检索结果-南通市图书馆

双荧光素酶报告基因系统检测CYP3A4* 1G增强CYP3A4表达的调控作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

郑州大学学报（医学版） 2015年第6期50卷 765-768页

作者：杨卫红闫良刘利娥赵登职张卫张莉蓉郑州大学基础医学院法医学系郑州450001 郑州大学基础医学院药理学系郑州450001 郑州大学公共卫生学院卫生化学与卫生检验系 450001 郑州颐和医院药学部郑州450047 郑州大学第一附属医院麻醉科郑州450052

目的:探讨CYP3A4*1G增强CYP3A4基因表达的负调控作用。方法:设计合成包含CYP3A4*1G G或A等位基因的一系列基因片段(外显子10与内含子10交界处287和181 bp),构建CYP3A4*1G正向位于CYP3A4启动子上游的荧光素酶报告基因载体,与内参质粒pRL... 详细信息

目的:探讨CYP3A4*1G增强CYP3A4基因表达的负调控作用。方法:设计合成包含CYP3A4*1G G或A等位基因的一系列基因片段(外显子10与内含子10交界处287和181 bp),构建CYP3A4*1G正向位于CYP3A4启动子上游的荧光素酶报告基因载体,与内参质粒pRL-TK共转染Hep G2细胞,通过双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性。结果:与CYP3A4启动子相比较,G与A等位基因在287 bp DNA片段中均降低了荧光素酶表达(F=795.575,P基因对CYP3A4启动子活性的抑制程度比较差异无统计学意义(P>0.05)。与CYP3A4启动子相比较,G与A等位基因在181 bp DNA片段中均降低了荧光素酶表达(F=23.218,P基因对CYP3A4启动子活性的抑制程度比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在CYP3A4内含子10与外显子10交界处CYP3A4*1G存在与CYP3A4*1G变异无关的CYP3A4启动子的抑制元件,该抑制元件对CYP3A4*1G增强CYP3A4基因表达起负调控作用。

关键词： CYP3A4*1G CYP3A4启动子双荧光素酶报告基因转录调控

双荧光素酶报告基因系统验证hsa-miR-326对BCL2L1、BAK1的靶向调控

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国卫生检验杂志 2014年第8期24卷 1156-1158页

作者：俞石芳李强洪俊英金陈华陈碧乐温州医科大学附属第一医院浙江温州325000 温州医科大学附属第三医院浙江瑞安325200

目的构建psiCHECK2荧光素酶报告基因载体,验证hsa-miR-326对BCL2L1和BAK1表达的影响。方法设计合成包含与hsa-miR-326结合序列及其突变型序列的BCL2L1和BAK1基因片段,构建荧光素酶报告基因载体,转染293T细胞,通过荧光素酶活性变化观察hs... 详细信息

目的构建psiCHECK2荧光素酶报告基因载体,验证hsa-miR-326对BCL2L1和BAK1表达的影响。方法设计合成包含与hsa-miR-326结合序列及其突变型序列的BCL2L1和BAK1基因片段,构建荧光素酶报告基因载体,转染293T细胞,通过荧光素酶活性变化观察hsa-miR-326对BCL2L1和BAK1表达的影响。结果 hsa-miR-326对BCL2L1组的荧光表达有非常显著的抑制作用(P荧光表达没有显著的抑制作用(P>0.05)。结论 hsa-miR-326可以调控BCL2L1的表达,但对BAK1的表达未见影响,推测hsa-miR-326可能通过下调BCL2L1参与血小板的凋亡。

关键词： hsa-miR-326 双荧光素酶报告基因 BCL2L1 BAK1

双荧光素酶报告基因检测NF-κB与CD133靶标关系

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

双荧光素酶报告基因检测NF-κB与CD133靶标关系

作者：林津津福建医科大学

学位级别：硕士

目的:本课题小组前期实验研究发现,胆脂瘤组织中CD133和NF-κB蛋白均高表达,且利用流式细胞仪分析得到,Rhek-p65细胞系(过表达NF-κB的人皮肤角质细胞)中CD133+细胞率提高,二者表达呈正相关关系,提示NF-κB对CD133具有调控作用,CD133可... 详细信息

目的:本课题小组前期实验研究发现,胆脂瘤组织中CD133和NF-κB蛋白均高表达,且利用流式细胞仪分析得到,Rhek-p65细胞系(过表达NF-κB的人皮肤角质细胞)中CD133+细胞率提高,二者表达呈正相关关系,提示NF-κB对CD133具有调控作用,CD133可能是NF-κB的潜在靶基因,但不能确定二者直接相关。为了研究NF-κB与CD133之间靶标关系,本实验构建克隆有CD133启动子基因片段的双荧光素酶报告基因载体,利用双荧光素酶报告基因检测系统验证二者关系,为进一步探讨NF-κB和CD133基因在胆脂瘤发生、发展过程中可能机制提供实验基础。方法:先在NCBI上找到CD133 promoter区域,然后使用JASPAR database网站找到CD133启动子上可能与NF-κB结合的基因序列,并使用PCR的方法扩增得到包含与NF-κB结合的CD133基因启动子序列。将扩增得到的CD133基因启动子序列连接到p GL3荧光素酶报告质粒中,构建CD133基因启动子的荧光素酶报告质粒(CD133 promoter-p GL3),测序正确后,将CD133promoter-p GL3、pc DNA-NF-κB、p GL3-control、空载pc DNA3.0、p RL-TK按分组情况分别转染293ft细胞,48～72h后使用超微量紫外分光光度计检测各组荧光素酶的活性。结果:酶切证实成功扩增了113bp大小的CD133启动子基因片段;测序结果证实构建了含有113bp大小的CD133启动子基因片段的荧光素酶报告质粒;使用高灵敏度板式化学发光检测仪检测到共转CD133 promoter-p GL3和pc DNA-NF-κB的293ft细胞的相对荧光素酶活性是46.62±4.62,共转CD133promoter-p GL3和空载pc DNA3.0(NF-κB的阴性对照质粒)的荧光素酶活性是44.74±7.85。两组间进行比较得到P>0.05。结论:CD133启动子双荧光素酶报告质粒构建成功,双荧光素酶报告系统证实NF-κB没有直接调控本实验扩增得到的CD133启动子基因序列。

关键词：核因子-κB(NF-κB) CD133 中耳胆脂瘤双荧光素酶报告基因

基于Golden Gate高效构建psiCHECK双荧光素酶报告基因的方法及应用

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

山东第一医科大学（山东省医学科学院）学报 2023年第3期44卷 180-185页

作者：杜雅婷于文君李燕付元磊孙考祥烟台大学药学院山东烟台264000 烟台药物研究所山东烟台264000 烟台新药创制山东省实验室中科环渤海(烟台)药物高等研究院山东烟台264000

目的基于Golden Gate技术构建psiCHECK-CcdB重组双荧光素酶报告载体,并探讨其能否用于RNA干扰(RNA interference, RNAi)药物筛选。方法通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增CcdB致死基因、氯霉素基因与Golden Gate组装所需的BsmBI酶切位点,将其克隆至psiCHECK-2载体,构建出重组载体psiCHECK-CcdB。利用2种大肠杆菌DB3.1与DH5α对该载体的致死效率进行检测,选用1 387 bp大小的外源片段克隆至psiCHECK-CcdB载体,检测其连接效率,并验证重组载体能否发挥双荧光素酶报告系统功能,监测目的基因的表达变化。结果菌落PCR以及测序鉴定psiCHECK-CcdB重组质粒构建成功,该质粒可有效致死无法耐受CcdB毒素的大肠杆菌DH5α菌株,在DB3.1菌株中正常生长。采用Golden Gate的方法可将外源片段简单快速克隆至psiCHECKCcdB载体中,连接效率显著提高且低背景克隆。通过测定双荧光素酶表达强度,证实了小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)靶向性结合目的基因可显著下调荧光素酶的表达,成功发挥双荧光素酶报告基因功能。结论本研究成功构建了psiCHECK-CcdB重组双荧光素酶报告载体,应用Golden Gate组装技术,简化了实验操作流程,降低了实验成本,具备较高的阳性克隆率与多片段一次性组装的潜力,在RNAi药物筛选领域应用前景广阔。

关键词： Golden Gate CcdB基因双荧光素酶报告基因分子克隆 RNAi药物筛选

TNF-α3′-UTR双荧光素酶报告基因系统的构建及丹参酮类药物筛选

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国药理学通报 2015年第1期31卷 77-81页

作者：韦忠红朱智杰刘玉萍刘兆国盛晓波汪思亮陶丽祝娉婷陈文星王爱云陆茵南京中医药大学药学江苏南京210046 江苏省药效与安全性评价重点实验室江苏南京210046

目的构建并鉴定p GL3-TNF-α3'端非翻译区(UTR)双荧光素酶报告基因(DLR)表达系统,以此基于调控TNF-α转录后水平对丹参酮类成分进行筛选。方法反转录人脐静脉内皮细胞HUVEC的mRNA成c DNA,以之为模板,PCR扩增含TNF-α3'-UTR的DNA片段全长... 详细信息

目的构建并鉴定p GL3-TNF-α3'端非翻译区(UTR)双荧光素酶报告基因(DLR)表达系统,以此基于调控TNF-α转录后水平对丹参酮类成分进行筛选。方法反转录人脐静脉内皮细胞HUVEC的mRNA成c DNA,以之为模板,PCR扩增含TNF-α3'-UTR的DNA片段全长,经酶切后连接至荧光素酶报告载体p GL3-control上,构建出p GL3-TNF-α3'UTR全长的荧光素酶报告基因载体并进行鉴定。将所构建的p GL3-TNF-α3'UTR与p SVRenilla质粒组成双荧光素酶报告系统共转染至单核巨噬细胞RAW264.7,经脂多糖诱导后利用该双荧光素酶报告基因表达系统判定丹参酮类成分对TNF-α转录后调控是否有影响。结果成功构建p GL3-TNF-α3'UTR荧光素酶报告基因,克隆获得的DNA片段大小及序列与Genbank报道的一致。脂多糖(LPS)可以明显诱导转入p GL3-TNF-α3'UTR载体细胞的荧光强度。丹参酮类成分中隐丹参酮可以明显降低LPS诱导的p GL3-TNF-α3'UTR载体细胞的荧光素酶活性。结论成功构建含TNF-α3'UTR区的双荧光素酶报告基因表达系统,并以此从丹参酮类化合物中筛选出隐丹参酮,可以对TNF-α的转录后水平进行抑制调控。

关键词： TNF-α 3′非编码区双荧光素酶报告基因转录后调控隐丹参酮药物筛选

双荧光素酶报告基因技术验证miR-31对LATS2的靶向调控作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

检验医学与临床 2019年第15期16卷 2113-2116,2119页

作者：谢飞曾俊义张婉魏云峰郑泽琪丁露文通易达松南昌大学第一附属医院心血管内科江西南昌330006 南昌大学第一附属医院江西省高血压病研究所江西南昌330006

目的通过双荧光素酶报告基因技术验证miR-31对大肿瘤抑制因子2(LATS2)的靶向调控作用,观察miR-31在心肌细胞肥大过程中的可能影响。方法运用Targetscan软件预测大鼠miR-31对LATS2的靶向调控作用;以双荧光素酶报告质粒为工具载体,分别插... 详细信息

目的通过双荧光素酶报告基因技术验证miR-31对大肿瘤抑制因子2(LATS2)的靶向调控作用,观察miR-31在心肌细胞肥大过程中的可能影响。方法运用Targetscan软件预测大鼠miR-31对LATS2的靶向调控作用;以双荧光素酶报告质粒为工具载体,分别插入人工合成的大鼠LATS2基因野生型3′UTR(LATS2-3′UTR-WT)及突变型3′UTR(LATS2-3′UTR-MU)片段,构建LATS2-3′UTR-WT及LATS2-3′UTR-MU双荧光素酶报告质粒;重组双荧光素酶报告质粒分别与miR-31过表达质粒共转染293T细胞,检测荧光素酶活性并分析miR-31对LATS2的靶向调控作用;血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导体外心肌细胞肥大模型,RT-qPCR检测miR-31、LATS2及心肌细胞肥大基因心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)的表达,F肌动蛋白荧光探针观察心肌细胞形态变化。结果Targetscan软件预测结果显示,大鼠miR-31与LATS2基因3′UTR存在互补结合位点;经酶切及基因测序鉴定,成功构建LATS2-3′UTR-WT及LATS2-3′UTR-MU双荧光素酶报告质粒;与LATS2-3′UTR-MU+miR-31组相比,LATS2-3′UTR-NC+miRNA-31组荧光素酶活性无明显变化(0.98±0.03vs.1.00±0.03,P>0.05),而LATS2-3′UTR-MT+miR-31组与LATS2-3′UTR-NC+miR-31组相比,荧光素酶活性显著降低(0.74±0.02vs.1.00±0.03,P基因ANP(P基因明显下调(P基因3′UTR互补结合实现其对LATS2靶向调控作用,miR-31靶向作用LATS2可能参与调控心肌细胞的肥大。

关键词：双荧光素酶报告基因微小核糖核酸-31 大肿瘤抑制因子2 靶向调控心肌细胞肥大

人DRD1基因启动子区克隆和双荧光素酶报告基因系统的构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国组织工程研究 2016年第40期20卷 6060-6066页

作者：王春红李哲王明菡邓丽丽王欢沈阳医学院公共卫生学院毒理教研室辽宁省沈阳市110034

背景:多巴胺受体启动子区多态性位点的改变会影响受体的表达量,进而影响多巴胺能神经递质的作用,导致相关疾病的发生。目的:通过克隆人DRD1基因的启动子区,构建含有该基因启动子序列的双荧光素酶报告基因载体并检测其活性,为研究DRD1基... 详细信息

背景:多巴胺受体启动子区多态性位点的改变会影响受体的表达量,进而影响多巴胺能神经递质的作用,导致相关疾病的发生。目的:通过克隆人DRD1基因的启动子区,构建含有该基因启动子序列的双荧光素酶报告基因载体并检测其活性,为研究DRD1基因的转录调控提供基础工具。方法:以人静脉血基因组DNA为模板,通过PCR扩增DRD1基因启动子序列并克隆至pG M-T载体,测序验证无误后酶切连接至萤火虫荧光素酶报告基因质粒pG L3-Basic,构建含有DRD1基因启动子的荧光素酶报告基因载体,采用阳离子脂质体法与内对照质粒pG L3-TK共转染HEK293细胞同时以不含启动子的pG L3-Basic载体与内对照质粒pG L3-TK共转染作为阴性对照组,化学发光仪检测相对荧光强度。结果与结论:(1)通过酶切和测序验证重组荧光素酶报告基因载体的DRD1基因启动子区序列正确;(2)与阴性对照组相比,该重组载体转染HEK293细胞后具有转录活性;(3)成功构建了含有DRD1基因启动子区的荧光素酶报告基因载体,为研究该基因的转录调控提供了基础工具。

关键词：实验动物基因病毒载体相关因子模型多巴胺受体D1基因双荧光素酶报告基因启动子克隆

双荧光素酶报告基因系统验证Nlu-miRNA-8对Ccdc124的靶向调控

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

湖北农业科学 2021年第15期60卷 141-143,147页

作者：闸雯俊游艾青粮食作物种质创新与品种改良湖北省重点实验室/湖北省农业科学院粮食作物研究所武汉430064

构建psi-CHECK2双荧光素酶报告基因载体,验证褐飞虱Nlu-miRNA-8对Ccdc124基因(coiledcoil domain-containing protein 124-like)表达的影响。首先设计合成包含与Nlu-miRNA-8结合序列的Ccdc124基因片段,构建双荧光素酶报告基因载体,转染果蝇S2细胞,通过荧光素酶活性变化观察NlumiRNA-8对Ccdc124表达的影响。结果发现,nlu-miRNA-8对Ccdc124组的荧光表达有非常显著的抑制作用,而对空白对照、阴性对照组的荧光表达没有显著的抑制作用。研究成功构建了psi-CHECK2/Ccdc1243′UTR载体,并初步证实Nlu-miRNA-8对Ccdc124基因有调控作用。

关键词： Nlu-miRNA-8 双荧光素酶报告基因 Ccdc124

双荧光素酶报告基因验证微小RNA410对白细胞介素-13基因的靶向调控作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

儿科药学杂志 2021年第4期27卷 1-4页

作者：金蓉刘冬云胡素娟林荣军青岛大学附属医院山东青岛266000

目的:验证微小RNA410(miR-410)对白细胞介素-13(IL-13) mRNA的靶向调控作用。方法:采用生物信息学软件预测miR-410与IL-13 mRNA 3’端非翻译区存在结合位点,设计并合成包含miR-410结合序列及突变序列的IL-13基因序列片段,分别构建野生... 详细信息

目的:验证微小RNA410(miR-410)对白细胞介素-13(IL-13) mRNA的靶向调控作用。方法:采用生物信息学软件预测miR-410与IL-13 mRNA 3’端非翻译区存在结合位点,设计并合成包含miR-410结合序列及突变序列的IL-13基因序列片段,分别构建野生型和突变型双荧光素酶基因载体,与miR-410和阴性对照序列共同转染293T细胞,检测转染后荧光素酶的活性,验证miR-410对IL-13 mRNA表达的影响。结果:生物信息学显示,IL-13 mRNA存在与miR-410的结合位点。基因测序结果显示,野生型和突变型荧光素酶报告基因载体构建成功。通过双荧光素酶报告系统发现,miR-410能够结合野生型IL-13 mRNA荧光素酶基因序列从而抑制其表达,而对突变型IL-13 mRNA的荧光素酶表达无影响(P<0.05)。结论:miR-410可以靶向调控IL-13mRNA的表达。

关键词：微小RNA410 白细胞介素-13 双荧光素酶报告基因