hpf后集中到头部及其躯干部。112hpf在心脏部位强表达,其余部位表达相对较弱。

关键词：胸苷酸合成酶(TS) 斑马鱼反义rna探针整体原位杂交

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小鼠内耳COCH基因的表达

中国耳鼻咽喉头颈外科 2005年第10期12卷 639-642页

作者：李洪涛刘兆华王锦玲第四军医大学西京医院耳鼻咽喉科陕西西安710032 第三军医大学大坪医院野战外科研究所耳鼻咽喉头颈外科重庆400042

目的观察小鼠内耳COCH基因的表达。方法体外转录合成地高辛标记的反义rna探针,内耳样本冰冻切片,进行原位杂交反应。结果发现除已报道的耳蜗螺旋韧带、壶腹嵴间质等内耳组织外,COCH基因在内淋巴囊周围间质成纤维细胞亦表达阳性,其mrna水... 详细信息

目的观察小鼠内耳COCH基因的表达。方法体外转录合成地高辛标记的反义rna探针,内耳样本冰冻切片,进行原位杂交反应。结果发现除已报道的耳蜗螺旋韧带、壶腹嵴间质等内耳组织外,COCH基因在内淋巴囊周围间质成纤维细胞亦表达阳性,其mrna水平(原位杂交染色平均积分光密度0.68±0.25)与耳蜗螺旋韧带(0.77±0.19)相似,强于壶腹嵴间质(0.47±0.21)。结论COCH基因在小鼠内淋巴囊周围间质细胞高表达,为COCH基因内耳功能的后续研究及其与梅尼埃病关系的探究提供了线索。

关键词：小鼠内淋巴囊原位杂交梅尼埃病 COCH基因内耳组织间质成纤维细胞反义rna探针原位杂交反应原位杂交染色