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中国造纸学报 2004年第Z1期19卷 315-317页

作者：姜静李慧玉董京祥东北林业大学林学院哈尔滨150040 东北林业大学林学院哈尔滨150040 东北林业大学林学院哈尔滨150040

本文通过对樟子松正常枝和突变体丛生枝进行蛋白质双向电泳实验,研究其突变体丛生枝的发生机理,并利用2-DE计算机分析系统对结果进行定性、定量分析.结果表明,共有59个蛋白点在表达的质和量上有变化,其中35个蛋白点在突变枝2-DE图谱中... 详细信息

本文通过对樟子松正常枝和突变体丛生枝进行蛋白质双向电泳实验,研究其突变体丛生枝的发生机理,并利用2-DE计算机分析系统对结果进行定性、定量分析.结果表明,共有59个蛋白点在表达的质和量上有变化,其中35个蛋白点在突变枝2-DE图谱中表达量均高于正常枝的蛋白点,20个蛋白点在突变枝2-DE图谱中表达量均低于正常枝的蛋白点,4个蛋白点在突变枝图谱上发生缺失.从而证明差异表达的蛋白点可能与突变丛生枝的发生有关.

关键词：樟子松突变丛生枝双向蛋白电泳

洋葱伯克霍尔德菌外膜蛋白双向电泳的建立与优化

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生物技术 2010年第5期20卷 45-47页

作者：蔡芙蓉高媛媛舒正玉李力黄建忠工业微生物教育部工程研究中心福建师范大学生命科学学院福建省现代发酵技术工程研究中心福建福州350108

目的:洋葱伯克霍尔德菌外膜蛋白的分离及双向电泳图谱的建立和优化。方法:用月桂酰基氨酸钠法提取外膜蛋白,以固相pH梯度为第一向和SDS-PAGE为第二向进行双向电泳,对裂解液成分,IPG胶条的pH和凝胶染色方法等进行优化。结果:获得外膜蛋... 详细信息

目的:洋葱伯克霍尔德菌外膜蛋白的分离及双向电泳图谱的建立和优化。方法:用月桂酰基氨酸钠法提取外膜蛋白,以固相pH梯度为第一向和SDS-PAGE为第二向进行双向电泳,对裂解液成分,IPG胶条的pH和凝胶染色方法等进行优化。结果:获得外膜蛋白浓度为2.87μg/μl;最佳裂解液成分为:7mol/L尿素,2mol/L硫脲,4%Chaps,2%pharmalyte,65mmol/LDTT,0.5%TritonX-100,10mmol/LTris。结论:提取的外膜蛋白满足双向电泳条件;获得理想的外膜蛋白双向电泳图谱用于后续实验中。

关键词：洋葱伯克霍尔德菌外膜蛋白双向蛋白电泳

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生物技术 2004年第1期14卷 35-37页

作者：李慧玉董京祥姜静东北林业大学林学院黑龙江哈尔滨150040

目的 :研究樟子松突变丛生枝的发生机理。方法 :对其正常枝和突变丛生枝进行蛋白质双向电泳 ,通过ImageMaster2 -DE计算机分析系统对结果进行定性、定量分析。结果 :共有 5 9个蛋白点在表达的质和量上有变化 ,其中 35个蛋白点在突变丛生... 详细信息

目的 :研究樟子松突变丛生枝的发生机理。方法 :对其正常枝和突变丛生枝进行蛋白质双向电泳 ,通过ImageMaster2 -DE计算机分析系统对结果进行定性、定量分析。结果 :共有 5 9个蛋白点在表达的质和量上有变化 ,其中 35个蛋白点在突变丛生枝 2 -DE图谱中表达量均高于正常枝的蛋白点 ,2 0个蛋白点在突变丛生枝 2 -DE图谱中表达量均低于正常枝的蛋白点 ,4个蛋白点在突变丛生枝图谱上发生缺失。结论 :差异表达的蛋白点可能与突变丛生枝的发生有关。

关键词：樟子松突变丛生枝双向蛋白电泳蛋白质

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樟子松突变丛生枝蛋白质的双向电泳分析

2004中国科协学术年会第十一分会

作者：姜静李慧玉董京祥东北林业大学林学院东北林业大学林学院东北林业大学林学院

本文通过对樟子松正常枝和突变体丛生枝进行蛋白质双向电泳实验,研究其突变体丛生枝的发生机理,并利用2-DE计算机分析系统对结果进行定性、定量分析。结果表明,共有59个蛋白点在表达的质和量上有变化,其中35个蛋白点在突变枝2-DE图谱中... 详细信息

本文通过对樟子松正常枝和突变体丛生枝进行蛋白质双向电泳实验,研究其突变体丛生枝的发生机理,并利用2-DE计算机分析系统对结果进行定性、定量分析。结果表明,共有59个蛋白点在表达的质和量上有变化,其中35个蛋白点在突变枝2-DE图谱中表达量均高于正常枝的蛋白点,20个蛋白点在突变枝2-DE图谱中表达量均低于正常枝的蛋白点,4个蛋白点在突变枝图谱上发生缺失。从而证明差异表达的蛋白点可能与突变丛生枝的发生有关。

关键词：樟子松突变丛生枝双向蛋白电泳

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樟子松突变丛生枝蛋白质的双向电泳分析

脂代谢相关三基因突变小鼠模型动脉粥样硬化机理研究—蛋白质组学分析

中国林学会2004年年会

作者：姜静李慧玉董京祥东北林业大学林学院东北林业大学林学院东北林业大学林学院

关键词：樟子松突变丛生枝双向蛋白电泳

来源： cnki会议评论

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脂代谢相关三基因突变小鼠模型动脉粥样硬化机理研究—蛋白质组学...

作者：金晓蕾浙江大学

学位级别：硕士

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是由多种因素和作用环节介导的慢性病理变化过程,其发生发展与多基因异常以及遗传因素与环境因素的相互作用有关。深入研究AS关键基因、AS易感基因等重要遗传因素之间的相互作用机理以及环境因素对 A... 详细信息

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是由多种因素和作用环节介导的慢性病理变化过程,其发生发展与多基因异常以及遗传因素与环境因素的相互作用有关。深入研究AS关键基因、AS易感基因等重要遗传因素之间的相互作用机理以及环境因素对 AS的影响,有助于进一步阐明AS的发生机制,为AS的预防和治疗提供有益的理论依据与研究平台。目前对AS发病机制的研究重点已从单基因、单因素向多基因、多因素方向发展。本实验室首次成功建立了三基因突变(apoE/LDLR/Lepr小鼠模型,并从遗传因素和环境因素(高脂高胆固醇饮食)入手,对该小鼠的生物学特征、发生AS的病理生理特点以及AS发生机制进行了分子生物学和分子病理学研究。在前期研究结果的基础上,本论文进一步研究了三基因突变时基因与基因以及基因与环境间的相互作用对血脂、血糖及血浆中主要脂蛋白成分含量的变化、脂代谢重要器官肝脏的病理形态学改变的影响,探讨了肝脏中重要差异蛋白表达的变化规律,并且分析了上述变化与AS发生发展的关系,现得出以下结果: 1.血浆TC、TG、LDL—C水平的变化:5w龄普通饮食组ALO小鼠的TC水平为21.26+***,略高于其他基因型小鼠;高脂高胆固醇饮食组ALO小鼠的。TC水平为110.51士12.99 mM,显著高于其他基因型小鼠。7w龄起,两种饮食喂养的ALO 小鼠的TC水平均显著高于其他基因型小鼠。两种饮食喂养的ALO小鼠各年龄段的 TG水平都略高于其他基因突变小鼠。ALO小鼠的LDL-C水平与TC的变化相似,且差异显著性更明显。血浆GLU水平的变化:两种饮食喂养的DB、ALO小鼠与WT 小鼠相比有明显增加,A、L、AL小鼠与WT小鼠相比无差异。饮食性因素对小鼠 GLU水平的影响不明显。血浆HDL-C水平的变化:普通饮食喂养时,DB、ALO小鼠的HDL-C水平与WT小鼠相比有明显增加,A、L、AL小鼠与WT小鼠相比无差异:高脂高胆固醇饮食喂养时,A、L、AL、DB、ALO小鼠的HDI-C水平都较WT 小鼠有明显升高,ALO小鼠升高得尤为明显。高脂高胆固醇饮食促进了高脂血症和AS的发生。各年龄时期高脂高胆固醇饮食组的ALO小鼠各项血浆生化检测指标均高于普通饮食组。且高脂高胆固醇饮食组的 TC、HDL-C、LDL-C水平均在5w龄时达到最高,TG水平保持上升趋势,GLU水平略有升高,但不显著。

关键词：三基因突变(apoE-/-/LDLR-/-/Leprdb/db)小鼠动脉粥样硬化高脂高胆固醇饮食肝脏双向蛋白电泳质谱差异表达蛋白质组学

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高产色素红曲菌的筛选鉴定及碳源调控研究

高产色素红曲菌的筛选鉴定及碳源调控研究

作者：杨雪灵福建农林大学

学位级别：硕士

红曲色素是红曲菌的次级代谢产物,是具有一定营养和药理作用的天然色素。福建省是我国盛产红曲的主要省份之一,其中以古田红曲最负盛名,是福建省本土特色资源,对其深入研究、充分开发、合理利用,必然会对我省经济的快速发展产生重要影... 详细信息

红曲色素是红曲菌的次级代谢产物,是具有一定营养和药理作用的天然色素。福建省是我国盛产红曲的主要省份之一,其中以古田红曲最负盛名,是福建省本土特色资源,对其深入研究、充分开发、合理利用,必然会对我省经济的快速发展产生重要影响。红曲菌种的产色能力普遍较低,是限制红曲色素广泛使用的主要原因之一。因此,很多学者都致力于筛选高产色素菌株,优化培养条件以提高色素产量,但对其提高机理的研究还相对较少。本研究首先从福建南平、三明、龙岩、古田等地的红曲米中筛选到20株红曲菌,经过液体发酵测定其胞内外的总色价,得到一株产色素能力较高的菌株a3。通过形态学鉴定和分子生物学鉴定相结合的方法,确定该目标菌株为紫色红曲菌(Monascus purpureus)。其次,对菌株a3进行液态发酵条件优化。分别以甘油、大米粉、燕麦粉、蔗糖、可溶性淀粉和α-乳糖作为碳源,以蛋白胨、大豆粉、酵母粉和硝酸钠作为氮’源,研究结果表明甘油和蛋白胨是菌株a3液态发酵的最适碳、氮源。以甘油、蛋白胨、温度分别取三个水平,以胞内外的总色价为评价指标,进行三因素三水平的正交实验。正交实验结果表明,三个因素对a3液态发酵产色素的影响大小为:甘油添加量>蛋白胨添加量>温度,其中,甘油和蛋白胨的添加量对胞内外总色价的影响达显著水平,而温度对其影响未达显著水平。最优的组合方案是A2B2C2即甘油的添加量8%、蛋白胨的添加量1.5%、温度32℃。单因素结果表明,a3最适发酵时间9d、转速180r/min、接种量6%、装液量100mL/250mL锥形瓶。最后,提取菌株a3在不同碳源调控下的全菌蛋白,利用双向电泳技术比对其差异蛋白,通过生物质谱鉴定出差异蛋白,鉴定成功的27个差异蛋白质主要是与氨基酸的生物合成、蛋白质的翻译、氧化还原有关的酶、糖酵解等相关的酶,其中18种蛋白表达上调,9种蛋白表达下调。

关键词：红曲菌色素双向蛋白电泳差异蛋白质谱

1. 肽链延伸因子的表达特征 2. 脂代谢相关基因小鼠肝脏差异表达蛋白研究

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1. 肽链延伸因子的表达特征 2. 脂代谢相关基因小鼠肝脏差异表达...

作者：宋兴辉浙江大学

学位级别：硕士

肽链延长因子(Peptide elongation factors，eEF1A)是蛋白质生物合成过程中不可缺少的特异蛋白质因子，具有调节蛋白合成及促发凋亡等多种作用。我们的前期工作显示，eEF1A-1的异构体eEF1A-2具有在神经元和肌细胞发育中替代前者表达的... 详细信息

肽链延长因子(Peptide elongation factors，eEF1A)是蛋白质生物合成过程中不可缺少的特异蛋白质因子，具有调节蛋白合成及促发凋亡等多种作用。我们的前期工作显示，eEF1A-1的异构体eEF1A-2具有在神经元和肌细胞发育中替代前者表达的特征。eEF1A-2基因突变小鼠有神经、肌肉和免疫系统发育异常，并于4周龄死亡，提示eEF1A-2和eEF1A-1有类似生物学功能，且eEF1A-2对出生后的小鼠神经、肌肉系统的发育、成熟起重要作用。为了分析两种蛋白在不同发育阶段的小鼠大脑神经细胞中的原位分布及表达特点，以探讨其与终末分化细胞生理功能维持的关系，本文应用Western blot检测和组织免疫荧光技术，对两基因型小鼠进行了比较研究，得出以下结论：在野生型小鼠神经细胞中，随着发育进展eEF1A-2蛋白的表达水平逐渐升高，并在出生后26天，完全取代了eEF1A-1的表达。突变型(eEF1A-2(?))小鼠完全缺失eEF1A-2的表达并在出生后第21d出现头部振颤、肌肉萎缩、体重减轻以及多脏器发育不全，且均在发育到28d时死亡。突变型(eEF1A-2(?))小鼠神经元中eEF1A-1的时空表达特点基本与野生型小鼠一致，该小鼠尽管缺失eEF1A-2基因，但神经元中eEF1A-1的表达水平和时相未受影响，表明此种组织特异性的调节开关的功能不受eEF1A-2是否表达以及其表达水平的影响，说明体内存在不依赖于eEF1A-2的eEF1A-1表达调控机制。eEF1A-2基因突变小鼠神经和肌肉组织功能异常的发生时期与eEF1A-1蛋白表达明显下降的时期相吻合，提示eEF1As在维持相关组织的蛋白合成等多种生物学功能中的重要性。动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是一种慢性病理变化过程，其发生发展与多基因异常以及遗传因素与环境因素的相互作用有关。深入研究AS关键基因、易感基因等重要遗传因素之间的相互作用机理以及环境因素对AS的影响，有助于进一步阐明AS的发生机制，为AS的预防和治疗提供有益的理论依据与研究平台。目前对AS发病机制的研究重点已从单基因、单因素向多基因、多因素方向发展。本实验室首次成功建立了三基因突变(apoE(?)／LDLR(?)／Lepr)小鼠模型，并从遗传因素和环境因素(高脂高胆固醇饮食)入手，对该小鼠的生物学特征、发生AS的病理生理特点以及AS发生机制进行了分子生物学和分子病理学研究。在前期研究结果的基础上，本论文探讨了肝脏中重要差异蛋白表达的变化

关键词：肽链延长因子 western印迹法免疫荧光三基因突变(apoE-/-/LDLR-/-/Leprdb/db)小鼠动脉粥样硬化双向蛋白电泳质谱差异表达蛋白质组学

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玉米秸秆水解液脱毒与丁醇发酵研究

玉米秸秆水解液脱毒与丁醇发酵研究

作者：谢瑶嬛河南农业大学

学位级别：硕士

利用废弃玉米秸秆发酵产丁醇在生物质转化领域具有明显优势,一方面生物能源的生产利于缓解石油能源紧缺所带来的危机,另一方面解决了粮食农作物残料的任意丢弃和焚烧造成的环境问题。为解除玉米秸秆水解液中多种有毒物对微生物生长的抑... 详细信息

利用废弃玉米秸秆发酵产丁醇在生物质转化领域具有明显优势,一方面生物能源的生产利于缓解石油能源紧缺所带来的危机,另一方面解决了粮食农作物残料的任意丢弃和焚烧造成的环境问题。为解除玉米秸秆水解液中多种有毒物对微生物生长的抑制及对发酵产量的影响,本研究分别用酶法复合脱毒和原位脱毒对玉米秸秆水解液发酵产丁醇的影响进行探究,具体研究内容如下:(1)构建了玉米秸秆水解液物理与酶法复合脱毒技术体系。首先探究了三种简便理化脱毒法对抑制物去除率及丁醇产量的影响,结果显示活性炭的效果最优,丁醇与ABE产量相较于对照组分别提升165.79%和158.33%。通过优化漆酶和甲酸脱氢酶添加量以去除水解液中酚类和甲酸,单独添加漆酶5 U/mL、甲酸脱氢酶1 U/mL,水解液发酵的总溶剂产量分别为0.93 g/L和0.11 g/L,相较于对照组分别提高了77.59%和60.87%。在此基础上,在活性炭的辅助下形成高效酶法复合脱毒体系,经复合脱毒处理的水解液发酵后丁醇产量达2.90 g/L,总溶剂产量达到4.4 g/L,比未作处理的对照组发酵产量高出约5倍,实现了生物质的高效转化。(2)研究了玉米秸秆水解液培养基中CaCO和NaBH的添加对丙酮丁醇梭菌发酵产丁醇的影响,添加5 g/L CaCO丁醇产量提高近3倍。通过对水解液中不同时间段有毒抑制物含量进行研究,发现CaCO的添加对于抑制物含量没有明显影响。由此,我们对CK组(未添加CaCO)和SY组(添加CaCO)的菌体蛋白进行双向凝胶电泳,从PAGE胶中选取24个高差异点进行扣点和MALDI-TOF/MS测序,结果得到30种蛋白,其中有16种蛋白参与碳水化合物代谢和能量代谢,并且有73.33%和60%的蛋白分别具有催化活性和结合活性。在SY组图上,有25种为上调蛋白,其余为下调蛋白。在上调的蛋白中如丙酮酸激酶、黄素氧化还原蛋白、乙酰乙酰辅酶A转移酶和铁硫蛋白都影响着产酸产醇途径或是电子的传递而间接影响着溶剂产量。

关键词：玉米秸秆水解液丁醇发酵酶法脱毒 CaCO3 双向蛋白电泳