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南开大学学报（自然科学版） 1991年第3期5卷 33-40页

作者：宗建超任中原南开大学天津天津医科大学天津

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乙肝病毒反义dna的合成

高技术通讯 1995年第12期5卷 38-42页

作者：陈常庆陈波徐金旺吴祥甫何丽芳袁正宏闻玉梅中国科学院上海生物工程研究中心中国科学院上海生物化学研究所上海第一医科大学微生物教研室

为了深入研究反义ＤＮＡ对乙肝病毒的抑制作用，设计合成了针对乙肝病毒基因不同功能区域的反义片段２０个，无关序列４个，长度为１５聚到１８聚，分为无修饰反义ＤＮＡ、反义ＤＮＡ－多聚赖氨酸共价连接物、部分硫代和全硫代反义ＤＮ... 详细信息

为了深入研究反义ＤＮＡ对乙肝病毒的抑制作用，设计合成了针对乙肝病毒基因不同功能区域的反义片段２０个，无关序列４个，长度为１５聚到１８聚，分为无修饰反义ＤＮＡ、反义ＤＮＡ－多聚赖氨酸共价连接物、部分硫代和全硫代反义ＤＮＡ四种。合成反应是在ＡＢＩ３８１型ＤＮＡ合成仪上以１μｍｏｌ或１０μｍｏｌ的规模进行的，但在计算机程序上作了一些修改以适应于部分硫代和全硫代ＤＮＡ合成。抑制实验的结果说明，所有合成的反义ＤＮＡ均对乙肝病毒有不同程度的抑制作用，互补于乙肝病毒ＰｒｅＳ＿２翻译起始区的反义１５聚－多聚赖氨酸表现出很强的抑制活性。针对核心蛋白翻译起始区的反义ＤＮＡ和针对聚合酶翻译起始区下游的反义ＤＮＡ也均表现出好的抑制活性。

关键词：反义dna 乙肝病毒 dna 合成

反义dna技术研究进展及其在动物学研究中的应用

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中国比较医学杂志 2003年第1期13卷 58-61页

作者：王凌燕杨晓运中国科学院上海生命科学研究院生物工程中心上海200233

随着人类基因组计划的迅速推进 ,越来越多的基因被测序 ,对新基因功能的确定变得更为迫切。反义dna技术由于它在多种生物体中的高效性、抑制基因表达的可逆性、相对的低成本和在疾病治疗上的潜力 ,在基因功能的研究中已受到了广泛的关... 详细信息

随着人类基因组计划的迅速推进 ,越来越多的基因被测序 ,对新基因功能的确定变得更为迫切。反义dna技术由于它在多种生物体中的高效性、抑制基因表达的可逆性、相对的低成本和在疾病治疗上的潜力 ,在基因功能的研究中已受到了广泛的关注。在这篇文章里 ,作者总结了反义dna技术的进展及其在动物学研究中的应用。

关键词：反义dna技术动物学基因反义寡聚脱氧核酸反义dna

反义dna和RNA：治疗病毒感染的新策略（下）

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传染病网络动态 2007年第3期 30-32页

作者： Ji Yuan 刘旭华（编译）郑素军（审校）

2．2siRNA的化学修饰siRNA的基因沉默效率还依赖于它的稳定性。未修饰的双链RNA比单链RNA更稳定，使用化学修饰的碱基合成siENA可进一步提高其稳定性和延长其抑制效应。广泛使用的化学修饰通常为核糖的2’位置，包括2’-O-甲基核糖、2’... 详细信息

2．2siRNA的化学修饰siRNA的基因沉默效率还依赖于它的稳定性。未修饰的双链RNA比单链RNA更稳定，使用化学修饰的碱基合成siENA可进一步提高其稳定性和延长其抑制效应。广泛使用的化学修饰通常为核糖的2’位置，包括2’-O-甲基核糖、2’-O-丙烯基核糖、2’-脱氧尿苷、2’-氟2’脱氧尿苷、2’-氟2’-脱氧胞苷酸等。同义和／或反义链2’核糖位置完全替代的的siRNA分子不能诱导RNAi，然而3’突出部分或碱基配对部位的2’核糖修饰增强其在血浆中的稳定性同时不丧失活性。另一个常被修饰的是主链部分。有几项研究提示具有磷硫酰主链的siRNAs活性增强，但随修饰程度的增加活性反而下降。主链修饰还可将磷酸二酯键中的非共价氧被等电子的甲硼烷替代，这种甲硼磷酸化修饰的siRNAs比天然siRNAs更有效，与硫代修饰siRNAs相比抵抗核酶降解能力更强而毒性更低。有研究表明恰当化学修饰的siRNAs稳定性好、能与靶位更有效结合，改善其药代动力学特性的同时却不影响其内在效能。

关键词： siRNAs 反义dna 病毒感染磷酸化修饰化学修饰脱氧尿苷治疗碱基配对

反义dna和RNA：治疗病毒感染的新策略（上）

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传染病网络动态 2007年第1期 35-38页

作者： Ji Yuan 刘旭华（编译）郑素军（审校）

基于核酸的基因沉默分子是长度在20个碱基左右的人工合成的单链或双链dna或RNA。这些分子包括反义寡脱氧核苷酸（AODN）、核酶、脱氧核糖核酸酶和最近比较热门的小干扰RNA（siRNA）。这些基因沉默分子以序列特异性方式靶向细胞或病毒tu... 详细信息

基于核酸的基因沉默分子是长度在20个碱基左右的人工合成的单链或双链dna或RNA。这些分子包括反义寡脱氧核苷酸（AODN）、核酶、脱氧核糖核酸酶和最近比较热门的小干扰RNA（siRNA）。这些基因沉默分子以序列特异性方式靶向细胞或病毒tuRNA，将其断裂和／或阻断其转录和翻译起始，因此成为基因功能分析和药物开发的强有力工具。截至目前为止已经有二十多项基因沉默技术在肿瘤、艾滋病、肝炎、心血管疾病、血液系统疾病的Ⅰ至Ⅲ期临床试验中得到验证。

关键词：病毒感染 RNA 反义dna 脱氧核糖核酸酶基因沉默技术反义寡脱氧核苷酸治疗基因功能分析

反义dna和RNA：治疗病毒感染的新策略（中）

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传染病网络动态 2007年第2期 25-27页

作者： Ji Yuan 刘旭华（编译）郑素军（审校）

1．5转运与组织靶向性哺乳动物细胞对核酸类药物的摄取率较低，通常会通过附加载体或进行某种化学修饰以促进其进入细胞内。例如，许多反义复合物采用阳离子脂质体作为载体，通过网格蛋白介导的内吞作用进入细胞后，遇到带负电荷的磷... 详细信息

1．5转运与组织靶向性哺乳动物细胞对核酸类药物的摄取率较低，通常会通过附加载体或进行某种化学修饰以促进其进入细胞内。例如，许多反义复合物采用阳离子脂质体作为载体，通过网格蛋白介导的内吞作用进入细胞后，遇到带负电荷的磷脂酰丝氨酸（PS）脂质会释放出来。带正电荷的脂质体不仅能将带负电荷的AODNs包裹住更有利于其透过细胞膜。人们也发明了多种不同的脂质载体，如PH敏感的促溶脂质体，在内涵体酸性环境下会选择性释放其内容物，商品化的转染剂也可以使用，但是这些载体基本都是在培养的细胞上具有良好的转运功能，运用到体内时，在足够数量的有效成份到达靶器官前可能就有大部成被血液循环清除掉。而脂质体包含PS会介导AODN进入细胞内再释放，肝脏吞噬细胞是唯一可能的清除途径，PS悬挂于凋亡细胞的外膜，显示出在正常状态下正行使它的清除功能。

关键词：反义dna 病毒感染阳离子脂质体 RNA 治疗哺乳动物细胞磷脂酰丝氨酸转运功能

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反义dna靶向乙酰胆碱酯酶治疗重症肌无力

基础医学与临床 2007年第10期27卷 1155-1155页

Hadassah大学医院的***博士及其同事于8月14日的《神经病学》（Neurology，2007；69：629-630，699-700-）上报道，在以色列和法国进行的一项1b期试验，重症肌无力患者口服EN101-一种抗乙酰胆碱酯酶的反义寡核苷酸治疗，似乎被良好耐受... 详细信息

Hadassah大学医院的***博士及其同事于8月14日的《神经病学》（Neurology，2007；69：629-630，699-700-）上报道，在以色列和法国进行的一项1b期试验，重症肌无力患者口服EN101-一种抗乙酰胆碱酯酶的反义寡核苷酸治疗，似乎被良好耐受，并且可改善症状。

关键词：抗乙酰胆碱酯酶重症肌无力反义dna 治疗靶向《神经病学》反义寡核苷酸大学医院

正反义人dna(5-胞嘧啶)甲基转移酶基因片段真核表达载体的构建

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癌症 2001年第11期20卷 1325-1326页

作者：张宏肖文华梁后杰第三军医大学附属西南医院肿瘤科重庆400038 中国人民解放军第304医院肿瘤科北京100037

dna(5-胞嘧啶)甲基转移酶[dna (Cytosine-5)-methyltransferase,DNMT]以组织特异的方式识别、催化和调节半甲基化的dna子链胞嘧啶残基,并维持dna甲基化模式[1].异常的dna甲基化方式与人的某些肿瘤和发育异常有关[2～6].为探讨反义dna片... 详细信息

dna(5-胞嘧啶)甲基转移酶[dna (Cytosine-5)-methyltransferase,DNMT]以组织特异的方式识别、催化和调节半甲基化的dna子链胞嘧啶残基,并维持dna甲基化模式[1].异常的dna甲基化方式与人的某些肿瘤和发育异常有关[2～6].为探讨反义dna片段对肝癌细胞株的阻抑作用,并阐明与恶性表型有关的癌相关基因转录和dna甲基化水平的关系,我们采用PCR克隆技术进行构建DNMT正、反义基因片段真核表达载体的研究,现介绍如下.

关键词：人dna(5-胞嘧啶)甲基转移酶真核表达载体反义dna

人dna MTase反义基因转染诱导E-钙黏附蛋白高表达

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中华肿瘤杂志 2002年第5期24卷 444-447页

作者：张宏肖文华梁后杰房殿春杨仕明罗元辉第三军医大学附属西南医院肿瘤科第三军医大学附属西南医院消化科重庆400038

目的　观察人dnaMTase反义基因转染后肝癌细胞系SMMC 772 1E 钙黏附蛋白表达的变化。方法　用基因重组技术构建包含人dnaMTase正、反义基因片段的真核表达载体 ;采用脂质体法将其转染入肝癌细胞系SMMC 772 1;采用RT PCR法观察dnaMTase基... 详细信息

目的　观察人dnaMTase反义基因转染后肝癌细胞系SMMC 772 1E 钙黏附蛋白表达的变化。方法　用基因重组技术构建包含人dnaMTase正、反义基因片段的真核表达载体 ;采用脂质体法将其转染入肝癌细胞系SMMC 772 1;采用RT PCR法观察dnaMTase基因mRNA、E 钙黏附蛋白基因mRNA表达变化 ;以甲基化特异的PCR法检测E 钙黏附蛋白基因启动子区域甲基化状态的改变 ;以免疫组化和流式细胞法检测E 钙黏附蛋白表达变化。结果　正、反义真核表达载体构建成功并转染入SMMC 772 1细胞 ,其中dnaMTase基因mRNA表达减低 ,E 钙黏附蛋白基因mRNA表达上调 ,E 钙黏附蛋白基因启动子区域呈现去甲基化状态 ,E 钙黏附蛋白表达上调。结论　抑制dnaMTase基因的表达可使肝癌SMMC 772 1细胞中E 钙黏附蛋白基因启动子区域去甲基化和表达增加 ;dnaMTase通过诱导启动子区域高甲基化 ,可使E

关键词：肝细胞癌反义dna 甲基转移酶 E-钙黏附蛋白基因转染 RT-PCR

人dna MTase反义基因转染对诱导肝癌SMMC7-721细胞凋亡的影响

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第三军医大学学报 2002年第11期24卷 1270-1272页

作者：张宏肖文华梁后杰房殿春杨仕明罗元辉第三军医大学附属西南医院肿瘤血液科重庆400038 解放军第304医院肿瘤科北京100037 第三军医大学附属西南医院全军消化专科中心重庆400038

目的　观察人dnaMTase反义基因转染对肝癌细胞系SMMC 772 1凋亡的影响。方法　采用脂质体法将构建的包含正、反义dnaMTase基因片段的真核表达载体转染入肝癌细胞系SMMC 772 1;采用MTT法绘制生长曲线 ;流式细胞法和原位末端标记法检测细... 详细信息

目的　观察人dnaMTase反义基因转染对肝癌细胞系SMMC 772 1凋亡的影响。方法　采用脂质体法将构建的包含正、反义dnaMTase基因片段的真核表达载体转染入肝癌细胞系SMMC 772 1;采用MTT法绘制生长曲线 ;流式细胞法和原位末端标记法检测细胞凋亡改变。结果　PCR法扩增外源性NeoR基因证实用脂质体法成功将重组载体转染入细胞 ;生长曲线显示转染反义dnaMTase基因片段的SMMC 772 1细胞增殖速度减慢 ;流式细胞法测得其凋亡率由 3 1%增加到 13 5 %。末端标记法也显示其凋亡指数增加。结论　人dnaMTase反义基因转染可诱导肝癌细胞系SMMC 772 1凋亡。

关键词： dna甲基转移酶反义dna 肝癌细胞系细胞凋亡肝癌 SMMC-7721