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双炔酰菌胺对烟草黑胫病的防效及抗性突变株生物学特性研究

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双炔酰菌胺对烟草黑胫病的防效及抗性突变株生物学特性研究

作者：程佳雯安徽农业大学

学位级别：硕士

烟草黑胫病是由烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)引起的一种重要土传病害,每年给烟草行业带来巨大的经济损失。化学杀菌剂是当前防治烟草黑胫病的主要手段之一,但由于化学杀菌剂长期、单一、高频次的使用,黑胫病菌易对其产生抗药性。... 详细信息

烟草黑胫病是由烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)引起的一种重要土传病害,每年给烟草行业带来巨大的经济损失。化学杀菌剂是当前防治烟草黑胫病的主要手段之一,但由于化学杀菌剂长期、单一、高频次的使用,黑胫病菌易对其产生抗药性。本文测定了双炔酰菌胺对烟草疫霉菌丝生长和游动孢子萌发的抑制作用,探讨了双炔酰菌胺对烟草黑胫病的防治效果以及对烟草叶片防御酶活性和MDA含量的影响。通过对敏感亲本菌株进行抗双炔酰菌胺诱变获得抗双炔酰菌胺突变菌株,比较了烟草疫霉抗双炔酰菌胺突变菌株和敏感菌株在菌丝和孢子囊形态、产孢子囊能力、游动孢子萌发能力和致病力等生物学性状的差异。主要研究结果如下:1.双炔酰菌胺对烟草疫霉的毒力测定。室内条件下测定了双炔酰菌胺对烟草疫霉菌丝生长和游动孢子萌发的抑制作用。双炔酰菌胺对烟草疫霉菌丝生长的EC值为0.0140 mg/L;对游动孢子萌发的EC值为0.0213 mg/L。2.双炔酰菌胺对烟草黑胫病的盆栽防效及对烟草叶片防御酶活性和MDA含量的影响。盆栽试验结果表明,双炔酰菌胺对烟草黑胫病具有较好的的防治效果,其对秦烟96、延安1号、中烟100、云烟87和本氏烟的病指防效均显著高于对照药剂代森锰锌和丁吡吗啉。酶活试验结果表明,施药后7 d和14 d,双炔酰菌胺处理的烟叶SOD活性与对照药剂丁吡吗啉差异不显著,但显著高于空白对照;POD活性显著高于对照药剂代森锰锌、丁吡吗啉和空白对照;MDA含量显著低于空白对照。施药后21 d,除了本氏烟,在其他4个供试烟草品种上,双炔酰菌胺处理的SOD活性与对照药剂丁吡吗啉差异不显著,但均显著高于空白对照;在本氏烟上,双炔酰菌胺处理后的POD活性与对照药剂代森锰锌、丁吡吗啉差异不显著,但显著高于空白对照。在云烟87、中烟100、秦烟96、延安1号品种上,双炔酰菌胺处理后的POD活性均显著高于对照药剂代森锰锌和空白对照;双炔酰菌胺处理后的MDA含量显著低于对照药剂代森锰锌和空白对照。施药后28 d,双炔酰菌胺处理的SOD活性、POD活性均显著高于对照药剂代森锰锌和空白对照;MDA含量显著低于空白对照。3.双炔酰菌胺对烟草生长的影响。测定了双炔酰菌胺等杀菌剂处理后烟株的相关生长指标。试验结果表明,施用双炔酰菌胺的处理,烟株高度显著高于对照药剂代森锰锌和空白对照;烟株茎粗和有效叶片数显著高于不施药的空白对照,但与对照药剂丁吡吗啉无显著差异。4.双炔酰菌胺对烟草黑胫病的大田防效。田间防效结果表明,双炔酰菌胺对烟草黑胫病具有较好的防治效果,其对烟草黑胫病的病指防效为64.58%,显著高于对照药剂烯酰吗啉(27.90%)。5.烟草疫霉抗双炔酰菌胺突变株的诱变。通过菌丝块紫外驯化得到3株突变菌株YCHJ2-12、YCHJ5-7和YCHJ5-16,YCHJ2-12、YCHJ5-7和YCHJ5-16的抗性水平分别是敏感亲本菌株的62.99、47.06和10.11倍。经过游动孢子紫外诱导获得了2株突变菌株YCHJ2-2和YCHJ4-13,YCHJ2-2和YCHJ4-13的抗性水平分别是敏感亲本菌株的54.79和17.75倍。测定了突变菌株的抗药稳定性,发现YCHJ2-12菌株对双炔酰菌胺的抗药性能稳定在较高水平。6.烟草疫霉抗双炔酰菌胺突变株的生物学特性。比较了烟草疫霉亲本菌株与突变菌株的菌丝形态、孢子囊形态和菌落特征,发现突变菌株和敏感亲本菌株在菌丝形态、孢子囊形态上无明显差异,但突变菌株的气生菌丝比敏感亲本菌株致密。测量了各菌株的菌丝平均生长速率,发现菌株YCHJ5-16和YCHJ4-13的菌丝平均生长速率低于亲本菌株YCHJ。测定了各菌株的产孢子囊能力,发现除突变菌株YCHJ5-7的产孢子囊能力比亲本敏感菌株弱以外,其他突变菌株的产孢子囊能力均比敏感菌株强。对突变菌株的孢子囊长、宽、梗长和乳突高度进行了测定,发现突变菌株的孢子囊长、宽、乳突高度的平均值均比亲本敏感菌株大。对突变菌株的游动孢子萌发能力和致病力进行了测定,发现突变菌株游动孢子萌发能力和致病力均下降。

关键词：烟草黑胫病双炔酰菌胺防治效果酶活抗药性生物学性状

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双炔酰菌胺防治葡萄霜霉病的药效试验

中国植保导刊 2015年第10期35卷 72-74页

作者：韩梅田如海陈时健陆爽武雯张顾旭全国农业技术推广服务中心北京100125 上海市农业技术推广服务中心上海闵行201103 上海市浦东新区农业技术推广中心上海浦东201201

通过田间药效试验,考察23.4%双炔酰菌胺悬浮剂不同剂量处理对葡萄霜霉病的防治效果。发现在葡萄幼果期使用该药剂1 500~2 500倍液喷施1次,病指防效达76.30%~82.27%;在果实膨大期增施1次,病指防效达75.67%~84.26%。药后7~14 d药效稳定。

关键词：葡萄霜霉病双炔酰菌胺病情指数防效

超高效液相色谱—三重四极杆质谱法测定黄瓜中双炔酰菌胺残留

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食品与机械 2023年第11期39卷 72-78页

作者：张周莉黎东罗斯罗星宇雍萍易达南充市食品药品检验所四川南充637000

目的:建立一种超高效液相串联三重四极杆质谱检测黄瓜中双炔酰菌胺含量的方法。方法:黄瓜试样经乙腈超声提取后,采用分散固相萃取法(QuEChERS)进行净化,超纯水稀释,用0.1%甲酸水和乙腈作为流动相进行液相色谱—串联质谱测定。采取电喷雾... 详细信息

目的:建立一种超高效液相串联三重四极杆质谱检测黄瓜中双炔酰菌胺含量的方法。方法:黄瓜试样经乙腈超声提取后,采用分散固相萃取法(QuEChERS)进行净化,超纯水稀释,用0.1%甲酸水和乙腈作为流动相进行液相色谱—串联质谱测定。采取电喷雾(ESI)离子源在正离子检测模式下,对双炔酰菌胺进行多反应监测(MRM),并使用外标法进行定量。结果:在0.01~0.50μg/mL质量浓度范围内,双炔酰菌胺具有良好的线性关系,R^(2)=0.9998;在10,50,100 mg/mL 3种不同加标水平下,双炔酰菌胺回收率为89.6%~96.0%,相对标准偏差(RSD)为0.72%~1.80%(n=6)。试验方法检出限为0.003 mg/kg;定量限为0.009 mg/kg。结论:试验方法前处理过程无需浓缩,操作简便,分析灵敏度高、稳定性好、重现性高,适用于黄瓜中双炔酰菌胺的定性与定量分析。

关键词：超高效液相色谱—串联质谱(UPLC-MS) 双炔酰菌胺黄瓜

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辣椒疫霉对双炔酰菌胺的敏感性测定及其抗药突变体生物学性状研究

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农药学学报 2011年第1期13卷 21-27页

作者：赵卫松韩秀英齐永志王文桥马志强张金林张小风河北农业大学植物保护学院农药系河北保定071001 河北省农林科学院植物保护研究所河北保定071000 河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心河北保定071000

研究了辣椒疫霉对双炔酰菌胺的敏感性及其抗药性风险。采用菌丝生长速率法测定了分别采自河北定兴、藁城和山东寿光、青州等地的173株辣椒疫霉菌株对双炔酰菌胺的敏感性,结果表明,其EC50值介于0.002 7～0.049 9μg/mL之间,平均EC50值为0... 详细信息

研究了辣椒疫霉对双炔酰菌胺的敏感性及其抗药性风险。采用菌丝生长速率法测定了分别采自河北定兴、藁城和山东寿光、青州等地的173株辣椒疫霉菌株对双炔酰菌胺的敏感性,结果表明,其EC50值介于0.002 7～0.049 9μg/mL之间,平均EC50值为0.021 9±0.010 2μg/mL,敏感性呈单峰曲线分布;采用紫外诱导+菌落角变和药剂驯化的方法分别处理10个供试菌株,各获得7株和1株突变体,其抗性倍数在41.50～394 437.77之间,突变频率分别为1.46%和1.43%。对突变体部分生物学性状的研究表明,抗性突变体与其亲本菌株在菌丝生长速率、致病性、产孢能力、适合度指数和竞争力方面均具有不同程度的差异;抗性突变体DX 2-3 20m和DX 2-3 F7的产孢量、适合度和竞争力均高于亲本菌株,有利于抗性群体的形成。研究表明,辣椒疫霉对双炔酰菌胺存在中等抗性风险。

关键词：辣椒疫霉双炔酰菌胺敏感性抗性突变体生物学性状

辣椒疫霉对双炔酰菌胺抗药性生理生化机制研究

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华北农学报 2010年第6期25卷 154-159页

作者：赵卫松张小风齐永志王文桥韩秀英河北省农林科学院植物保护研究所河北保定071000 河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心河北保定071000 河北农业大学植物保护学院农药系河北保定071000

本试验对辣椒疫霉亲本菌株和抗性菌株的生理生化指标进行了测定,初步研究了辣椒疫霉对双炔酰菌胺产生抗性的机制。结果表明:辣椒疫霉亲本菌株和抗性菌株的菌丝生长受NaC l和葡萄糖影响较小,且NaC l和葡萄糖不同浓度处理后的所有菌株之... 详细信息

本试验对辣椒疫霉亲本菌株和抗性菌株的生理生化指标进行了测定,初步研究了辣椒疫霉对双炔酰菌胺产生抗性的机制。结果表明:辣椒疫霉亲本菌株和抗性菌株的菌丝生长受NaC l和葡萄糖影响较小,且NaC l和葡萄糖不同浓度处理后的所有菌株之间渗透压也均不存在显著性差异,故得知NaC l和葡萄糖均不能为疫霉菌提供营养和抑制其渗透。双炔酰菌胺低浓度处理能够使抗性菌株菌体内渗漏出较多的内含物,但随着处理时间的延长和浓度的提高内含物渗漏反而减少;亲本菌株和抗性菌株菌体内可溶性蛋白含量和β-1,3葡-聚糖酶的活力差异显著:亲本菌株菌体内的可溶性蛋白含量和β-1,3葡-聚糖酶的活力均高于抗性菌株。随着双炔酰菌胺处理时间的延长,亲本菌株和抗性菌株的可溶性蛋白含量和β-1,3葡-聚糖酶的活力都呈下降趋势。由此得出:辣椒疫霉内含物通过细胞膜外渗,致使药液在菌体内的积累减少,最终使到达作用靶标药剂的实际浓度下降;同时菌体的可溶性蛋白含量降低、β-1,3葡-聚糖酶的活力下降可能是对双炔酰菌胺产生抗性的原因。

关键词：辣椒疫霉菌双炔酰菌胺细胞膜通透性可溶性蛋白含量 β-1,3-葡聚糖酶

致病疫霉对烯酰吗啉和双炔酰菌胺的敏感性动态监测及马铃薯晚疫病田间防治药剂筛选

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农药学学报 2023年第6期25卷 1279-1287页

作者：路粉吴杰赵建江毕秋艳李洋孟润杰韩秀英王文桥河北省农林科学院植物保护研究所农业农村部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室河北省农业有害生物综合防治技术创新中心河北省作物有害生物综合防治国际科技联合研究中心河北保定071000 滨州职业学院山东滨州256603 保定职业技术学院河北保定071051

为明确马铃薯北方一季作区致病疫霉对烯酰吗啉和双炔酰菌胺的敏感性时空动态及常用药剂对马铃薯晚疫病的田间防效,采用菌丝生长速率法测定了2011—2019年采自河北、内蒙古和吉林3省(区)马铃薯主产区的922个致病疫霉菌株对烯酰吗啉和双... 详细信息

为明确马铃薯北方一季作区致病疫霉对烯酰吗啉和双炔酰菌胺的敏感性时空动态及常用药剂对马铃薯晚疫病的田间防效,采用菌丝生长速率法测定了2011—2019年采自河北、内蒙古和吉林3省(区)马铃薯主产区的922个致病疫霉菌株对烯酰吗啉和双炔酰菌胺的敏感性,采用茎叶喷雾法于2018年和2019年评估了烯酰吗啉和双炔酰菌胺等7种杀菌剂在推荐剂量下对马铃薯晚疫病的田间防效。结果表明:在时间上,不同年份采集的922株致病疫霉对烯酰吗啉的抗性频率和抗性指数分别为25.71%~100%和0.31~0.50;890株致病疫霉对双炔酰菌胺的抗性频率为0~1.43%,仅于2013年检测到抗性菌株,历年抗性指数均为0.25。在地域上,3省(区)致病疫霉菌株对烯酰吗啉的抗性频率和抗性指数分别为57.19%~66.56%和0.39~0.42;对双炔酰菌胺的抗性频率为0~0.36%,抗性指数均为0.25。田间药效试验结果显示:50%烯酰吗啉可湿性粉剂(有效成分,下同) 300.0 g/hm^(2)对马铃薯晚疫病的防治效果(83.3%~85.6%)高于23.4%双炔酰菌胺悬浮剂140.4 g/hm^(2)的防治效果(76.9%~78.6%)和50%氟醚菌酰胺水分散粒剂75.0 g/hm^(2)的防治效果(70.0%~71.4%)。20%霜脲氰悬浮剂162.0 g/hm^(2)、40%氟醚菌酰胺·烯酰吗啉悬浮剂240.0 g/hm^(2)、43%霜脲氰·双炔酰菌胺水分散粒剂290.3 g/hm^(2)和687.5 g/L氟吡菌胺·霜霉威盐酸盐悬浮剂773.4 g/hm^(2)对马铃薯晚疫病的防治效果为79.8%~86.9%。为此,推荐烯酰吗啉单剂或混剂及双炔酰菌胺混剂在河北、内蒙古和吉林3省(区)继续用于马铃薯晚疫病的防治,但是需密切监测致病疫霉对烯酰吗啉和双炔酰菌胺的敏感性变化并注意与不同作用机理的杀菌剂混用或者交替使用。

关键词：致病疫霉马铃薯晚疫病烯酰吗啉双炔酰菌胺敏感性动态防治效果

黄瓜霜霉病菌对双炔酰菌胺的敏感基线及其抗性突变体生物学性状研究

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农药学学报 2013年第5期15卷 496-503页

作者：崔继敏杨晓津赵建江王文桥孟润杰闫磊韩秀英马志强张金林张小风河北农业大学植物保护学院农药系河北保定071000 河北省农林科学院植物保护研究所河北保定071000 河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心河北保定071000 农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室河北保定071000 中国地质大学长城学院河北保定071000

为建立黄瓜霜霉病菌对双炔酰菌胺的敏感基线及评估其抗性风险，采用叶盘漂浮法测定了采自河北、山东未使用过羧酸酰胺类（CAAs）药剂地区的69株黄瓜霜霉病菌（Pseudoperonospora cubensis）对双炔酰菌胺的敏感性，并对黄瓜霜霉病菌抗双... 详细信息

为建立黄瓜霜霉病菌对双炔酰菌胺的敏感基线及评估其抗性风险，采用叶盘漂浮法测定了采自河北、山东未使用过羧酸酰胺类（CAAs）药剂地区的69株黄瓜霜霉病菌（Pseudoperonospora cubensis）对双炔酰菌胺的敏感性，并对黄瓜霜霉病菌抗双炔酰菌胺突变体的获得方法及突变体的生物学性状进行了研究。结果表明：69株黄瓜霜霉病菌对双炔酰菌胺的平均EC50值为（0．358±0．144）μg／mL，不同敏感性菌株的频率呈连续单峰曲线分布，未发现敏感性下降的亚群体，因此可将其作为黄瓜霜霉病菌对双炔酰菌胺的敏感基线；通过药剂驯化的方法未获得黄瓜霜霉病菌抗双炔酰菌胺的突变体；而通过紫外诱导的方法获得了6个抗双炔酰菌胺的突变体，其抗性水平介于5．74～22．96倍之间，突变频率为1．09×10^-7，适合度显著低于其亲本菌株，且抗药性不能稳定遗传；双炔酰菌胺与甲霜灵、嘧菌酯、霜脲氰、氟吡菌胺之间无交互抗性关系，与烯酰吗啉之间有交互抗性关系。据此推测黄瓜霜霉病茵对双炔酰茵胺的抗性风险为低到中等。

关键词：黄瓜霜霉病菌双炔酰菌胺敏感性紫外线诱变抗性菌株生物学性状

山东省和河北省黄瓜霜霉病菌对烯酰吗啉及双炔酰菌胺的抗性监测

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植物病理学报 2018年第5期48卷 666-674页

作者：路粉吴杰王会君孟润杰赵建江韩秀英马志强王文桥河北省农林科学院植物保护研究所河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室保定071000 保定职业技术学院保定071051

为明确黄瓜霜霉病菌对烯酰吗啉及双炔酰菌胺的抗性时空动态及这两种药剂对黄瓜霜霉病的田间防效,采用叶盘漂浮法检测了2011～2016年采自河北省和山东省黄瓜主产区的霜霉病菌1 821个菌株对烯酰吗啉及双炔酰菌胺的敏感性,并采用茎叶喷雾... 详细信息

为明确黄瓜霜霉病菌对烯酰吗啉及双炔酰菌胺的抗性时空动态及这两种药剂对黄瓜霜霉病的田间防效,采用叶盘漂浮法检测了2011～2016年采自河北省和山东省黄瓜主产区的霜霉病菌1 821个菌株对烯酰吗啉及双炔酰菌胺的敏感性,并采用茎叶喷雾法对这两种药剂的田间防效进行评估。结果表明:黄瓜霜霉病菌1 821个菌株对烯酰吗啉和双炔酰菌胺抗性频率分别为88.5%和34.3%,供试菌株中对烯酰吗啉的低抗菌株及对双炔酰菌胺的敏感菌株占优势,平均抗性倍数分别为8.92和2.44,抗性指数分别为0.42和0.27。黄瓜霜霉病菌对这两种药剂的抗性频率、抗性倍数及抗性指数随着监测年限及地域的不同而波动。在河北定兴和山东寿光日光温室进行的田间药效试验中,按照药剂田间推荐剂量喷施4次,50%烯酰吗啉可湿性粉剂和250 g·L^(-1)双炔酰菌胺悬浮剂对黄瓜霜霉病表现出良好的防效(85%以上),与两地黄瓜霜霉病菌对烯酰吗啉产生低抗、对双炔酰菌胺敏感的监测结果一致。由此推断,50%烯酰吗啉可湿性粉剂和250 g·L^(-1)双炔酰菌胺悬浮剂可在对甲霜灵(或精甲霜灵)、噁霜灵及嘧菌酯普遍产生抗性的地区,作为58%甲霜灵·代森锰锌WP、68%精甲霜灵·代森锰锌WG、64%噁霜灵·代森锰锌WP和250 g·L^(-1)嘧菌酯SC的替代药剂单独使用或与不同作用机理的杀菌剂混用,防治黄瓜霜霉病。

关键词：黄瓜霜霉病菌烯酰吗啉双炔酰菌胺抗性防效

辣椒疫霉对双炔酰菌胺敏感性及对其它杀菌剂的交互抗性

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植物保护学报 2011年第2期38卷 173-177页

作者：韩秀英赵卫松齐永志王文桥马志强张小风河北省农林科学院植物保护研究所河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心保定071000 河北农业大学植物保护学院保定071000

采用菌丝生长速率法测定了不同地区115个辣椒疫霉菌株对双炔酰菌胺的敏感性,同时测定了紫外诱导和药剂驯化的10个抗性突变体及其4个亲本菌株对双炔酰菌胺、烯酰吗啉、甲霜灵、嘧菌酯和霜脲氰的敏感性。山东青州、寿光和河北定兴、藁城4... 详细信息

采用菌丝生长速率法测定了不同地区115个辣椒疫霉菌株对双炔酰菌胺的敏感性,同时测定了紫外诱导和药剂驯化的10个抗性突变体及其4个亲本菌株对双炔酰菌胺、烯酰吗啉、甲霜灵、嘧菌酯和霜脲氰的敏感性。山东青州、寿光和河北定兴、藁城4地辣椒疫霉菌株均对双炔酰菌胺较敏感,且敏感性差异不显著。不同抗性水平菌株对5种药剂的敏感性测定和相关性分析结果显示,双炔酰菌胺与其它几类药剂之间均不存在交互抗性。10个抗性突变体继代培养11代后,8个抗性突变体抗药性不能稳定遗传;2个抗性突变体抗药性不仅能够稳定遗传,且EC50值维持在很高水平,分别为1 429.524μg/mL和6 872.476μg/mL,因此,双炔酰菌胺的连续使用有利于抗药群体的发展。

关键词：辣椒疫霉菌双炔酰菌胺敏感性交互抗性遗传稳定性