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广东海洋大学学报 2020年第6期40卷 9-15页

作者：黎楚怡熊新威杜晓东广东海洋大学水产学院广东省珍珠养殖与加工工程技术研究中心广东湛江524088

【目的】优化马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)双链rna干扰实验的条件。【方法】注射不同次数的干扰探针进行不同时间的干扰,通过实时荧光定量检测Pif基因的表达;通过扫描电子显微镜观察贝壳珍珠层内表面新生层的生长并分析不同... 详细信息

【目的】优化马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)双链rna干扰实验的条件。【方法】注射不同次数的干扰探针进行不同时间的干扰,通过实时荧光定量检测Pif基因的表达;通过扫描电子显微镜观察贝壳珍珠层内表面新生层的生长并分析不同组别贝壳的生长情况。【结果】注射60μg探针1次时,实验组Pif基因在外套膜套膜区相对表达量显著低于对照组,且实验组Pif基因6 d的相对表达量显著低于4 d;注射60μg探针2次时,8d Pif基因在外套膜套膜区的相对表达量显著低于对照组。扫描电子显微镜观察结果表明,所有实验组贝壳珍珠层均出现无序生长;与实验组4 d和8 d相比,6 d时新生珍珠层新生层边界完全被破坏,并且出现更多散乱的细小晶体。【结论】注射60μg双链rna探针1次并在6 d后收集样品,为马氏珠母贝双链rna干扰实验探究基因功能的稳定高效条件。

关键词：马氏珠母贝双链rna干扰优化

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rna干扰Fus3基因对二态性真菌马尔尼菲青霉菌的孢子形成和细胞壁组分合成功能的影响

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菌物学报 2009年第3期28卷 415-421页

作者：王峰董辉钱震陶菊红游松任双喜上海人类基因组南方中心上海201203 沈阳药科大学制药工程学院沈阳110016

马尔尼菲青霉菌Penicillium marneffei是一种重要的条件致病真菌,可致艾滋病患者产生严重的系统性霉菌病并发症。基因组学的研究和rna干扰技术,为马尔尼菲青霉菌致病基因和致病机制的深入探讨提供了可能。我们研究马尔尼菲青霉菌的一个... 详细信息

马尔尼菲青霉菌Penicillium marneffei是一种重要的条件致病真菌,可致艾滋病患者产生严重的系统性霉菌病并发症。基因组学的研究和rna干扰技术,为马尔尼菲青霉菌致病基因和致病机制的深入探讨提供了可能。我们研究马尔尼菲青霉菌的一个新基因Fus3,它是丝氨酸/苏氨酸-特异性激酶丝裂原活化蛋白激酶家族的成员。为了研究Fus3的功能,我们利用根癌农杆菌介导的双链rna干扰技术构建了Fus3 rna干扰菌株(Fus3-i)。rna干扰的活性是由木糖诱导的启动子xylP控制的。Fus3基因活性下降后影响了马尔尼菲青霉菌生长,包括孢子的生成,细胞壁组分的合成。实验表明,Fus3基因对于马尔尼菲青霉菌细胞生长发育起着重要的调控作用,为研究真菌疾病提供了帮助。

关键词：丝裂原活化蛋白激酶双链rna干扰孢子生成细胞壁合成真菌疾病

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SjGPR89蛋白对日本血吸虫生长发育的影响

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2022年第6期40卷 701-707页

作者：王晓玲张卫易存陈祥宇杨文彬徐斌胡薇中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心) 国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织热带病合作中心国家级热带病国际联合研究中心上海200025 复旦大学生命科学学院上海200433 内蒙古大学生命科学学院呼和浩特010070

目的初步探索日本血吸虫G蛋白偶联受体89(SjGPR89)在日本血吸虫生长发育中的作用。方法利用SMART网站和TMHMM网站预测其SjGPR89蛋白的蛋白结构和跨膜结构。取40只SPF级6~8周龄雌性昆明小鼠经腹部贴片法感染日本血吸虫尾蚴(200±10)条/鼠... 详细信息

目的初步探索日本血吸虫G蛋白偶联受体89(SjGPR89)在日本血吸虫生长发育中的作用。方法利用SMART网站和TMHMM网站预测其SjGPR89蛋白的蛋白结构和跨膜结构。取40只SPF级6~8周龄雌性昆明小鼠经腹部贴片法感染日本血吸虫尾蚴(200±10)条/鼠,分别于感染后第14、16、18、20、22、24、26、28、30天解剖小鼠,收集虫体,提取虫体rna并逆转录为cDNA,采用qRT-PCR检测SjGPR89 mrna在血吸虫中的相对转录水平。取12只SPF级6~8周龄雌性昆明小鼠,经腹部贴片法感染日本血吸虫尾蚴(60±2)条/鼠,随机平均分为SjGPR89干扰组(干扰组)和对照组,干扰组于感染后第1、6、10、14、18、22、26天经尾静脉注射SjGPR89双链rna(dsrna)10μg/鼠,对照组注射等量绿荧光蛋白(GFP)dsrna。小鼠感染后第30天收集虫体,取雌、雄虫各5条,提取虫体rna,逆转录为cDNA,采用qRT-PCR检测虫体SjGPR89 mrna相对转录水平;用多聚甲醛乙酸乙醇(AFA)固定分开的雌、雄虫后,采用Image J软件测量虫长,并统计虫荷;采用卡红染色对雌、雄虫的性腺进行染色,荧光显微镜下观察生殖腺发育状态的变化。另取12只SPF级6~8周龄雌性昆明小鼠,经腹部贴片法感染尾蚴(40±2)条/鼠,随机平均分为干扰组和对照组,干扰组于小鼠感染后第26、30、34、38天经尾静脉注射10μg dsrna/鼠,于第42天解剖小鼠,取肝组织,qRT-PCR检测肝组织中胶原Ⅰ、胶原Ⅲ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mrna的相对转录水平;肝组织经5%NaOH消化后,计数每克肝组织虫卵数;制备肝切片,Masson染色后镜下观察肝纤维化程度。结果TMHMM网站预测结果显示,SjGPR89为一种较保守的9次跨膜的G蛋白偶联受体;SMART网站预测结果显示,SjGPR89蛋白由4个跨膜区域、1个高尔基pH调节受体(GPHR)结构域、1个低复杂度区域和一个脱落酸(ABA)G蛋白偶联受体(GPCR)结构域组成。qRT-PCR检测结果显示,小鼠体内不同发育时期(14~30 d)日本血吸虫的SjGPR89 m rna相对转录水平较平稳,仅雌虫在感染小鼠后的第26~28天有大幅上升。感染后第30天,qRT-PCR检测结果显示,干扰组雌、雄血吸虫中SjGPR89的mrna相对转录水平分别为307.70±58.21、97.88±11.38,较对照组的767.10±142.79、182.02±7.42(t=5.96、12.39,均P干扰组雌、雄虫的虫长分别为(12.13±2.67)、(10.00±1.72)mm,较对照组的(13.67±1.74)、(11.48±1.94)mm(t=4.10、5.09,均P干扰组雌、雄虫的虫荷数分别为(23.00±1.83)、(23.75±2.99)条,较对照组的(26.75±0.96)、(31.00±3.56)条(t=3.64、3.12,均P干扰组雌虫的性腺发育出现延滞状态,卵巢和卵黄腺着色较浅,且卵巢的面积远小于对照组;雄虫的性腺发育不充分,形态大小较对照组小。干扰组的每克肝组织虫卵数为(2777.33±197.94)个,较对照组的(5871.32±875.25)个(t=5.97,P干扰组小鼠肝胶原纤维面积小于对照组;qRT-PCR检测结果显示,干扰组小鼠肝组织中的胶原Ⅰ、胶原Ⅲ、α-SMA mrna相对转录水平分别为530.20±246.81、825.26±139.82、551.59±189.94,均低于对照组(t=3.81、2.50、4.72,均P干扰SjGPR89蛋白可抑制日本血吸虫的生长发育、生存能力和雌虫产卵,减轻对宿主肝脏的病理损伤。

关键词：日本血吸虫 G蛋白偶联受体 SjGPR89 双链rna干扰生长发育

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