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抗Pgp/抗CD3微型双功能抗体裸鼠体内分布研究

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中国肿瘤临床 2004年第20期31卷 1182-1184页

作者：杨铭高瀛岱熊冬生刘汉芝邵晓枫许元富彭晖杨纯正中国医学科学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津市300020

肿瘤部位的免疫效应细胞数量过少,难以达到杀伤肿瘤细胞的有效浓度是肿瘤逃避人体免疫系统监测的原因之一.……

关键词：双功能抗体免疫效应细胞抗C 临床实验肿瘤细胞 CD3 裸鼠杀伤数量微型

抗表皮生长因子受体与抗CD_3双功能抗体的制备及细胞毒的研究

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肿瘤 1997年第S1期17卷 43-45页

作者：张尚权袁金辉赵峰孙亚平董琦严缘昌中国科学院上海细胞生物学研究所

制备抗ＥＧＦ┐Ｒ与抗ＣＤ３双功能单克隆抗体及其细胞毒的研究方法通过杂交－杂交瘤技术制备双功能单克隆抗体细胞株Ｅｔ２２，并了解其与ＩＬ┐２联合体外激活ＰＢＬｓ细胞对Ａ４３１癌细胞的杀伤活性。结果ＩＬ┐２激活的ＰＢＬｓ和... 详细信息

制备抗ＥＧＦ┐Ｒ与抗ＣＤ３双功能单克隆抗体及其细胞毒的研究方法通过杂交－杂交瘤技术制备双功能单克隆抗体细胞株Ｅｔ２２，并了解其与ＩＬ┐２联合体外激活ＰＢＬｓ细胞对Ａ４３１癌细胞的杀伤活性。结果ＩＬ┐２激活的ＰＢＬｓ和未经ＩＬ┐２刺激培养的ＰＢＬｓ对靶细胞Ａ４３１的杀伤活性，效靶比为２０∶１的条件下，杀伤率分别为４９％，１７％。Ｅｔ２２双功能抗体介导ＩＬ┐２激活的效应细胞杀伤靶细胞（Ａ４３１）为７５％。

关键词：双功能抗体抗体.单克隆 IL-2 抗OKT3抗体抗EGF-R抗体

抗HBS-碱性磷酸酶双功能抗体的分析及试用

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解放军医学杂志 1998年第3期23卷 237-238页

作者：高荣凯王琰刘克金化冰朱迎春刘群英陈宇萍海军总医院

抗ＨＢＳ－碱性磷酸酶双功能抗体的分析及试用①１０００３７北京海军总医院高荣凯王琰刘克金化冰朱迎春刘群英陈宇萍关键词肝炎表面抗原，乙型；碱性磷酸酶；双功能抗体中国图书资料分类号Ｒ４４６．６１酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ... 详细信息

抗ＨＢＳ－碱性磷酸酶双功能抗体的分析及试用①１０００３７北京海军总医院高荣凯王琰刘克金化冰朱迎春刘群英陈宇萍关键词肝炎表面抗原，乙型；碱性磷酸酶；双功能抗体中国图书资料分类号Ｒ４４６．６１酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）在对微量抗原或抗体的检测中具有重...

关键词：乙型肝炎表面抗原碱性磷酸酶双功能抗体

微型双功能抗体抗CD3/抗CD20的构建和表达

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中国免疫学杂志 2001年第7期17卷 339-342,347页

作者：熊冬生许元富杨纯正彭晖邵晓枫赖增祖范冬梅杨铭朱祯平中国医学科学院中国协和医科大学血液研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的 :构建和表达抗CD3/抗CD2 0微型双功能抗体 ,并测定该微型双功能抗体的生物学活性。方法 :采用PCR和overlapPCR方法构建抗CD3/抗CD2 0微型双功能抗体 ,并用双脱氧终止法测定DNA序列 ;采用亲和层析法纯化该产物 ,并用Westernblot和... 详细信息

目的 :构建和表达抗CD3/抗CD2 0微型双功能抗体 ,并测定该微型双功能抗体的生物学活性。方法 :采用PCR和overlapPCR方法构建抗CD3/抗CD2 0微型双功能抗体 ,并用双脱氧终止法测定DNA序列 ;采用亲和层析法纯化该产物 ,并用Westernblot和分子排阻层析鉴定纯化产物 ;采用FACS法和玫瑰花环试验鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性。结果 :DNA序列测定结果表明 :抗CD3/抗CD2 0微型双功能抗体已构建成功 ,表达可溶性产物的产量达 1mg/ml以上 ,纯化产物中二聚体的比例达 90 % ,具有与Jurkat(CD3+ )和Daudi细胞 (CD2 0 + )结合的活性 ,且能同时与Jurkat和Daudi细胞结合形成玫瑰花环。结论 :利用Diabody形式 ,首次成功地构建了抗CD3/抗CD2 0微型双功能抗体 ,并获得较高表达 ,表达产物具有与相应

关键词：单克隆抗体 CD3 CD20 基因工程抗体双功能抗体

微型双功能抗体在裸鼠体内介导人T细胞杀伤白血病细胞

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中国免疫学杂志 2011年第4期27卷 312-315页

作者：范冬梅杨铭赵英新许元富熊冬生陈礼平王敏中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院、实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:研究抗CD3/抗CD19微型双功能抗体介导人T细胞对白血病细胞的特异性靶向杀伤活性。方法:利用Ficoll-Hypaque法分离外周血淋巴细胞(PBL),流式细胞术从中分选T淋巴细胞,FACS检测T细胞表面标记CD25和CD69激活后的表达变化,实时定量PCR... 详细信息

目的:研究抗CD3/抗CD19微型双功能抗体介导人T细胞对白血病细胞的特异性靶向杀伤活性。方法:利用Ficoll-Hypaque法分离外周血淋巴细胞(PBL),流式细胞术从中分选T淋巴细胞,FACS检测T细胞表面标记CD25和CD69激活后的表达变化,实时定量PCR检测各组穿孔素(Perforin)和颗粒酶A(Granzyme A)的释放,建立BALB/c裸鼠Raji细胞移植瘤模型,测定该双功能抗体介导的体内靶向杀伤活性。结果:激活的T细胞,双功能抗体组CD25和CD69的表达以及释放Perforin和Granzyme A的量均明显高于对照组,在对人白血病裸鼠移植瘤模型的生物治疗中,抗CD3/抗CD19微型双功能抗体能有效抑制白血病移植瘤的生长。结论:抗CD3/抗CD19微型双功能抗体在体外及动物肿瘤模型实验中能介导人T细胞有效杀伤白血病细胞,具有潜在的临床应用前景。

关键词：双功能抗体 CD19 CD3 非霍奇金淋巴瘤免疫治疗

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抗人膀胱癌双功能抗体的临床应用

吉林大学学报（医学版） 2002年第6期28卷 638-639页

作者：刘禄成朱德淳李平李志任明吉林大学第二医院泌尿外科吉林长春130041 长春铁路医院泌尿外科

目的 :研究抗人膀胱癌双功能抗体的主动免疫治疗作用 ,为临床应用提供理论依据。方法 :用抗人膀胱癌双功能抗体主动免疫治疗膀胱癌病人 ,同时用生理盐水注射作为对照组 ,检测血清中人抗鼠抗体的产生情况、治疗前后各项体液免疫指标及 N... 详细信息

目的 :研究抗人膀胱癌双功能抗体的主动免疫治疗作用 ,为临床应用提供理论依据。方法 :用抗人膀胱癌双功能抗体主动免疫治疗膀胱癌病人 ,同时用生理盐水注射作为对照组 ,检测血清中人抗鼠抗体的产生情况、治疗前后各项体液免疫指标及 NK细胞活性变化。结果 :与对照组相比 ,治疗组病人的免疫指标上升。结论 :抗人膀胱癌双功能抗体有增强免疫力的作用。

关键词：临床应用双功能抗体膀胱癌主动免疫治疗免疫疗法

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抗人膀胱癌双功能抗体对荷瘤鼠的免疫治疗

吉林大学学报（医学版） 2002年第5期28卷 486-488页

作者：李香云刘禄成李平李志任明吉林大学第二医院泌尿外科吉林长春130041 长春市铁路医院泌尿外科

目的 :建立抗人膀胱癌双功能抗体对荷人膀胱癌小鼠主动免疫的模型。方法 :采用抗人膀胱癌双功能抗体免疫 BALB/C小鼠 ,对照组采用生理盐水。免疫 3次后 ,于末次免疫后 1周 ,将新鲜的人膀胱移行细胞癌组织移植于小鼠肾包膜下 ,移植后第 2... 详细信息

目的 :建立抗人膀胱癌双功能抗体对荷人膀胱癌小鼠主动免疫的模型。方法 :采用抗人膀胱癌双功能抗体免疫 BALB/C小鼠 ,对照组采用生理盐水。免疫 3次后 ,于末次免疫后 1周 ,将新鲜的人膀胱移行细胞癌组织移植于小鼠肾包膜下 ,移植后第 2、4、6、8和 1 0天处死小鼠 ,取血清进行抗双功能抗体分析。移植瘤行组织学检查 ,观察宿主淋巴细胞浸润情况及瘤细胞可见率。结果 :实验组小鼠肾脏包膜下人膀胱癌细胞很快受到排斥 ,在移植后第 6天 ,淋巴细胞浸润即达高峰 ,而对照组在第 1 0天淋巴细胞浸润才达高峰 ;实验组在移植后第 6天瘤细胞可见率即明显降低 ,而对照组呈逐渐下降趋势 ;实验组抗双功能抗体为阳性 ,对照组为阴性。结论 :抗人膀胱癌双功能抗体作为抗原免疫小鼠后 ,能够排斥小鼠体内人膀胱癌细胞的生长。

关键词：膀胱癌双功能抗体小鼠免疫治疗

抗CD3/抗CD19微型双功能抗体的构建、表达及活性测定

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中国癌症杂志 2010年第4期20卷 241-246页

作者：李崴范冬梅程昕师锐赞刘荣任思楣王敏杨铭中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 天津医科大学附属肿瘤医院头颈外科天津300060

背景与目的:微型双功能抗体是基因工程抗体的一种形式,它具有两个抗原结合位点,可选择性募集效应细胞到靶细胞周围,介导特异性杀伤作用。本实验构建抗CD3/抗CD19微型双功能抗体(diabody)载体,表达纯化后测定其生物学活性。方法:用重叠PC... 详细信息

背景与目的:微型双功能抗体是基因工程抗体的一种形式,它具有两个抗原结合位点,可选择性募集效应细胞到靶细胞周围,介导特异性杀伤作用。本实验构建抗CD3/抗CD19微型双功能抗体(diabody)载体,表达纯化后测定其生物学活性。方法:用重叠PCR(overlap PCR)和PCR方法,构建抗CD3/抗CD19 diabody载体,转化感受态大肠埃希菌进行原核表达。表达产物经抗His-tag亲和层析柱分离纯化,12% SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定。应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(FACS)检测生物学活性。结果:基因重组质粒经测序证实序列正确。抗CD3/抗CD19 diabody能够在原核表达系统中进行可溶性表达。12% SDS-PAGE显示28×103和26×103各有一条带,Western blot在28×103显示有条带,与预期相符。表达产物经纯化定量可达5mg/L。FACS检测抗CD3/抗CD19 diabody可与CD19+ Raji细胞和CD3+ Jurkat细胞特异结合,并能竞争性抑制HIT3a和HIT19a与上述细胞的结合活性。结论:本实验成功构建了抗CD3/抗CD19 diabody,并且能够进行可溶性表达,可与CD19+ Raji细胞和CD3+ Jurkat细胞特异结合,为以后的抗体功能实验奠定了基础。

关键词：基因工程抗体双功能抗体 CD3 CD19 淋巴瘤免疫治疗

抗人喉癌/抗VEGF双功能抗体制备及应用研究

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中国免疫学杂志 2006年第3期22卷 241-243页

作者：陈鸥孙立群盛力金春顺赵明韩岚吉林大学第二医院耳鼻咽喉科长春130041 北京市同仁医院耳鼻咽喉科北京100800 长春市朝阳区人民医院长春130021

目的:研制抗人喉癌/抗血管内皮因子(VEGF)双功能克隆抗体,用于喉癌抗血管生成治疗。方法:采用二次杂交瘤技术制备抗人喉癌/抗VEGF双功能抗体。经酶联免疫吸附试验法和SP法检测喉癌及癌前病患者血清及癌组织中VEGF的含量表达。结果:获得... 详细信息

目的:研制抗人喉癌/抗血管内皮因子(VEGF)双功能克隆抗体,用于喉癌抗血管生成治疗。方法:采用二次杂交瘤技术制备抗人喉癌/抗VEGF双功能抗体。经酶联免疫吸附试验法和SP法检测喉癌及癌前病患者血清及癌组织中VEGF的含量表达。结果:获得6株分泌抗人喉癌/抗VEGF双功能抗体的杂交瘤,经免疫组化证实与喉癌细胞特异性结合率为93%,而与血管内皮细胞结合率为89%。血清中VEGF含量表达,喉癌组与癌前病组及正常对照组相比差异均显著。IgG亚型鉴定为IgG2aBSAb抗体效价为1∶25600倍(ELISA法)。结论:二次杂交瘤法制备的双功能抗体具有均匀性、可控性、效价高、稳定性好,可用于喉癌抗血管生成治疗,动态检测可作为判断喉癌预后的客观指标。

关键词：喉癌双功能抗体 VEGF