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玉米蛋白酶解物的解酒作用

食品科学 2015年第1期36卷 191-195页

作者：马艳秋郑喜群刘晓兰孙琪齐齐哈尔大学食品与生物工程学院黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔大学黑龙江省普通高校农产品加工重点实验室黑龙江齐齐哈尔161006

采用碱性蛋白酶Alcalase和复合蛋白酶Protamex分步对膨化的玉米蛋白粉进行酶解改性,应用动物实验的方法研究玉米蛋白酶解物的解酒作用。结果表明:玉米蛋白酶解物中分子质量小于1 000 u的组分占87.76%,含有较高比例的谷氨酸、亮氨酸和丙... 详细信息

采用碱性蛋白酶Alcalase和复合蛋白酶Protamex分步对膨化的玉米蛋白粉进行酶解改性,应用动物实验的方法研究玉米蛋白酶解物的解酒作用。结果表明:玉米蛋白酶解物中分子质量小于1 000 u的组分占87.76%,含有较高比例的谷氨酸、亮氨酸和丙氨酸;与酒精模型组相比,双酶酶解得到的玉米蛋白酶解物可使小鼠血液中乙醇含量降低59.43%;在一定时间范围内,玉米蛋白酶解物可以提高小鼠胃中乙醇脱氢酶和肝脏中超氧化物歧化酶活性,降低肝脏中丙二醛含量,增加谷胱甘肽含量。

关键词：玉米蛋白酶解物解酒作用双酶分步酶解

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酶法制备大豆蛋白成骨活性肽

中国农业科学 2021年第13期54卷 2885-2894页

作者：李宇汪芳翁泽斌宋海昭沈新春南京财经大学食品科学与工程学院/江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心/江苏高校粮油质量安全控制及深加工重点实验室南京中医药大学中医学院/中西医结合学院

【目的】探究从大豆分离蛋白双酶分步酶解产物中分离促成骨细胞增殖肽的工艺,为大豆产品的开发提供参考。【方法】以促成骨细胞增殖活性作为测定指标,选用木瓜蛋白酶酶解大豆分离蛋白(SPI),采用MTT法检测不同浓度的木瓜蛋白酶酶解产物... 详细信息

【目的】探究从大豆分离蛋白双酶分步酶解产物中分离促成骨细胞增殖肽的工艺,为大豆产品的开发提供参考。【方法】以促成骨细胞增殖活性作为测定指标,选用木瓜蛋白酶酶解大豆分离蛋白(SPI),采用MTT法检测不同浓度的木瓜蛋白酶酶解产物对成骨细胞的促增殖活性。采用pH-Stat法检测水解时间为1、2、3、4、5和6 h的木瓜蛋白酶酶解产物的水解度,并检测相应水解时间的酶解产物对成骨细胞的促增殖活性。然后分别采用截留分子量为30 kD和10 kD两种超滤膜对活性较高的酶解产物进行超滤,并测定各超滤组分对成骨细胞的促增殖活性。再将具有较高促成骨细胞增殖活性的超滤组分分别在0.5、1、1.5、2和2.5 h进行碱性蛋白酶酶解,并检测相应水解时间的酶解产物对成骨细胞的促增殖活性。然后选用交联葡聚糖(Sephadex G-15)对具有较高促成骨细胞增殖活性的酶解产物进行分离,并检测各分离组分对成骨细胞的促增殖活性。最后,对各分离组分进行氨基酸分析,并采用质谱(ESI-TOF MS/MS)对最高促成骨细胞增殖活性的分离组分进行结构鉴定,并筛选出具有较强促成骨细胞增殖的大豆活性肽。【结果】在浓度为200μg·mL-1时,木瓜蛋白酶酶解物对成骨细胞的促增殖活性随着酶解时间的增加逐渐增强,当酶解时间为5 h时达到最高促增殖活性((118.24±2.73)%)。木瓜蛋白酶酶解产物经超滤分离、碱性蛋白酶酶解和凝胶过滤色谱分离后,对各分离组分进行氨基酸分析并筛选得到对成骨细胞具有最强增殖活性的组分F3,该组分的成骨细胞增殖率为(125.80±2.94)%,且F3中丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸等疏水性氨基酸以及芳香族氨基酸和必需氨基酸的含量明显高于其他组分。进一步通过质谱鉴定出F3主要由10个肽段组成。其中,DAMDGWFRL、GQTPLFPR、ADFYNPK、KDWYDIK的疏水性氨基酸、芳香族氨基酸以及必需氨基酸占比较高。对上述4个肽段进行活性测定,发现GQTPLFPR的促成骨细胞增殖活性最强,在浓度为100μmol·L-1时,其成骨细胞增殖率为(129.11±3.12)%。【结论】采用双酶分步酶解结合超滤和凝胶过滤色谱等蛋白分离纯化技术,从大豆分离蛋白中分离纯化出了具有较强促成骨细胞增殖活性的多肽,为促成骨细胞增殖活性肽的制备和应用提供了技术参考。

关键词：大豆分离蛋白成骨细胞增殖双酶分步酶解分离纯化活性肽

响应面法优化芝麻蛋白酶解工艺及其产物抑菌活性的研究

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食品安全质量检测学报 2015年第10期6卷 4047-4056页

作者：郭莹莹窦丽雪郝梦圆董田田王聪隋晓青岛大学生命科学学院青岛266071

目的为了得到芝麻蛋白双酶分步酶解的最佳工艺参数以及酶解产物的抑菌活性。方法采用响应面法优化双酶分步酶解芝麻蛋白的工艺参数,并以抑菌圈直径大小为指标,考察芝麻蛋白酶解产物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性以及最小抑菌浓... 详细信息

目的为了得到芝麻蛋白双酶分步酶解的最佳工艺参数以及酶解产物的抑菌活性。方法采用响应面法优化双酶分步酶解芝麻蛋白的工艺参数,并以抑菌圈直径大小为指标,考察芝麻蛋白酶解产物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性以及最小抑菌浓度。结果响应面优化得到双酶分步酶解的最适酶解条件为:总酶量6200 U/g,碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶=3:1,先加入碱性蛋白酶后反应1.6 h后加入木瓜蛋白酶,总反应时间为4 h。在此条件下,芝麻蛋白水解度实测值为29.673%,与预测值30.622%相近。芝麻蛋白酶解产物对大肠杆菌无抑制作用,但是具有抑制金黄色葡萄球菌的活性,得到其最小抑菌活性浓度为25.29mg/m L。结论响应面分析法优化芝麻蛋白双酶分步酶解工艺是可行的,芝麻蛋白酶解产物具有抑制金黄色葡萄球菌的活性。

关键词：芝麻蛋白双酶分步酶解响应面分析法金黄色葡萄球菌抑菌活性

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双酶分步水解法制备棉籽多肽的蛋白酶筛选

中国粮油学报 2012年第2期27卷 76-80,86页

作者：林虬黄薇宋永康姚清华苏德森福建省精密仪器农业测试重点实验室福建省农业科学院中心实验室福州350003

本研究利用6种蛋白酶对棉籽蛋白进行单酶和双酶组合水解,测定水解过程中棉籽蛋白的水解度,同时对酶解产物的多肽得率进行了分析比较。结果表明,为了高效制备棉籽多肽,可先用Alacalase水解蛋白酶对棉籽蛋白进行水解,再利用Flavourzyme风... 详细信息

本研究利用6种蛋白酶对棉籽蛋白进行单酶和双酶组合水解,测定水解过程中棉籽蛋白的水解度,同时对酶解产物的多肽得率进行了分析比较。结果表明,为了高效制备棉籽多肽,可先用Alacalase水解蛋白酶对棉籽蛋白进行水解,再利用Flavourzyme风味蛋白酶继续酶解,最终产物的水解度可达到36.58%,多肽得率达到71.32%,相比单独应用Alcalase水解蛋白酶,水解度提高了91.32%,多肽得率提高5.88%。

关键词：棉籽蛋白双酶分步酶解水解度多肽得率

玉米胚芽蛋白水解物的制备及其抗氧化活性研究

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食品工业 2016年第6期37卷 47-52页

作者：王文黄继红杨铭乾李海月纪小国河南工业大学生物工程学院郑州450001 郑州市中食农产品加工研究院郑州450001

为高效利用脱脂玉米胚芽蛋白,采用双酶分步酶解制备玉米胚芽蛋白水解液,通过单因素和响应面试验设计对酶解条件进行优化;利用膜分离对其进行初步纯化并测定其体外抗氧化活性。结果表明,一步酶解的最佳条件:碱性蛋白酶的加酶量为0.58%,p ... 详细信息

为高效利用脱脂玉米胚芽蛋白,采用双酶分步酶解制备玉米胚芽蛋白水解液,通过单因素和响应面试验设计对酶解条件进行优化;利用膜分离对其进行初步纯化并测定其体外抗氧化活性。结果表明,一步酶解的最佳条件:碱性蛋白酶的加酶量为0.58%,p H 8.65,酶解4.78 h时,蛋白溶出率为57.70%+1.92%;二步酶解的最佳条件:木瓜蛋白酶加酶量0.11%,p H 6.54,酶解2.28 h后,蛋白溶出率达88.71%+1.5%;不同分子段蛋白质水解物均具有较强的自由基清除能力和一定的还原力。纯化组分中<3 k Da肽段(E1)对超氧阴离子自由基的清除效果最好,有望作为一种有效的抗氧化肽,在医药、食品和饲料行业等发挥应用优势。

关键词：双酶分步酶解蛋白溶出率膜过滤抗氧化活性

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三步法快速制备鲢鱼鱼露工艺研究

三步法快速制备鲢鱼鱼露工艺研究

作者：刘鹏飞江西师范大学

学位级别：硕士

本文以鲢鱼加工副产物为原料,采用三步法快速制备风味鱼露,通过对酶工程技术、现代发酵技术和风味优化技术的有机整合,为风味淡水鱼露的制备提供一种有效方法,为鲢鱼的高值化综合利用提供一条新的途径。本文主要研究结论归纳如下:(1)首... 详细信息

本文以鲢鱼加工副产物为原料,采用三步法快速制备风味鱼露,通过对酶工程技术、现代发酵技术和风味优化技术的有机整合,为风味淡水鱼露的制备提供一种有效方法,为鲢鱼的高值化综合利用提供一条新的途径。本文主要研究结论归纳如下:(1)首先双酶分步酶解制备鱼露。基于单因素实验和正交实验,确定最优条件。即固定pH 7.0,首先加入2.5%的中性蛋白酶,45℃恒温水解5 h;随后加入2.0%的风味蛋白酶,55℃恒温水解3 h。按此条件所制备的鱼露氨基氮含量为5.93±0.30 mg/mL,总氮含量为8.12±0.32 mg/mL。(2)在双酶分步酶解的基础上,进一步采用加曲发酵制备鱼露。根据发酵单因素实验和Box-Benhnken试验设计,建立发酵温度、发酵时间、大豆种曲添加量的响应面模型。确定发酵制备鱼露的最优条件是发酵时间11 d、大豆种曲添加量32.45%、发酵温度37℃、加盐量10%。按此条件所制备的鱼露氨基氮含量为8.56±0.21 mg/mL,总氮含量为12.15±0.18 mg/mL。(3)利用Maillard反应对发酵后的鱼露进行风味优化。通过研究Maillard反应温度、反应时间、初始pH、D-木糖添加量和L-丙氨酸添加量对发酵后鱼露风味的影响,确定各因素的最适作用范围。采用正交试验优化反应条件,并确定反应时间15min、温度100℃、D-木糖添加量0.4%、初始pH 7.0、L-丙氨酸添加量0.3%为Maillard反应风味优化的最适条件。所得鱼露的综合感官评分达到8.64±0.20分。(4)通过电子鼻收集的鱼露样品的气味信息和GC-MS检测到的风味物质,对比分析丽尔泰鱼露、浦源鱼露两种市售鱼露和三步法所制备的鱼露中存在的气味差异。电子鼻测试表明,丽尔泰鱼露、浦源鱼露和三步法所制备的鱼露之间存在显著的气味差异,主要表现在小分子氮氧化合物,短链烷烃,无机和有机硫化物类物质。三步法所制备的鱼露中含有的小分子氮氧化合物明显增多和有机、无机硫类物质明显高于市售鱼露。通过GC-MS测试可知,三步法所制备的鱼露中DHA、EPA等有机酸类物质的相对含量较高,同时检测出2-乙基-3,5-二甲基吡嗪、β-苯乙醇、乙基麦芽酚、氢化肉桂酸、正十二酸等物质的增加,使得三步法快速制备的鱼露风味更加优良。

关键词：淡水鱼露双酶分步酶解加曲发酵 Maillard反应优化电子鼻 GC-MS

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低盐鱼露快速发酵生产工艺的研究

低盐鱼露快速发酵生产工艺的研究

作者：邹敏新疆农业大学

学位级别：硕士

以金带细鲹鱼（Selaroides leptolepis）为原料,进行鱼露快速发酵生产工艺的研究。对胰蛋白酶、木瓜蛋白酶单酶酶解和双酶分步酶解条件、米曲霉种曲制备和鱼露发酵的工艺条件、鱼露风味改善条件、调配配方和杀菌方式进行了研究,对酶解... 详细信息

以金带细鲹鱼（Selaroides leptolepis）为原料,进行鱼露快速发酵生产工艺的研究。对胰蛋白酶、木瓜蛋白酶单酶酶解和双酶分步酶解条件、米曲霉种曲制备和鱼露发酵的工艺条件、鱼露风味改善条件、调配配方和杀菌方式进行了研究,对酶解后、发酵后样品的挥发性成分进行分析,对16种氨基酸含量进行了测定。同时对鱼露的理化指标和微生物指标进行了测定,并进行了感官评价。结果表明:单酶最适酶解工艺条件:胰蛋白酶:固液比1:5（g/g）,加酶量2.0%（g/g）,在45℃,pH为8.0下酶解5h,水解度可达30.51%。木瓜蛋白酶:固液比为1:4（g/g）,加酶量2.0%（g/g）,在60℃,pH为6.0下酶解4h,水解度可达18.51%。双酶分步酶解的最适酶解工艺条件:先加入胰蛋白酶,在45℃,pH8.0,固液比1:5（g/g）,加酶量2.0%（g/g）的条件下,酶解5h后,加入1.6%（g/g）木瓜蛋白酶,在61℃,pH 6.3,酶解3.5h后水解度达到43.23%。种曲最适制备工艺条件:麸皮与鱼糜比例为1:2（g/g）,接菌量（米曲霉培养液）为0.6%（g/g）,培养基加水量为200%（mL/g）,在34℃培养5d,酶活力达到2 376.86U/mL。鱼露最适发酵工艺条件:麸皮与酶解液比例为1:8（g/g）,种曲添加量为0.6%（g/g）,加盐量9.7%（g/g）,在32℃发酵11d,氨基态氮含量达到1.327g/100mL。去腥除酸效果较佳的工艺条件:先添加1.5%（g/g）酵母粉,在25℃下,处理90min后,加入1.0%（g/g）β-环状糊精,在40℃,处理60min。向鱼露中添加9%（g/g）的白砂糖,口感较好。杀菌效果较好条件为100℃15min。酶解液挥发性风味物质共29种,其中酯类11种,酸类4种,醇类、醛类、烃类各3种,含氮、硫类化合物各1种,其他杂环类3种。原鱼露挥发性风味物质共30种,其中酮类、酯类、醇类各9种,酸类3种,烃类2种,含氮类3种,含硫类2种,其它杂环类3种。原鱼露挥发性风味成分中可赋予鱼露香味的成分较多,发酵法能够很好的改善酶解液的风味。鱼露中16种氨基酸的总含量为2.5g/100g,含量最高的谷氨酸,达到0.513g/100g,其次是天冬氨酸,为0.254g/100g。全氮含量达到2.056g/100mL,氨基氮为1.286g/100mL,食盐含量达到9.62%（g/g）,菌落总数、大肠菌群、均小于国家标准的要求,致病菌未检出。采用双酶酶解与米曲霉种曲控温发酵法生产鱼露,发酵时间从自然发酵的1～3年缩短到2～3周,盐含量从传统的27%9%降低到10%左右。

关键词：金带细鲹鱼露双酶分步酶解米曲霉发酵

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酪蛋白磷酸肽的制备及其性质研究

酪蛋白磷酸肽的制备及其性质研究

作者：丁琬莹哈尔滨商业大学

学位级别：硕士

以酪蛋白为试验原料,水解度作为参考指标,采用单因素及响应面试验,分别研究碱性蛋白酶和胰蛋白酶对酪蛋白的酶解工艺。试验结果表明:碱性蛋白酶的最优条件为pH 9.14、温度50.63℃、加酶量4075.68U/g底物、时间4.81h;胰蛋白酶的最优条件... 详细信息

以酪蛋白为试验原料,水解度作为参考指标,采用单因素及响应面试验,分别研究碱性蛋白酶和胰蛋白酶对酪蛋白的酶解工艺。试验结果表明:碱性蛋白酶的最优条件为pH 9.14、温度50.63℃、加酶量4075.68U/g底物、时间4.81h;胰蛋白酶的最优条件为pH 8.31、温度46.30℃、加酶量4236.88U/g底物、时间5.00h;在单酶酶解的基础上,使用这两种酶对酪蛋白进行双酶分步酶解,水解度可达31%。再利用钙—乙醇沉淀法,将粗酪蛋白磷酸肽从酶解液中分离出来,最优分离工艺为pH5.5、乙醇终浓度55%、氯化钙终浓度1.2g/L、沉淀时间2.5h。以分离得到的粗酪蛋白磷酸肽(CPP)为研究对象,使用717阴离子交换树脂对酪蛋白磷酸肽粗品进行纯化,确定其动态吸附—解吸的最优参数为:样液浓度2%、进样流速0.5mL/min、上样体积100mL、洗脱酸(HC1)浓度0.20 mol/L、洗脱酸流速***/min;利用SDS-PAGE凝胶电泳分析酪蛋白和酪蛋白磷酸肽的分子量分布情况可知,酪蛋白的分子量主要分布在66.4KD44.3KD,还有一些分布在29.0KD附近,酪蛋白磷酸肽的分子量小于14.3KD;制得的酪蛋白磷酸肽,经测定包含17种氨基酸,其中7种必需氨基酸,占总氨基酸含量的41.09%,产品颜色为淡黄色且无异味,N/P5.88,纯度得到了提高。以酪蛋白和制得的酪蛋白磷酸肽为研究对象,对其理化性质进行比较。测定结果为:pH在2.0-10.0内,酪蛋白磷酸肽溶解度接近90%,而酪蛋白在等电点附近仅为20%;经过高速均质的酪蛋白磷酸肽泡沫体积约为酪蛋白的5倍,放置60min后,酪蛋白发泡稳定性为0,酪蛋白磷酸肽的发泡稳定性为64.0±0.5mL;酪蛋白乳化性43.4±0.5%,酪蛋白磷酸肽乳化性为47.3±0.5%,25℃放置4h后,乳化稳定性分别为32.5±0.3%和39.3±0.3%;通过体外模拟CPP持钙能力测试,结果表明:100mL的反应体系中,CPP添加量为0.25g/L时,可有效的阻止钙离子形成Ca3(P04)2沉淀,即此时酪蛋白磷酸肽持钙能力最强。最后,探究了食品加工工艺中,高温、淀粉和葡萄糖等材料的添加对CPP持钙能力的影响。结果表明:高温不会对CPP持钙能力产生影响;添加淀粉提高了 CPP持钙能力,但与添加量无关;葡萄糖最适添加量为4g/100mL、柠檬酸0.6g/100mL,苯甲酸钠可使磷酸钙沉淀形成时间推迟,最适添加量为0.04g/100mL。

关键词：酪蛋白磷酸肽碱性蛋白酶胰蛋白酶双酶分步酶解持钙能力