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三氯乙烯诱发L-02肝细胞毒的双向电泳分析及质谱鉴定

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中华预防医学杂志 2005年第3期39卷 175-178页

作者：黄海燕刘建军庄志雄李习艺徐新云卫秦芝杨晓华深圳市疾病预防控制中心食品毒理科广东518020 深圳市疾病预防控制中心微生物检验科广东518020

目的分析三氯乙烯对L02肝细胞蛋白质表达的影响。方法利用噻唑蓝比色法和锥虫蓝拒染法,确定三氯乙烯的剂量反应关系,建立L02肝细胞染毒模型,提取细胞总蛋白,双向电泳分离蛋白质组成分,找出三氯乙烯处理后表达有差别的蛋白斑点,用基质辅... 详细信息

目的分析三氯乙烯对L02肝细胞蛋白质表达的影响。方法利用噻唑蓝比色法和锥虫蓝拒染法,确定三氯乙烯的剂量反应关系,建立L02肝细胞染毒模型,提取细胞总蛋白,双向电泳分离蛋白质组成分,找出三氯乙烯处理后表达有差别的蛋白斑点,用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱进行鉴定。结果当三氯乙烯浓度达到30μmol/L时,L02肝细胞增殖抑制率明显升高。选用40μmol/L三氯乙烯染毒的L02肝细胞及其对照细胞进行双向电泳,获得分辨率高、重复性好的电泳图谱。结果表明,三氯乙烯染毒的L02肝细胞蛋白点表达量升高2倍以上的有37个,蛋白点减少至1/2以下的有15个。利用质谱技术对差异蛋白点进行鉴定,肽质量指纹图谱初步鉴定了4个蛋白,肽质量指纹图谱和串联质谱进一步确定了11个蛋白。结论三氯乙烯能引起L02肝细胞蛋白表达改变。

关键词：三氯乙烯 L-02 肝细胞毒双向电泳分析质谱鉴定肽质量

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沙田柚自交、异交花粉管蛋白双向电泳分析

广西植物 2004年第6期24卷 566-569,523页

作者：秦新民李惠敏薛妙男杨继华广西师范大学生命科学学院广西桂林541004

比较分析了沙田柚自交、异交花粉管蛋白的双向电泳图谱 ,两者的蛋白分布格局相似 ,具有重叠性 ,可分辨出 2 0 0多个蛋白点。在异交花粉管电泳图谱中发现了 1种特异蛋白 (A) ,A蛋白 (MrA =5 8.2 ,pI=5 9) ;在自交花粉管电泳图谱中发现... 详细信息

比较分析了沙田柚自交、异交花粉管蛋白的双向电泳图谱 ,两者的蛋白分布格局相似 ,具有重叠性 ,可分辨出 2 0 0多个蛋白点。在异交花粉管电泳图谱中发现了 1种特异蛋白 (A) ,A蛋白 (MrA =5 8.2 ,pI=5 9) ;在自交花粉管电泳图谱中发现了 2种特异蛋白 (B、C) ,B蛋白 (MrB =2 6.4,pI=6.1 ) ,C蛋白 (MrC =2 8 0 ,pI=6.3) 。

关键词：花粉管自交不亲和沙田柚特异蛋白异交双向电泳图谱分布格局 C蛋白双向电泳分析发现

羊水粘多糖双向电泳分析及其在粘多糖贮积症产前诊断中的应用

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上海医学 1989年第3期12卷 153-156页

作者：李善国王佩兰吴文彦上海市第六人民医院医学遗传研究室

采用醋酸纤维薄膜双向电泳,对20例正常妊娠中期羊水粘多糖作了分析,发现仅出现硫酸软骨素和透明质酸两种组份。2例粘多糖贮积症高危孕妇的羊水检查结果还显示硫酸皮肤素和硫酸乙酰肝素两种异常组份,分别诊断为粘多糖贮积症Ⅰ型和Ⅱ型,... 详细信息

采用醋酸纤维薄膜双向电泳,对20例正常妊娠中期羊水粘多糖作了分析,发现仅出现硫酸软骨素和透明质酸两种组份。2例粘多糖贮积症高危孕妇的羊水检查结果还显示硫酸皮肤素和硫酸乙酰肝素两种异常组份,分别诊断为粘多糖贮积症Ⅰ型和Ⅱ型,并经流产胎儿肝组织超微结构检查证实。该方法具有分辨率高、操作简单、省时、省费用等优点,适宜临床应用。

关键词：粘多糖双向电泳分析产前诊断

一种省时高效的木本植物蛋白双向电泳分析方法

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北京林业大学学报 1999年第5期21卷 7-10页

作者：谷瑞升刘群录陈雪梅蒋湘宁北京林业大学生物学院森林生物学实验中心北京100083 男 34岁博士副研究员

对蛋白提取方法进行改良并引用毛细管等电聚焦技术，不仅大大降低了木本植物体内次生代谢物质对双向电泳结果的干扰，明显改善了分析效果，而且又经济、快捷，获得了分析木本植物蛋白较好的双向电泳方法．在对毛白杨叶片和胡杨组织分析... 详细信息

对蛋白提取方法进行改良并引用毛细管等电聚焦技术，不仅大大降低了木本植物体内次生代谢物质对双向电泳结果的干扰，明显改善了分析效果，而且又经济、快捷，获得了分析木本植物蛋白较好的双向电泳方法．在对毛白杨叶片和胡杨组织分析中获得较满意的结果．

关键词：木本植物蛋白双向电泳分析杨树

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低磷胁迫下油菜幼苗根系蛋白双向电泳分析

低磷胁迫下油菜幼苗根系蛋白双向电泳分析

作者：王哲郑州大学

学位级别：硕士

油菜是一种重要的油料经济作物，磷素是维持其正常生长发育的重要营养元素之一，通过研究发现，土壤中能被植物吸收利用的磷素十分缺乏，在缺磷影响下,油菜的优势很难得到发挥，成为制约油菜品质和产量的重要原因。目前，通过施加磷肥... 详细信息

油菜是一种重要的油料经济作物，磷素是维持其正常生长发育的重要营养元素之一，通过研究发现，土壤中能被植物吸收利用的磷素十分缺乏，在缺磷影响下,油菜的优势很难得到发挥，成为制约油菜品质和产量的重要原因。目前，通过施加磷肥来缓解土壤中磷素缺乏的现状，但是，仅植物根系附近的磷素得到了有效利用，大部分磷素遗留在土壤中造成磷素的浪费并引起环境的污染。因此研究油菜在磷胁迫下的响应机制并挖掘磷高效油菜品种成为研究的热点。目前，主要利用基因组学对油菜响应磷胁迫的机制进行研究，蛋白质是生物生理功能和生命现象的执行者，而且蛋白质是细胞、器官和组织的重要组成部分，应用蛋白质组学，可以从整体的角度对油菜响应磷胁迫的综合机制进行研究。本实验以甘蓝型油菜中油杂9号为实验材料，优化油菜幼苗水培方法，观察低磷胁迫下油菜幼苗根系的形态学变化，建立并优化油菜幼苗根系蛋白的提取体系,利用优化后的自制管状胶双向电泳技术体系获取不同磷素浓度胁迫下油菜幼苗根系的凝胶图谱并进行分析，为后续低磷胁迫下油菜幼苗相关分子机理的研究奠定基础。主要研究内容如下:1、低磷胁迫下，油菜幼苗根系形态在水培体系中发生明显变化。低磷胁迫下油菜幼苗的主根变细变长，而侧根和根毛的数量增加，低磷处理下的油菜幼苗根系呈现红棕色，而且随着处理时间的延长颜色逐渐加深。说明，油菜幼苗根系通过形态变化增加根系与营养液的接触面积，提高对磷素的吸收和利用来适应低磷环境。2、优化了的自制管状胶双向电泳体系。采用TCA-丙酮沉淀法优于直接研磨法，裂解液为7M尿素裂解液（7M尿素，4%Chaps，2M硫脲），最佳上样量为400μg/胶条。获得了蛋白丰度高、背景清晰、聚焦合适的的双向电泳凝胶图谱。3、利用上述双向电泳体系，对不同剂量磷素浓度胁迫下的油菜幼苗根系蛋白进行双向电泳分析，获得的凝胶图谱重复性较好，差异蛋白表达稳定。结果显示，当营养液中磷素浓度降低为对照营养液中磷素浓度的1/2、1/4和0时，处理4天后油菜幼苗根系凝胶图谱与足磷对照之间的相关系数分别是0.764、0.713、0.673，其中表达显著上调的蛋白点分别为24个,21个和24个，经过软件和手动分析最终确定其中表达量均显著上调的蛋白点为10个;表达显著下调的蛋白点分别为20个,19个和17个，经过软件和手动分析最终确定其中表达量均显著下调的蛋白点为8个。通过对不同磷素浓度胁迫下的油菜幼苗根系进行差异蛋白表达的分析，一定程度上避免了双向电泳操作中偶然性因素造成的波动性，通过软件和手动分析最终确定了响应低磷胁迫的相关蛋白，为后续工作中差异蛋白的同源性分析和核酸水平的验证奠定了良好基础。

关键词：油菜幼苗水溶液培养低磷胁迫根系蛋白双向电泳分析

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家蚕核型多角体病毒结构多肽的双向电泳分析

Virologica Sinica 1988年第1期 87-93页

作者：刘定干李载平中国科学院上海生物化学研究所中国科学院上海生物化学研究所上海

用等电聚焦-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳的双向电泳法和银染色方法,分析了家蚕核型多角体病毒粒子和核衣壳的结构多肽。该病毒单粒包埋型病毒粒子含约96种多肽,核衣壳含约72种多肽。病毒粒子制剂和核衣壳制剂中含有较多量的分子量为31K的多... 详细信息

用等电聚焦-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳的双向电泳法和银染色方法,分析了家蚕核型多角体病毒粒子和核衣壳的结构多肽。该病毒单粒包埋型病毒粒子含约96种多肽,核衣壳含约72种多肽。病毒粒子制剂和核衣壳制剂中含有较多量的分子量为31K的多肽,用蔗糖梯度离心、离心洗涤、碱处理甚至蛋白酶酶解和去污剂处理,都不能将其除去。向病毒制剂中加入纯化的多角体蛋白后作双向电泳,发现外加多角体蛋白改变原等电点面与上述31K多肽重合。对31K多肽的来源进行了讨论。

关键词：核衣壳蛋白制剂多肽病毒粒子病毒体家蚕核型多角体病毒双向电泳分析多角体分子量标准 BmNPV

缺铁逆境胁迫下水稻叶蛋白质组的双向电泳分析

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首都师范大学学报（自然科学版） 2004年第3期25卷 46-51页

作者：柴小清靳飞张艳萍卫功宏印莉萍首都师范大学生物系北京100037 中国协和医科大学基础医学院北京100005

水稻幼苗经缺铁胁迫诱导处理 1、3、5d后 ,用酚法和TCA 丙酮法提取叶的可溶性蛋白 ,进行双向电泳 (2 DE)分析 .结果显示 :(1 )三种缺铁胁迫的可溶性蛋白 ,在不同的pH范围中 2 DE图谱上的比较 .使用pH3～ 1 0宽范围、线性 (L)的IPG胶... 详细信息

水稻幼苗经缺铁胁迫诱导处理 1、3、5d后 ,用酚法和TCA 丙酮法提取叶的可溶性蛋白 ,进行双向电泳 (2 DE)分析 .结果显示 :(1 )三种缺铁胁迫的可溶性蛋白 ,在不同的pH范围中 2 DE图谱上的比较 .使用pH3～ 1 0宽范围、线性 (L)的IPG胶条 ,经电泳分离后利用Z3图象分析软件 ,可在SDS PAGE凝胶上检测到 4 5 0个左右的蛋白点 ,酸性蛋白占 89% .选用pH4～ 7窄范围、线性 (L)的IPG胶条 ,经电泳后可在SDS PAGE凝胶上检测到 6 0 0个左右的蛋白点 ,其中缺铁诱导上调表达的有 2 9个点 ,减弱表达的有 1个点 ,诱导特异表达的有 5个点 .(2 )不同方法提取可溶性蛋白的差异 .酚法提取的蛋白再溶性好 ,纯度较高 .TCA 丙酮法简单易操作 ,蛋白损耗少 ,在 2 DE图象上 ,碱性端显示的蛋白点较多 ,但此法的缺点是再溶性差 ,对 2

关键词：可溶性蛋白 2-DE 白质诱导缺铁胁迫表达双向电泳分析叶蛋白水稻 SDS-PAGE

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水稻种子蛋白质组分的双向电泳分析

作物学报 1987年第1期 63-68页

作者：孙崇荣李育庆汪景长朱俭复旦大学生物化学专业

本文对双向电泳技术作了一些改进,应用于水稻种子胚乳及胚蛋白的组分分析,获得了较清晰而稳定的结果。水稻(Oryza sativa.L)品种珍汕97的胚乳蛋白可分析出约100种成分,而胚蛋白可分析出约550种成分,检测灵敏度为0.2μg 蛋白质/mm~2。通... 详细信息

本文对双向电泳技术作了一些改进,应用于水稻种子胚乳及胚蛋白的组分分析,获得了较清晰而稳定的结果。水稻(Oryza sativa.L)品种珍汕97的胚乳蛋白可分析出约100种成分,而胚蛋白可分析出约550种成分,检测灵敏度为0.2μg 蛋白质/mm~2。通过对这些实验条件的比较,表明该技术对水稻等作物种子蛋白的分析是一种行之有效的方法。

关键词：蛋白质组分水稻种子胚乳蛋白缓冲液等电聚焦双向电泳分析

He—Ne激光辐照家兔血清蛋白后的等电聚焦与双向电泳分析

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光电子.激光 1985年第2期 6-9页

作者：胡能书朱泽瑞吴秀山湖南师范大学生物系

本试验采用等电聚焦和双向电泳技术,研究了家兔、鳝鱼、泥鳅三种生物的血清蛋白以及果蝇三龄幼虫的可溶性蛋白;比较研究了激光直接辐照白、灰、黑三种家兔血清蛋白后的等电聚焦和双向电泳情况。结果表明:(1)家兔、鳝鱼、泥鳅、果蝇各有... 详细信息

本试验采用等电聚焦和双向电泳技术,研究了家兔、鳝鱼、泥鳅三种生物的血清蛋白以及果蝇三龄幼虫的可溶性蛋白;比较研究了激光直接辐照白、灰、黑三种家兔血清蛋白后的等电聚焦和双向电泳情况。结果表明:(1)家兔、鳝鱼、泥鳅、果蝇各有自己的特异蛋白区带;(2)不同品种的家兔血清蛋白区带,彼此存在着明显的差异;(3)不同的点样量对兔血清蛋白等电聚焦分离效果有明显的影响;(4)输出功率为40mW的He—Ne激光辐照1小时,对兔血清蛋白的等电聚焦和双向电泳图谱无明显的影响。

关键词：家兔血清 He Ne 等电聚焦激光辐照点样量双向电泳图谱双向电泳分析蛋白带三龄幼虫