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pH值对端粒酶基因反义核苷酸促进ADM、DDP抑制人肝癌细胞BEL-7404增殖的影响

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安徽医科大学学报 2003年第5期38卷 342-344页

作者：吴成荣范平生马钢医院干部病房安徽马鞍山243000 安徽省立医院分院肿瘤科合肥230031

目的　观察不同 pH值对人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因反义寡核苷酸 (ASODN )促进盐酸阿霉素(ADM)、顺铂 (DDP)抑制人肝癌细胞增殖作用的影响。方法　 96孔培养板上进行增殖抑制实验 ,用不同pH值的RP MI 16 4 0培养液的BEL 74 0 4细胞... 详细信息

目的　观察不同 pH值对人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因反义寡核苷酸 (ASODN )促进盐酸阿霉素(ADM)、顺铂 (DDP)抑制人肝癌细胞增殖作用的影响。方法　 96孔培养板上进行增殖抑制实验 ,用不同pH值的RP MI 16 4 0培养液的BEL 74 0 4细胞悬液接种于 96孔细胞培养板 ,第 1天加端粒酶基因的反义寡核酸 5 μmol/L ,2 4、4 8h后再分别加入 2 5 μmol/L ,2 4h分别加入DDP、ADM5 μmol/L。各 pH值下分设hTERT基因的ASODN对照组、DDP组、hTERT基因的ASODN +DDP组、ADM组、hTERT基因的ASODN +ADM组、BEL 74 0 4细胞对照组 ,每组各设 8个复孔 ,置 37℃恒温箱培养 4dMTT法测定结果。结果　在培养液pH 6 8时 ,hTERT基因的ASODN能提高DDP和ADM对肿瘤细胞增殖抑制作用 ,在 pH 7 3培养液时 ,hTERT基因的ASODN更能提高DDP和ADM对肿瘤细胞增殖抑制作用更强。结论　在体外 ,pH值对hTERT基因的ASODN促进ADM、DDP抑制BEL 74 0 4细胞增殖有一定的影响 ,hTERT基因的ASODN促进ADM、DDP抑制BEL 74 0 4细胞的作用需有培养液的最适

关键词：端粒酶 pH值反义核苷酸 ADM DDP 肝癌细胞增殖阿霉素顺铂

声振脂质微泡作为反义寡核苷酸传递系统的研究

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药学学报 2006年第9期41卷 899-904页

作者：赵应征罗渝昆唐杰梅兴国张彦林倩北京军区总医院药理科北京100700 解放军总医院超声科北京100853 军事医学科学院毒物药物研究所北京100850

目的研究声振脂质微泡(PGM)作为反义寡核苷酸传递系统的可行性。方法应用PGM将结合荧光蛋白的反义核苷酸片段ZL转染到乳腺癌细胞SK-BR-3中,考察不同因素如:ZL浓度、PGM浓度、超声持续时间和机械指数(M I)等对ZL转染率及细胞存活率的影... 详细信息

目的研究声振脂质微泡(PGM)作为反义寡核苷酸传递系统的可行性。方法应用PGM将结合荧光蛋白的反义核苷酸片段ZL转染到乳腺癌细胞SK-BR-3中,考察不同因素如:ZL浓度、PGM浓度、超声持续时间和机械指数(M I)等对ZL转染率及细胞存活率的影响。考察PGM的结果,并与其他脂质载体如lipofectam ine和脂质体的转染效果比较。应用荧光显微镜观察转染率,碘化丙锭(PI)染色观察细胞存活率。结果考察因素中,PGM浓度,超声持续时间和M I对ZL转染率和细胞存活率影响较大。最佳超声条件为:PGM浓度为2%,超声持续时间为30 s和M I为1.0,在此条件下转染率为78%±10%,比未超声的PGM(4.0%)和lipofectam ine(4.3%)的转染率增加了约18倍,而细胞存活率相近。结论在适宜条件下,声振脂质微泡可以有效促进体外反义核苷酸的转染。

关键词：超声微泡反义核苷酸基因转染

环氧合酶-2反义寡核苷酸对宫颈癌Hela细胞周期的影响

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中国实用妇科与产科杂志 2008年第1期24卷 60-61页

作者：李淞漪帅茨霞金华市中心医院妇产科浙江金华321000 温州医学院附属一院妇产科浙江温州325000

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)反义寡核苷酸抑制Hela细胞增殖的机制及其临床意义。方法2004年5月至2005年5月在温州医学院附属一院将Hela细胞用MEM培养基培养,像差倒置显微镜下观察细胞的增殖情况。Hela细胞分4组培养:正常对照组、反义寡... 详细信息

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)反义寡核苷酸抑制Hela细胞增殖的机制及其临床意义。方法2004年5月至2005年5月在温州医学院附属一院将Hela细胞用MEM培养基培养,像差倒置显微镜下观察细胞的增殖情况。Hela细胞分4组培养:正常对照组、反义寡核苷酸(ASODNS)转染组、正义寡核苷酸(SODNS)转染组、脂质体处理组。细胞转染后48h,采用流式细胞仪检测各组细胞周期的变化。结果反义寡核苷酸转染组细胞的增殖受到了显著抑制,ASODNS处理的细胞与其它组比较,G2/M期细胞[(10.75±0.24)%]所占比例增高明显(P<0.05),S期细胞[(10.13±0.04)%]比例明显减少,差异有显著性意义(P<0.05),而G0/G1期[(79.12±0.06)%]无统计学意义的改变。结论ASODNS对Hela细胞的增殖具有抑制作用,其抑制机制可能与引起细胞周期再分布,降低S期细胞比例及阻滞细胞G2/M期有关。

关键词：宫颈肿瘤环氧合酶-2 反义核苷酸细胞周期

特异性反义寡核苷酸抗小鼠呼吸道合胞病毒感染的研究

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第三军医大学学报 2007年第2期29卷 112-116页

作者：周娟崔玉霞杨锡强王莉佳蒋利萍重庆医科大学儿童医院免疫研究室重庆400014

目的比较研究特异性抑制呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvirus,RSV)的反义核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,AS-ODN)和利巴韦林对RSV感染小鼠的治疗作用,寻求安全有效的抗RSV药物。方法特异性AS-ODN和利巴韦林滴鼻治疗RSV感染BALB/c鼠,空斑形成实验检测肺组织病毒滴度,RT-PCR和免疫组织化学分析RSVmRNA和蛋白表达水平,支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞计数、肺组织病理学检查了解气道炎症和治疗副作用。结果0.2、0·4mgAS-ODN和0.8mg利巴韦林能降低RSV感染小鼠肺组织病毒滴度,空斑抑制率分别为34.48%、46.75%和23.02%,与感染对照组比较差异显著(P0.05)。单独AS-ODN和利巴韦林滴鼻不会引发明显肺炎症病理损害。结论AS-ODN在小鼠体内有比利巴韦林更强的抗RSV作用,经滴鼻治疗没有明显毒副作用,是安全而有效的抗RSV制剂。

关键词：呼吸道合胞病毒反义核苷酸利巴韦林治疗

MCL-1反义寡核苷酸转染恶性黑素瘤细胞的光镜和电镜观察

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中国皮肤性病学杂志 2007年第10期21卷 577-579+600页

作者：权锦花高明阳大连医科大学第一临床医院皮肤科大连医科大学第一临床医院皮肤科辽宁大连116011 辽宁大连116011现在沈阳市第七人民医院辽宁沈阳110001

目的通过转染MCL-1反义寡核苷酸观察转染后细胞形态的变化,以研究MCL-1基因的功能。方法采用阳离子脂质体转染MCL-1反义寡核苷酸,以特异性阻断MCL-1表达。用光镜观察转染前后细胞显微结构变化及免疫细胞化学染色结果;以电镜观察转染前... 详细信息

目的通过转染MCL-1反义寡核苷酸观察转染后细胞形态的变化,以研究MCL-1基因的功能。方法采用阳离子脂质体转染MCL-1反义寡核苷酸,以特异性阻断MCL-1表达。用光镜观察转染前后细胞显微结构变化及免疫细胞化学染色结果;以电镜观察转染前后细胞微观形态的变化。实验中设立正义序列寡核苷酸和无义序列寡核苷酸作为对照寡核苷酸。结果光镜下可见到转染后细胞变圆,胞内出现空泡。免疫组化结果显示细胞内阳性染色明显减少。电镜观察显示转染后细胞内出现空泡,细胞膜突起消失及出现凋亡细胞。结论MCL-1基因对恶性黑素瘤细胞形态有很大的影响。本研究为阐明MCL-1基因的功能提供了较好的形态学证据。

关键词： MCL-1基因反义核苷酸恶性黑素瘤细胞形态学

转染血管紧张素受体Ⅱ(AT_l)反义核苷酸对血管平滑肌细胞增殖的影响

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高血压杂志 2000年第3期8卷 256-258页

作者：杨永健祝善俊祝之明胡厚祥丁钢钟键第三军医大学新桥医院心内科第三军医大学大坪医院高血压中心重庆400037

目的 :评价转染 ATl 反义核菩酸 (ATl A)对血管平滑肌细胞(VSMCs)血管紧张 (Ang )受体亚型 m RNA表达、蛋白激酶 C(PKC)、丝裂素活化蛋白激酶 P38(P38MAPK)蛋白表达 ,及蛋白核酸合成的作用。方法 :RT- PCR克隆 ATl c DNA序列 (476 bp... 详细信息

目的 :评价转染 ATl 反义核菩酸 (ATl A)对血管平滑肌细胞(VSMCs)血管紧张 (Ang )受体亚型 m RNA表达、蛋白激酶 C(PKC)、丝裂素活化蛋白激酶 P38(P38MAPK)蛋白表达 ,及蛋白核酸合成的作用。方法 :RT- PCR克隆 ATl c DNA序列 (476 bp) ,将克隆的 ATlc DNA反向插入 Pc DNA3.1 ,构建一完整的含 ATl A的质粒(PATl A) ,测序鉴定。转染培养的大鼠 VSMCs,RT- PCR检测转染 VSMCs AT1 m RNA表达。Ang (1 0 - 7mol/ L)剌激 2 4h后 ,比较转染与非转染的 VSMCs AT1 与 AT2 m RNA表达(RT- PCR)、P38MAPK和 PKC蛋白表达 (免疫印迹 ,westernblot)、蛋白核酸合成 (3H- L eucine及 3H- Thym idine掺入 )。结果 :成功构建 PATl A。RT- PCR显示转染 VSMCs ATlm RNA表达量显著减少 ,与对照 VSMC相比差异显著 (P0 .0 5 )。结论 :经 ATl A封闭后 ,能显著抑制 VSMC ATl m RNA表达 ,同时上调 AT2 m RNA。单纯封闭 ATlm RNA并不能有效阻断Ang 介导的 VSMCs蛋白核酸合成及 VSMCs生长相关的信号转导 ,

关键词：血管紧张素Ⅱ 受体反义核苷酸增殖高血压

反义寡核苷酸抗癌药Oblimersen钠盐

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药学进展 2009年第10期33卷 475-477页

传统的癌症治疗手段包括手术治疗和放化疗,但因放化疗为全身性作用,副作用较大,其应用受到限制.近年来,人们致力于研究与开发特异性靶向肿瘤而不伤及健康细胞的新型抗癌疗法,反义疗法便是其中之一.

关键词： oblimersen 反义核苷酸 bcl-2 抗癌活性

Survivin反义寡核苷酸对人肝癌细胞的抑制作用

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中国普通外科杂志 2007年第7期16卷 646-649页

作者：张鸽文汤恢焕王志明冯超魏伟中南大学湘雅医院普通外科湖南长沙410008 中南大学湘雅三医院普通外科湖南长沙410013

目的探讨survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人肝癌细胞HepG2的抑制作用。方法采用免疫组织化学法检测肝细胞癌(HCC)组织中survivin的表达。采用脂质体介导survivin ASODN体外转染人肝癌细胞株HepG2,Western blot检测细胞survivin蛋白的表达... 详细信息

目的探讨survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人肝癌细胞HepG2的抑制作用。方法采用免疫组织化学法检测肝细胞癌(HCC)组织中survivin的表达。采用脂质体介导survivin ASODN体外转染人肝癌细胞株HepG2,Western blot检测细胞survivin蛋白的表达,FCM检测细胞的凋亡率,观察细胞在软琼脂中的集落形成能力。建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察survivin ASODN的体内抑癌作用。结果(1)肝癌组织中survivin表达阳性率为75.8%(25/33),明显高于癌旁组织和正常肝组织(P<0.01);(2)survivin ASODN体外转染可明显下调HepG2细胞survivin蛋白表达,ASODN组HepG2细胞凋亡率明显高于空白对照组和SODN组(P<0.01),ASODN组HepG2细胞在软琼脂中形成的集落数目明显少于空白对照组和SODN组(P<0.01);(3)ASODN组瘤体生长速度较空白对照组和SODN组明显减慢(P<0.01),ASODN组瘤体重量较空白对照组和SODN组明显减轻(P<0.05)。结论Survivin在HCC组织中高表达;survivin ASODN可以诱导HepG2细胞凋亡,在体外实验和动物实验中对HepG2细胞生长都有抑制作用。

关键词：肝肿瘤,实验性蛋白survivin 反义核苷酸基因疗法

反义DcR3寡核苷酸协同顺铂诱导胶质瘤细胞凋亡

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中华实验外科杂志 2009年第2期26卷 211-213页

作者：宋小兵袁先厚江普查马超付锴武汉大学中南医院神经外科 430071

目的观察陷阱受体3（DcR3）反义核苷酸（ASODN）与顺铂对胶质瘤细胞的影响。方法设计DcR3反义核苷酸，转染U251细胞，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、Westernblot方法观察DcR3mRNA和蛋白有无降低，用噻唑蓝（MIT）比色法、荧光显微镜D... 详细信息

目的观察陷阱受体3（DcR3）反义核苷酸（ASODN）与顺铂对胶质瘤细胞的影响。方法设计DcR3反义核苷酸，转染U251细胞，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、Westernblot方法观察DcR3mRNA和蛋白有无降低，用噻唑蓝（MIT）比色法、荧光显微镜DAPI染色分别检测对照组、顺铂组、反义核苷酸组、协同作用组对胶质瘤细胞15251的影响。结果反义DcR3寡核苷酸组可有效地降低DcR3mRNA和蛋白表达，DcR3／β-actin比值分别为（12．4±3．1）％和（13．5±4．2）％，错义链组、脂质体组、对照组mRNA和蛋白分别为（68．8±4．5）％、（74．5±5．0）％、（71．3±6．4）％和（78．2±6．8）％、（79．8±4．5）％、（76．4±5．6）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。顺铂与反义寡核苷酸组细胞凋亡率分别为（18．32±2．32）％和（20．43±3．45）％，较对照组（5．21±O．45）％，差异有统计学意义（P〈0．05），两者与协同处理组（45．23±6．78）％比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DcR3反义核苷酸与顺铂协同作用可有较强的促胶质瘤细胞凋亡作用。

关键词：反义核苷酸胶质瘤脱噬作用顺铂