检索结果-南通市图书馆

作者：张东东北林业大学

学位级别：硕士

肠癌(colorectal cancer,CRC)是目前发病率较高的恶性肿瘤。CRC主要转移部位为肝脏,因绝大多数肠癌肝转移患者已不可根治手术,化疗成为了主要手段。目前以卡培他滨为基础的三联药物(卡培他滨+奥沙利铂+亚叶酸)是治疗肠癌肝转移的一线药... 详细信息

肠癌(colorectal cancer,CRC)是目前发病率较高的恶性肿瘤。CRC主要转移部位为肝脏,因绝大多数肠癌肝转移患者已不可根治手术,化疗成为了主要手段。目前以卡培他滨为基础的三联药物(卡培他滨+奥沙利铂+亚叶酸)是治疗肠癌肝转移的一线药物,但其毒副作用大,且易耐药,因此,急需发展一线药物耐药后高效低毒的新药。基于双硫仑或藤黄均具有治疗肠癌的潜能,本研究首先通过体内外实验评估双硫仑联合藤黄抗肠癌肝转移的活性与毒性,然后探究了双硫仑与藤黄协同抗肿瘤活性的机制。研究结果如下:1.双硫仑联合藤黄抑制肠癌肝转移的体外活性研究:(1)采用MTT法测定双硫仑联合藤黄抑制小鼠肠癌细胞CT26.WT增殖实验:加药孵育48 h后,双硫仑组、藤黄组、双硫仑联合藤黄组和阳性对照组的IC值分别为42.23μg/m L、29.54μg/m L、16.91μg/m L和9.64μg/m L。加药孵育72 h后,双硫仑组、藤黄组、双硫仑联合藤黄组和阳性对照组的IC值分别为30.71μg/m L、25.11μg/m L、12.06μg/m L和7.78μg/m L。根据实验结果推测:双硫仑联合藤黄组体外抗肿瘤活性可能优于双硫仑或藤黄单一用药组,且随着用药时间的延长药效增强。(2)采用细胞划痕(修复)法测定双硫仑联合藤黄抑制小鼠肠癌细胞CT26.WT迁移实验:阴性对照组、双硫仑组、藤黄组、双硫仑联合藤黄组和阳性对照组的细胞迁移率分别为:24.92±0.85%、18.79±0.56%、16.25±0.65%、5.53±0.37%、7.73±0.76%,根据实验结果推测:双硫仑与藤黄联用组的细胞划痕修复能力最弱,抑制细胞迁移的能力最强,与其他各组相比均具有显著性差异(n=3,**P双硫仑联合藤黄抑制肠癌肝转移的体内活性研究:(1)肠癌肝转移模型小鼠平均生存期:阴性对照组、双硫仑组、藤黄组、双硫仑联合藤黄组和阳性对照组模型小鼠的平均生存期分别为(18.00±1.41)d、(21.83±2.79)d、(23.33±3.08)d、(26.83±2.99)d和(27.17±3.66)d。根据实验结果推测:双硫仑联合藤黄组比双硫仑或藤黄单一给药组的平均生存期均延长,且具有显著性差异(n=6,**P0.05)。(2)肠癌肝转移模型小鼠体重变化:给药组小鼠体重增长速度比阴性对照组缓慢,双硫仑联合藤黄组小鼠造模前后体重变化不明显,阳性对照组小鼠造模前后体重有所降低,根据实验结果推测:双硫仑联合藤黄组与阳性对照组相比毒性相对较小。(3)肿瘤抑制率与协同作用测定:给药组的平均肝重都小于阴性对照组,双硫仑联合藤黄组的平均肝重小于双硫仑或藤黄单一用药组,具有显著性差异(n=6,**P0.05);双硫仑组、藤黄组、双硫仑联合藤黄组和卡培他滨组肿瘤抑制率分别为16.38%、27.87%、47.41%和44.41%;经过金氏公式测定q=1.19,说明双硫仑与藤黄联用抑制肠癌肝转移产生了协同作用。(4)HE染色肝脏病理观察:模型小鼠肝脏分布了大小不等的灰白色肿瘤结节,对肝脏组织进行HE染色病理切片分析,阴性对照组肿瘤病灶数量较多,肿瘤细胞DNA复制较为活跃,双硫仑组、藤黄组和双硫仑联合藤黄组肿瘤病灶数量依次减少,阳性对照组癌细胞分布最为疏松,细胞成团数量最少,根据实验结果推测双硫仑联合藤黄对肠癌肝转移具有良好的抑制作用。(5)组织切片药物毒性分析:与空白组小鼠相比,双硫仑联合藤黄组组织切片未见明显变化,对小鼠器官影响较小;卡培他滨组(阳性对照组)小鼠部分组织器官出现了病理变化,可能与其毒性较大有关。3.双硫仑联合藤黄抑制肠癌肝转移的机制研究:(1)双硫仑和藤黄在体内的代谢过程:双硫仑和藤黄在人工胃液中形成的化合物进行质谱定性分析,得到m/z777.27离子和m/z742.97离子。双硫仑和藤黄联用药物胃液转化物作用于肿瘤细胞后成分进行质谱定性分析,得到m/z629.30、m/z651.27、m/z148.08等离子。根据实验结果推测:双硫仑和藤黄进入胃液后,双硫仑在酸性条件下二硫键断裂生成二乙基二硫代氨基甲酸(DDC),与藤黄主要成分藤黄酸发生迈克尔加成反应生成新的脂溶性化合物,该化合物作用于肿瘤细胞后,又被分解为双硫仑和藤黄酸,避免了藤黄酸可能与肠道内亚硫酸盐等结合形成水溶性较大的衍生物排出,提高了双硫仑和藤黄酸的药物作用。(2)双硫仑与藤黄联用对CT26.WT肿瘤细胞铜总量的影响:原子吸收光谱法测定空白组、双硫仑组和双硫仑联合藤黄组的光密度值分别为102.5、218.4和147.1,根据实验结果推测:藤黄可能是通过促进CT26.WT肿瘤细胞Cu外排,使肿瘤细胞铜离子耗竭,与双硫仑螯合铜离子协同作用抑制肿瘤细胞生长(

关键词：双硫仑藤黄肠癌肝转移联合用药

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双硫仑对雌性小鼠生殖能力的影响

双硫仑对雌性小鼠生殖能力的影响

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作者：滕明明西北农林科技大学

学位级别：硕士

在辅助生殖过程中,体外的高氧环境容易使卵母细胞受到氧化损伤。为了获得足够数量的可移植的胚胎,女性或雌性经济动物通常需要进行多次超数排卵,激素药物价格较高,而且大量激素药物容易诱发卵巢过度刺激综合征(OHSS)。双硫仑(Disulfiram... 详细信息

在辅助生殖过程中,体外的高氧环境容易使卵母细胞受到氧化损伤。为了获得足够数量的可移植的胚胎,女性或雌性经济动物通常需要进行多次超数排卵,激素药物价格较高,而且大量激素药物容易诱发卵巢过度刺激综合征(OHSS)。双硫仑(Disulfiram,DSF)在临床上用于戒除酒瘾,价格低廉,近年来发现DSF在治疗癌症、炎症和肥胖中也发挥重要作用。在肿瘤细胞中,DSF通过提高活性氧水平,降低谷胱甘肽水平,促进肿瘤细胞凋亡。而在治疗炎症、肥胖和器官损伤过程中,DSF通过降低细胞中的活性氧水平,提高谷胱甘肽水平,发挥抗氧化作用,减轻疾病对机体的损伤。DSF在卵母细胞中是否发挥抗氧化作用还处于未知。此外,在女性怀孕早期阶段使用DSF对孕妇和胎儿产生何种影响现在还未有定论。本研究以小鼠为模型,探究DSF对发情周期、生殖激素、排卵数量、卵母细胞质量、胚胎发育、子宫体积和血管化程度、受胎率和繁育后代的影响。本研究获得的主要试验结果如下:1.在间情期使用50 mg/kg或100 mg/kg的DSF分别使小鼠间情期从1.67±0.22天延长到2.92±0.28天或3.42±0.15天,DSF组小鼠发情周期各阶段血清中雌二醇浓度降低,促卵泡生成素浓度升高。2.使用50 mg/kg DSF的小鼠平均排卵数量从25.70±1.71个增加到37.85±2.35个,卵母细胞内活性氧水平降低,谷胱甘肽水平增加,线粒体膜电位升高,卵母细胞体外受精率增加。3.在小鼠怀孕早期使用DSF使每只小鼠获得的囊胚数量从对照组14.67±1.687个增加到23.33±1.563个,同时小鼠子宫角体积增大、血管化程度增加,受胎率提高22%。4.在细胞培养液中添加DSF可以上调小鼠颗粒细胞中血管生成相关基因(Vegf)、卵泡发育相关基因(C1qtnf3、m TOR和Pi3k)、排卵相关基因(Mapk1、Mapk3和p38Mapk)、抗氧化相关基因(Gpx4和Cat)的m RNA水平。综上所述,DSF有助于提高小鼠排卵率,同时提高卵母细胞的抗氧化能力和体外受精能力。此外,DSF可能通过上调Vegf的表达促进血管生成,有助于妊娠和胚胎发育。本研究为DSF对哺乳动物雌性生殖能力的影响提供了理论基础,同时对DSF的临床用药提供参考。

关键词：双硫仑小鼠雌性生殖卵母细胞

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双硫仑的抗肿瘤作用及在泌尿系肿瘤中的研究进展

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现代肿瘤医学 2023年第3期31卷 556-560页

作者：白吉彦张义木杨栋何朝宏河南省肿瘤医院/郑州大学附属肿瘤医院河南郑州450008 麻城市人民医院湖北麻城438300

双硫仑(disulfiram,DSF)为一种安全有效的戒酒药物。大量临床前研究表明,DSF具有明显的抗肿瘤作用,其抗肿瘤的分子机制包括乙醛脱氢酶(ALDH)抑制作用、抑制丝氨酸生物合成、诱导凋亡、抑制泛素-蛋白酶体蛋白核蛋白定位蛋白4(NPL4)和提... 详细信息

双硫仑(disulfiram,DSF)为一种安全有效的戒酒药物。大量临床前研究表明,DSF具有明显的抗肿瘤作用,其抗肿瘤的分子机制包括乙醛脱氢酶(ALDH)抑制作用、抑制丝氨酸生物合成、诱导凋亡、抑制泛素-蛋白酶体蛋白核蛋白定位蛋白4(NPL4)和提高化疗药物的敏感性等。本文详细论述了双硫仑抗肿瘤活性成分、分子机理以及在泌尿系肿瘤中的研究进展及其应用前景。

关键词：双硫仑泌尿系肿瘤抗肿瘤作用抗肿瘤药物

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cRGD修饰的负载锌的枝状介孔硅载体递送双硫仑靶向杀伤结直肠癌CT26细胞

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中国肿瘤生物治疗杂志 2023年

作者：杨阳朱烨飞王欣月高洁张扬同济大学医学院附属第十人民医院纳米医学与肠道微生态研究中心上海大学医学院海军军医大学附属长海医院临床研究中心

目的：制备一种精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸环肽(cRGD)修饰、Zn2+掺杂并负载双硫仑(DSF)的树枝状介孔硅纳米颗粒，初步研究其对结直肠癌CT26细胞的靶向杀伤作用。方法：采用水热合成法将Zn2+锚定在树枝状介孔硅纳米颗粒的骨架中，再将DSF负... 详细信息

目的：制备一种精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸环肽(cRGD)修饰、Zn2+掺杂并负载双硫仑(DSF)的树枝状介孔硅纳米颗粒，初步研究其对结直肠癌CT26细胞的靶向杀伤作用。方法：采用水热合成法将Zn2+锚定在树枝状介孔硅纳米颗粒的骨架中，再将DSF负载在介孔孔道中，偶联靶向配体cRGD到纳米颗粒的表面，得到具有靶向功能的纳米颗粒DSF@Zn-DMSN-cRGD。采用透射电镜(TEM)检测DSF@Zn-DMSN-cRGD的表面形貌，通过能谱面扫得到元素映射图验证其中的元素分布，通过激光粒度仪检测其粒径与电位变化，使用红外光谱仪检测表面主要化学键。通过TEM观察载体Zn-DMSN在pH6.5和pH7.4的模拟体液中共培养后的形态，采用细胞摄取实验检测cRGD修饰的Zn-DMSN靶向CT26细胞的能力，采用CCK-8法、Calcein-AM/PI染色法和流式细胞术检测DSF@Zn-DMSN-cRGD对CT26细胞的杀伤能力及对细胞凋亡的影响。结果：TEM观察表明DSF@ZnDMSN-cRGD表面具有多孔径，元素映射结果显示Zn元素和DSF成功负载在纳米颗粒表面，红外光谱仪检测结果表明cRGD成功偶联在DSF@Zn-DMSN介孔硅复合载体的表面，电位粒径结果显示粒径较未偶联cRGD前稍大，电位明显增加(P<0.000 1),TEM观察发现Zn-DMSN在微酸性环境中其骨架崩解明显增多，细胞摄取实验结果表明经cRGD修饰后的Zn-DMSN被CT26细胞内吞的效率显著增加(P<0.05)。CCK-8法、Calcein-AM/PI染色法和流式细胞术检测结果说明DSF@Zn-DMSN-cRGD能够高效杀伤CT26细胞(均P<0.000 1)并诱导细胞发生凋亡(均P<0.000 1)，而对正常地肠上皮细胞NCM460无明显损伤。结论：成功合成了一种掺杂锌、负载DSF并偶联cRGD的纳米颗粒DSF@Zn-DMSN-cRGD，其载体Zn-DMSN骨架具有良好的pH降解性，其中的c RGD能促进纳米颗粒被CT26细胞靶向内吞；在体外实验中，Zn-DMSN-cRGD能够对结直肠癌CT26细胞产生强烈的靶向细胞毒性。

关键词：结直肠癌双硫仑精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸环肽锌原位螯合 CT26细胞

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cRGD修饰负载锌的枝状介孔硅载体递送双硫仑靶向杀伤结直肠癌CT26细胞

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中国肿瘤生物治疗杂志 2023年第12期30卷 1043-1050页

作者：杨阳朱烨飞王欣月高洁张扬上海大学医学院上海200444 同济大学医学院附属第十人民医院纳米医学与肠道微生态研究中心上海200072 海军军医大学附属长海医院临床研究中心上海200433

目的:制备一种精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸环肽(cRGD)修饰、Zn^(2+)掺杂并负载双硫仑(DSF)的树枝状介孔硅纳米颗粒,初步研究其对结直肠癌CT26细胞的靶向杀伤作用。方法:采用水热合成法将Zn^(2+)锚定在树枝状介孔硅纳米颗粒的骨架中,再将DSF... 详细信息

目的:制备一种精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸环肽(cRGD)修饰、Zn^(2+)掺杂并负载双硫仑(DSF)的树枝状介孔硅纳米颗粒,初步研究其对结直肠癌CT26细胞的靶向杀伤作用。方法:采用水热合成法将Zn^(2+)锚定在树枝状介孔硅纳米颗粒的骨架中,再将DSF负载在介孔孔道中,偶联靶向配体cRGD到纳米颗粒的表面,得到具有靶向功能的纳米颗粒DSF@Zn-DMSN-cRGD。采用透射电镜(TEM)检测DSF@Zn-DMSN-cRGD的表面形貌,通过能谱面扫得到元素映射图验证其中的元素分布,通过激光粒度仪检测其粒径与电位变化,使用红外光谱仪检测表面主要化学键。通过TEM观察载体Zn-DMSN在pH6.5和pH7.4的模拟体液中共培养后的形态,采用细胞摄取实验检测cRGD修饰的Zn-DMSN靶向CT26细胞的能力,采用CCK-8法、Calcein-AM/PI染色法和流式细胞术检测DSF@Zn-DMSN-cRGD对CT26细胞的杀伤能力及对细胞凋亡的影响。结果:TEM观察表明DSF@ZnDMSN-cRGD表面具有多孔径,元素映射结果显示Zn元素和DSF成功负载在纳米颗粒表面,红外光谱仪检测结果表明cRGD成功偶联在DSF@Zn-DMSN介孔硅复合载体的表面,电位粒径结果显示粒径较未偶联cRGD前稍大,电位明显增加(P<0.000 1),TEM观察发现Zn-DMSN在微酸性环境中其骨架崩解明显增多,细胞摄取实验结果表明经cRGD修饰后的Zn-DMSN被CT26细胞内吞的效率显著增加(P<0.05)。CCK-8法、Calcein-AM/PI染色法和流式细胞术检测结果说明DSF@Zn-DMSN-cRGD能够高效杀伤CT26细胞(均P<0.000 1)并诱导细胞发生凋亡(均P<0.000 1),而对正常地肠上皮细胞NCM460无明显损伤。结论:成功合成了一种掺杂锌、负载DSF并偶联cRGD的纳米颗粒DSF@Zn-DMSN-cRGD,其载体Zn-DMSN骨架具有良好的pH降解性,其中的c RGD能促进纳米颗粒被CT26细胞靶向内吞;在体外实验中,Zn-DMSN-cRGD能够对结直肠癌CT26细胞产生强烈的靶向细胞毒性。

关键词：结直肠癌双硫仑精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸环肽锌原位螯合 CT26细胞

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双硫仑增强卵巢癌和小细胞肺癌对顺铂敏感性的机制研究

双硫仑增强卵巢癌和小细胞肺癌对顺铂敏感性的机制研究

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作者：杜锐萍安徽医科大学

学位级别：硕士

顺铂(Cisplatin)是一种化疗药物,通常用于治疗不同类型的癌症,包括卵巢癌、睾丸癌、头颈部癌、结直肠癌、膀胱癌和肺癌等。顺铂的抗肿瘤作用已被证明与DNA损伤和DNA合成抑制相关,进而导致细胞死亡。然而,对顺铂的内在或获得性耐药性仍... 详细信息

顺铂(Cisplatin)是一种化疗药物,通常用于治疗不同类型的癌症,包括卵巢癌、睾丸癌、头颈部癌、结直肠癌、膀胱癌和肺癌等。顺铂的抗肿瘤作用已被证明与DNA损伤和DNA合成抑制相关,进而导致细胞死亡。然而,对顺铂的内在或获得性耐药性仍然是癌症治疗的主要障碍。因此,亟需寻找可以逆转铂类耐药性的药物、分子靶标和机制。在本项目前期研究中,我们通过高通量药物筛选技术发现了一种被FDA批准用于酒精代谢阻断的药物--双硫仑,它可以增强小细胞肺癌对顺铂的敏感性。双硫仑(Disulfiram,DSF)已被发现为一种潜在的癌症治疗药物,其细胞毒性取决于铜离子(Cu)。双硫仑与铜离子形成配合物Cu ET,Cu ET在肿瘤中积累,通过诱导NPL4(核定位蛋白)的聚集,从而使p97-NPL4-UFD1通路失活,影响泛素-蛋白酶体蛋白降解途径,使癌细胞内积累大量残次蛋白,最终诱导癌细胞死亡。本研究在卵巢癌和小细胞肺癌中,探索了双硫仑增强癌细胞对顺铂敏感性的机制。我们课题组前期的研究已经发现双硫仑能够增强顺铂对卵巢癌细胞的敏感性。我们通过蛋白组学分析,发现双硫仑与顺铂联合处理会影响泛素结合酶活性、泛素样蛋白偶联活性等通路。对泛素化相关通路的蛋白进行筛选,进一步发现了一种泛素结合酶UBE2G1可能是双硫仑增强顺铂敏感性的潜在靶点。蛋白组学结果显示在卵巢癌中,顺铂处理后UBE2G1表达上调,双硫仑和顺铂联合处理后UBE2G1的表达下调。生物信息学分析发现与正常癌旁组织相比,在卵巢癌肿瘤样本中UBE2G1的表达显著增高,且UBE2G1的高表达与较差的预后相关。通过Western blot检测,我们证实在使用顺铂后,UBE2G1的表达上调;双硫仑和顺铂联合用药后,UBE2G1的表达下调,与蛋白组学数据分析一致。随后,通过构建过表达UBE2G1质粒,进一步发现上调UBE2G1的表达水平会使卵巢癌细胞增殖加快,癌细胞凋亡减少,对顺铂耐药性增强。我们又发现,过表达UBE2G1后,细胞周期相关蛋白P21表达下调,提示UBE2G1可能通过调控P21的表达,从而调控顺铂耐药性。我们进一步在小细胞肺癌中探索双硫仑增强小细胞肺癌顺铂敏感性的效应与机制。在多个耐药小细胞肺癌细胞系中,通过细胞实验表明双硫仑与顺铂联合使用具有协同作用,能够有效杀伤耐药的小细胞肺癌细胞,诱导更多癌细胞凋亡,显著抑制细胞的克隆形成能力。随后我们在细胞培养体系中添加了Cu,细胞增殖实验显示双硫仑与顺铂联用的协同作用增强,能够显著抑制小细胞肺癌细胞的增殖。最后,通过RNA-seq我们确定了11个可能与双硫仑增强小细胞肺癌顺铂敏感性有关的潜在靶点:CBS、RGPD6、IL6ST、ENO3、CORO7.PAM16、GNB3、ICAM3、CHKB.CPT1B、ZNF157、PCDHA1、CEP170P1。综上所述,我们在卵巢癌中通过蛋白组学分析与进一步的实验验证发现,双硫仑可能通过UBE2G1-P21途径增强卵巢癌细胞对顺铂的敏感性;在小细胞肺癌中发现双硫仑与顺铂联合使用具有协同杀伤作用,添加Cu后使协同作用更加显著,通过RNA-seq的方法筛选到11个与双硫仑增强顺铂敏感性相关的分子靶标。目的:1.在卵巢癌中,基于我们课题组前期卵巢癌蛋白组学数据,进一步探究双硫仑增强卵巢癌顺铂敏感性的机制。2.在小细胞肺癌中探究双硫仑与顺铂联合使用是否具有协同杀伤作用及其作用的潜在分子靶标。方法:1.在卵巢癌中通过蛋白组学分析发现双硫仑增强顺铂敏感性的潜在靶点分组如下:对照组、顺铂单药(10μM)处理组、双硫仑单药(25μM)处理组、顺铂与双硫仑联合处理组。对以上各组所得蛋白组学数据通过热图、韦恩图、KEGG富集分析、箱式图、生存分析等生物信息学方法进行分析。Western blot检测UBE2G1、P21、PARP的蛋白水平;Cell Titer-Glo、克隆形成实验、流式细胞术-细胞周期、PI/Annexin V细胞凋亡检测细胞的增殖、周期变化及凋亡变化。2.在小细胞肺癌中研究双硫仑增强顺铂敏感性的作用与潜在靶点使用Cell Titer-Glo检测细胞活力,从而测定细胞系对顺铂及双硫仑的IC50;分组如下:对照组、顺铂单药处理组、双硫仑单药处理组、顺铂与双硫仑联合处理组,细胞协同实验进一步验证双硫仑与顺铂是否具有协同杀伤;流式细胞术检测细胞的凋亡水平及周期变化;Western blot检测凋亡标志物cleaved-PARP;克隆形成实验检测各组细胞的增殖情况;在细胞培养基中补充Cu,检测各组的细胞活力有无变化;设置了四个实验组如下:对照组(千分之一的DMSO+1μM葡萄糖酸铜)、顺铂组(2μM CDDP+1μM葡萄糖酸铜)、双硫仑组(25n M DSF+1μM葡萄糖酸铜)、联用组(2μMCDDP+25n M DSF+1μM葡萄糖酸铜)给药24小时后,提取RNA进行RNA-seq测序:四组处理组中检测到的所有RNA通

关键词：顺铂双硫仑耐药性 UBE2G1 P21

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双硫仑介导的ADH5对胶质瘤发生发展的作用及分子机制研究

双硫仑介导的ADH5对胶质瘤发生发展的作用及分子机制研究

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作者：刘宗恒大连医科大学

学位级别：硕士

背景:胶质瘤是最常见的脑部肿瘤,具有高发病率和死亡率,即使接受了标准化治疗,预后仍不尽如人意。因此,需要探索胶质瘤新型治疗方法。双硫仑是一种用于治疗慢性酒精依赖的药物,在临床前研究中被发现对多非小细胞肺癌,肝癌和乳腺癌等多... 详细信息

背景:胶质瘤是最常见的脑部肿瘤,具有高发病率和死亡率,即使接受了标准化治疗,预后仍不尽如人意。因此,需要探索胶质瘤新型治疗方法。双硫仑是一种用于治疗慢性酒精依赖的药物,在临床前研究中被发现对多非小细胞肺癌,肝癌和乳腺癌等多种癌症类型有效,并在治疗非小细胞肺癌和胶质瘤方面取得了成功突破。在胶质瘤中的作用主要体现在其对放疗与化疗的增敏作用,然而双硫仑在胶质瘤中的作用机制尚未完全阐明。为了研究双硫仑对胶质瘤的潜在治疗靶点,本研究拟通过网络药理学方法对双硫仑潜在作用靶点进行筛选,并研究靶点对胶质瘤的潜在功能。方法:检索CGGA(中国胶质瘤图谱)、GEO(基因表达综合图谱)和TCGA(癌症基因组图谱)数据库获得胶质瘤表达数据集。首先使用Pharm Mapper用于预测双硫仑的潜在靶基因。通过GEO数据集GSE138863以识别双硫仑处理细胞的差异表达基因(DEG)。潜在靶基因与DEGs的交集基因被鉴定为双硫仑的靶基因。探讨潜在靶基因在胶质瘤中的表达、体细胞突变及临床预后相关性。由于靶基因中ADH5在胶质瘤中的作用尚未研究,先前一些研究报导提示其可能为双硫仑新作用途径的重要分子,我们进一步研究了ADH5在神经胶质瘤中的作用。利用TCGA和CGGA数据库对ADH5进行临床相关性分析、体细胞突变分析、免疫浸润分析和GSEA分析。为了进一步了解参与ADH5调控网络的基因的功能,我们使用Mfuzz算法根据与ADH5的相关性对表达谱基因进行聚类,然后对聚类基因进行基因富集分析。DO富集表明ADH5可能与其他癌症相关,从UCSC下载的TCGA TARGET GTEx基因表达数据用于ADH5的泛癌分析探究ADH5与其他癌种关系。此外,利用从GEO下载的胶质瘤组织单细胞测序数据集GSM6094425,分析胶质瘤中星形胶质细胞、巨噬细胞、单核细胞、少突胶质细胞、T淋巴细胞和小胶质细胞中ADH5的表达。本课题对ADH5与双硫仑进行分子对接分析,以更好阐明双硫仑与ADH5的结合机制。本课题进一步地通过q RT-PCR、Western Blot、流式细胞术和细胞迁移等实验对上述生物信息分析的结果进行验证,以证实ADH5在胶质瘤中的表达变化及双硫仑靶基因ADH5对胶质瘤细胞作用。结果:通过PharmMapper预测得到13690个双硫仑潜在作用靶点,使用STRING平台筛选获得252具有较强相关性靶点。使用GEO数据集GSE138863获得950个双硫仑处理细胞的差异表达基因(DEG)。将预测得到的252个靶基因与950个双硫仑相关差异基因取交集,获得16个双硫仑靶基因。随后对靶基因的相关分析表明7个基因在胶质瘤与正常组织中存在显著的差异表达与基因拷贝数变异,单因素Cox分析显示8个靶基因与患者总生存有显著关系(p双硫仑与ADH5可以存在相互作用,对ADH5和双硫仑的分子对接发现了两者通过范德华力、Pi-Alkyl作用、氢键相结合,且结合能较低(-3.28千卡/摩尔),结合较为稳定。最后,对胶质瘤组织和相关细胞系的q RT-PCR、Western Blot及免疫组化均验证了ADH5的高表达,且与胶质瘤分级呈正相关。本课题进一步构建了ADH5敲低的U87及U125细胞系。通过CCK8与Transwell实验检测发现ADH5敲低后细胞自我复制能力与侵袭迁移能力显著减弱;流式细胞检测也证实了ADH5可影响胶质瘤肿瘤细胞周期,抑制胶质瘤细胞增殖。结论:本研究使用网络药理学及生物信息学方法筛选出双硫仑靶基因ADH5,随后行临床相关性分析显示其在胶质瘤组织中高表达且与肿瘤分级呈正相关。预后相关COX分析及ROC曲线显示其为胶质瘤的临床独立预后因素。此外,免疫浸润分析提示ADH5表达与胶质瘤的免疫微环境密切相关。研

关键词：双硫仑胶质瘤 ADH5 凋亡侵袭

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双硫仑联合铜下调BCL6信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤作用机制研究

双硫仑联合铜下调BCL6信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤作用机制研究

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作者：雷陈双浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的研究双硫仑(Disulfiram,DSF)/Cu作用人弥漫大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)细胞株及原代细胞前后BCL6及BCL6相关通路蛋白变化,探讨DSF/Cu通过下调BCL6信号通路抑制DLBCL的分子机制。同时分析DLBCL患者循环滤泡... 详细信息

目的研究双硫仑(Disulfiram,DSF)/Cu作用人弥漫大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)细胞株及原代细胞前后BCL6及BCL6相关通路蛋白变化,探讨DSF/Cu通过下调BCL6信号通路抑制DLBCL的分子机制。同时分析DLBCL患者循环滤泡辅助性T细胞(Tfh)及其亚型,及DSF/Cu作用前后Tfh变化,旨在为DLBCL的临床治疗提供实验依据。方法1.利用多种癌症基因组图谱数据库(The Cancer Genome Atlas,TCGA)在线工具分析GEPIA2.0分析BCL6基因在DLBCL患者中的表达情况、与患者生存的关系,利用DAVID在线网站进行GO和KEGG分析,利用TIMER2.0在线数据库分析BCL6与免疫浸润细胞的相关性。2.Annexin-V PI双染法检测DSF/Cu对DLBCL原代细胞凋亡的影响。3.JC-1法检测DSF/Cu对DLBCL原代细胞线粒体膜电位的影响。4.Western blot实验检测DSF/Cu作用后DLBCL细胞株和原代细胞BCL6相关蛋白水平。5.流式细胞术检测DLBCL患者循环Tfh及其亚型。6.流式细胞术检测DSF/Cu对DLBCL患者Tfh的影响。结果1.BCL6基因在DLBCL女性患者比男性患者表达更高;在白种人患者比亚洲人种表达高。2.BCL6基因的高表达DLBCL患者比低表达患者预后更好。3.GO/KEGG基因富集分析显示BCL6相关基因可以富集在MAPK通路。4.免疫浸润结果显示BCL6与多种免疫细胞相关。5.DSF/Cu作用后诱导DLBCL原代细胞凋亡。6.DSF/Cu作用后诱导DLBCL原代细胞线粒体膜电位下调。7.DSF/Cu作用DLBCL细胞后,细胞株的BCL6下调,OCI-LY7和OCI-LY10的p53上调,U2932的p53下调,原代细胞的BCL6下调,BCL2上调,BCL-XL下调,BAX不变,p53上调或下调。8.DSF/Cu下调DLBCL细胞株和原代细胞BCL6相关调节蛋白AIP、LITAF。9.DSF/Cu 作用 DLBCL 细胞后,JNK 和 ERK 下调,OCI-LY7 和 U2932 的 p38 下调,OCI-LY10的p38不变,原代细胞JNK和ERK下调,p38下调不变。10.DLBCL患者循环CD4+CXCR5+Tfh增多,Tfh1亚型减少,Tfh2和Tfh17亚型增多,CD4+CXCR5-Tph减少,Tph1亚型减少,Tph17亚型增多;DLBCL患者循环CD4+PD-1+T细胞增多,Tfh及其不同亚型和Tph及其不同亚型均高表达PD-1。11.DSF/Cu 作用后,DLBCL 患者 CD4+CXCR5+Tfh、CD4+PD-1+T 细胞、CD4+CXCR5+PD-1+T 细胞,CD4+CXCR5-PD-1+T 细胞及 CD4+CXCR5+BCL6+T 细胞显著下调,CD4+CXCR5-Tph上调。结论1.DSF/Cu诱导DLBCL原代细胞凋亡,线粒体膜电位下降。2.下调BCL6相关ROS-MAPK信号通路可能是DSF/Cu抗肿瘤机制之一。3.DLBCL患者循环CD4+CXCR5+Tfh增多,Tfh2和Tfh17亚型增多,而循环CD4+CXCR5-Tph减少,其中Tph17亚型增多,Tfh及其不同亚型和Tph及其不同亚型均高表达PD-1。4.DSF/Cu可能通过抑制转录因子BCL6的表达抑制Tfh细胞分化进而干预B细胞生长过程。

关键词：双硫仑弥漫大B细胞淋巴瘤 B细胞淋巴瘤6 多种癌症基因组图谱数据库丝裂原活化蛋白激酶滤泡辅助性T细胞

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双硫仑戒酒导致酒精戒断综合征延迟诊治1例

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中国药物依赖性杂志 2022年第2期31卷 154-156,160页

作者：刘亭亭王媛王垚廖艳红李理张云沙贵明北京老年医院老年示范病房北京100095

酒精戒断综合征是酒精使用相关障碍的一种,发生于慢性酒精依赖者,由于各种原因突然减少或中断饮酒而出现的一系列精神及躯体症状。根据严重程度可表现为焦虑、出汗、震颤等轻度戒断症状,到幻觉、震颤性谵妄、酒精戒断性癫痫等严重戒断... 详细信息

酒精戒断综合征是酒精使用相关障碍的一种,发生于慢性酒精依赖者,由于各种原因突然减少或中断饮酒而出现的一系列精神及躯体症状。根据严重程度可表现为焦虑、出汗、震颤等轻度戒断症状,到幻觉、震颤性谵妄、酒精戒断性癫痫等严重戒断症状。提高对该综合征的认识具有重要的临床意义。本文报道1例患者自行使用双硫仑戒酒导致酒精戒断综合征,由于延迟诊治,进展为震颤性谵妄,并结合文献对该病发病机制、临床表现、疾病特征、治疗方法及可能预后等进行综述。

关键词：双硫仑酒精戒断综合征震颤谵妄

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双硫仑通过调控NETs生成对重症急性胰腺炎小鼠保护作用的研究

双硫仑通过调控NETs生成对重症急性胰腺炎小鼠保护作用的研究

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作者：聂迟华中科技大学

学位级别：硕士

目的:双硫仑(disulfiram,DSL)被认为具有抗炎作用,重症急性胰腺炎(Severe acute pancreatitis,SAP)是一种全身系统性炎症反应疾病,中性粒细胞胞外诱捕网(Neutrophil extracellular traps,NETs)在SAP进展中起重要作用。本研究旨在探讨双... 详细信息

目的:双硫仑(disulfiram,DSL)被认为具有抗炎作用,重症急性胰腺炎(Severe acute pancreatitis,SAP)是一种全身系统性炎症反应疾病,中性粒细胞胞外诱捕网(Neutrophil extracellular traps,NETs)在SAP进展中起重要作用。本研究旨在探讨双硫仑对SAP的疗效及其对NETs的影响。方法:C57BL/6小鼠通过腹腔连续注射10次雨蛙素(50ug/kg,每隔1小时注射1次),末次雨蛙素注射后加注1次脂多糖(10mg/kg)诱导小鼠SAP模型。实验分为5组:正常对照组(NC组),单纯双硫仑注射组(DSL组),重症急性胰腺炎造模组(SAP组),50mg/kg双硫仑预处理重症急性胰腺炎造模干预组(50DSLSAP组),100mg/kg双硫仑预处理重症急性胰腺炎造模干预组(100DSLSAP组)。通过组织病理学,RT-PCR和ELISA评估急性胰腺炎的严重程度,免疫荧光和Western blot以及ELISA检测胰腺组织和血清中NETs相关标志物的表达。同时Western blot检测胰腺组织消皮素D(Gasdermin D,GSDMD)表达。分离培养骨髓来源的中性粒细胞(Bone marrow derived neutrophils,BMDN),CCK-8测定双硫仑对BMDN活性的影响,50nmol佛波酯(Phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导产生NETs,分为5组:正常对照组(NC组),单纯双硫仑干预组(DSL组),PMA刺激组(PMA组),30μmol双硫仑干预+PMA刺激组(30DSLPMA组),60μmol双硫仑干预+PMA刺激组(60DSLPMA组)。SYTOX Green染色和ELISA检测各组细胞NETs产生以及培养基中NETs标志物MPO-DNA的水平。Western blot检测各组细胞GSDMD蛋白表达。结果:(1)各组小鼠死亡率比较,NC组和DSL组0,SAP组33.3%,50DSLSAP组和100DSLSAP组均为13.3%,双硫仑干预明显减轻了SAP小鼠的死亡率;(2)与SAP组相比,50DSLSAP组和100DSLSAP组胰腺组织水肿,炎症细胞浸润,腺泡细胞坏死,脂肪坏死和出血病理损害显著减轻,血清淀粉酶和脂肪酶水平也显著降低;(3)造模后胰腺组织炎症细胞因子IL-1β,TNF-α,IL-18 m RNA的表达明显升高,双硫仑干预明显降低了炎症细胞因子m RNA的表达,且100DSLSAP组相比于50DSLSAP组降低明显,此外,双硫仑干预减少了胰腺组织中性粒细胞的浸润;(4)SAP造模后,血清中炎症细胞因子TNF-α明显上升,双硫仑干预降低了血清中TNF-α水平,且100DSLSAP组相比于50DSLSAP组降低明显;(5)与SAP组相比较,50DSLSAP组和100DSLSAP组胰腺组织中NETs相关蛋白Cit H3、MPO、NE表达明显降低,血清中MPO-DNA含量也减少,且100DSLSAP组减少更明显;(6)双硫仑干预抑制了GSDMD蛋白表达和裂解,相较于SAP组,100DSLSAP组和50DSLSAP组FL-GSDMD和N-GSDMD蛋白抑制更显著;(7)体外实验,双硫仑对BMDN的活性无抑制作用;(8)SYTOX Green和ELISA检测显示PMA组显著诱导了NETs生成,培养基中MPO-DNA水平明显升高,相较于PMA组,30DSLPMA组和60DSLPMA组减少了NETs的生成和MPO-DNA水平,且呈浓度依赖;(9)双硫仑干预明显减少了PMA刺激下FL-GSDMD和N-GSDMD蛋白水平,双硫仑60μmol的抑制作用强于30μmol。结论:双硫仑可以通过抑制GSDMD相关的NETs生成缓解SAP。

关键词：重症急性胰腺炎双硫仑中性粒细胞胞外诱捕网消皮素D

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