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人肺炎球菌参考血清09CS的制备及其中13个肺炎球菌结合疫苗血清型抗体的IgG含量和调理吞噬滴度

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中国生物制品学杂志 2014年第12期27卷 1554-1559,1564页

作者：赵志强王欣茹石继春王浩刘方蕾乔瑞洁吴兵王弢何彦林叶强林纪胜谢贵林兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心甘肃兰州730046 中国食品药品检定研究院北京100050 美国阿拉巴马大学伯明翰分校病理学系呼吸道病原参考实验室伯明翰35294 中国生物技术股份有限公司北京100029

目的制备人肺炎球菌参考血清,对其中13价肺炎球菌结合疫苗(pneumococcal conjugate vaccine,PCV)血清型(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F型)的抗荚膜多糖抗体Ig G含量和调理吞噬滴度进行定值。方法用23价肺炎荚膜... 详细信息

目的制备人肺炎球菌参考血清,对其中13价肺炎球菌结合疫苗(pneumococcal conjugate vaccine,PCV)血清型(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F型)的抗荚膜多糖抗体Ig G含量和调理吞噬滴度进行定值。方法用23价肺炎荚膜多糖疫苗免疫20名健康成人,采集免疫后血浆,进行混合、去纤维蛋白原、过滤、分装、冻干,制备人肺炎球菌参考血清09CS。在WHO细菌性呼吸道病原参考实验室(University of Alabama at Birmingham,UAB)和兰州生物制品研究所有限责任公司(Lanzhou Institute of Biological Products,LIBP)实验室,采用WHO推荐的Pn PS ELISA法,以国际标准血清89SF为标准,对其中13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体Ig G含量定值;以临时定值的09CS为标准,检测12份WHO校正血清、16份LIBP质控血清和89SF,对定值的准确性进一步验证。同时以调理吞噬杀菌试验(opsonophagocytic killing assay,OPA)测定针对13个血清型的调理吞噬滴度。结果制备了5 000支(0.5 ml/支)冻干人肺炎球菌参考血清09CS,残留水分含量2.3%。确定了09CS中13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体Ig G含量的临时定值;以09CS为标准检测的12份WHO校正血清和16份LIBP质控血清的13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体结果,与以89SF为标准检测的结果,均具有良好的直线相关关系(r≈1.00,P血清型抗荚膜多糖抗体的新值与其原定值比较,各血清型的误差百分率的绝对值均血清型调理吞噬滴度。结论 LIBP成功制备了人肺炎球菌参考血清09CS,完成了对其中的13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体Ig G含量的准确定值,并确定了调理吞噬滴度。

关键词：肺炎球菌参考血清免疫球蛋白G 酶联免疫吸附试验调理吞噬杀菌试验

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口蹄疫A型病毒AF/72株参考血清的研制

安徽农业科学 2009年第11期37卷 5007-5009页

作者：杜进鑫王永录张永光方玉珍蒋守田吕建亮潘丽刘力宽张淑刚李正丰张昱张中旺甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

[目的]研制口蹄疫A型病毒AF/72株参考血清,筛选对实际防疫更具针对性的A型FMD标准血清,为研发安全高效优质的A型FMD疫苗提供实物支撑。[方法]用国家口蹄疫参考实验室提供的口蹄疫A型病毒AF/72株的第12代细胞毒AF/72/MF6-BF12,经测定并经... 详细信息

[目的]研制口蹄疫A型病毒AF/72株参考血清,筛选对实际防疫更具针对性的A型FMD标准血清,为研发安全高效优质的A型FMD疫苗提供实物支撑。[方法]用国家口蹄疫参考实验室提供的口蹄疫A型病毒AF/72株的第12代细胞毒AF/72/MF6-BF12,经测定并经Kaber法计算其TCID50为10-8.0/ml;经紫外分光光度法测定其146 S含量,均值为189.0 ng/ml,远大于22.0 ng/ml的国际标准。将此细胞毒与弗氏佐剂联合制成灭活疫苗免疫豚鼠后分离得到血清。[结果]经物理性状检验、无菌检验和外源病毒检验,纯净性符合兽用生物制品标准要求;参照国际标准血清的抗体效价测定方法ELISA和微量细胞中和试验检测了此血清的抗体滴度,原血清,强阳性血清和弱阳性血清的中和效价均远小于1∶45,符合标准的要求。[结论]对比国际口蹄疫参考血清的抗体滴度确定强阳性血清为口蹄疫A型病毒AF/72株的参考血清,为以后筛选抗原谱广的制苗毒株提供实物支撑。

关键词： FMD 疫苗参考血清

人肺炎球菌参考血清09CS中11个血清型抗荚膜多糖的抗体IgG含量的定值

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微生物学免疫学进展 2014年第5期42卷 5-10页

作者：王欣茹刘方蕾于旭博范锋锋刘爱萍吴兵胡浩王晶赵志强谢贵林兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心甘肃兰州730046 中国生物技术股份有限公司北京100029

对人肺炎球菌参考血清09CS中11个肺炎球菌血清型(2、8、9N、10A、11A、12F、15B、17F、20、22F、33F)的抗荚膜多糖抗体IgG含量进行定值。方法用WHO推荐的标准检测人血清中抗肺炎球菌荚膜多糖抗体IgG定量ELISA方法,以国际标准血清89SF为... 详细信息

对人肺炎球菌参考血清09CS中11个肺炎球菌血清型(2、8、9N、10A、11A、12F、15B、17F、20、22F、33F)的抗荚膜多糖抗体IgG含量进行定值。方法用WHO推荐的标准检测人血清中抗肺炎球菌荚膜多糖抗体IgG定量ELISA方法,以国际标准血清89SF为标准,对此11个血清型抗荚膜多糖抗体IgG含量进行定值;以暂定的09CS的定值为标准检测12份WHO校正血清、16份兰州生物制品研究所有限责任公司(LIBP)质控血清和89SF,对定值的准确性进一步验证。结果以09CS的定值为标准检测的12份WHO校正血清和16份LIBP质控血清的11个血清型抗荚膜多糖抗体结果,与以89SF为标准检测的结果,均具有良好的直线相关关系(r≈1.00,P血清型抗荚膜多糖抗体的新值与其原定值比较,各血清型的误差均参考血清09CS中的11个血清型抗荚膜多糖抗体IgG含量的准确定值。

关键词：人肺炎球菌参考血清 IgG抗体含量定值酶联免疫吸附试验

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总胆红素参考血清的研制和应用

上海医学检验杂志 1990年第2期5卷 75-77页

作者：冯仁丰邵维杰上海市临床检验中心

总胆红素的测定需要稳定的胆红素参考血清。经反复试验及实际应用,现已能制备出符合要求的胆红素参考血清。在参考血清制备中,作者采取了(1)在血清中加入三分之一体积的乙二醇;(2)调整血清的pH;(3)加入巯基化合物改变血清的氧化还原电位... 详细信息

总胆红素的测定需要稳定的胆红素参考血清。经反复试验及实际应用,现已能制备出符合要求的胆红素参考血清。在参考血清制备中,作者采取了(1)在血清中加入三分之一体积的乙二醇;(2)调整血清的pH;(3)加入巯基化合物改变血清的氧化还原电位;(4)添加稳定剂;(5)充氮封口等措施。制成的参考血清4℃保存一年以上,内含胆红素含量保持不变。上海地区于1984年起用此血清作全市临床化学室间评价活动,总胆红素测定的室间调查变异系数逐年下降,为提高全市总胆红素测定质量发挥了作用。

关键词：总胆红素参考血清研制

冻干血吸虫病诊断试剂IgG免疫血清国家参考品的制备及标定

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中国生物制品学杂志 2006年第4期19卷 400-401页

作者：辛晓芳朱荫昌何伟张谨王国柱梁幼生徐明薄淑英曹国群王国治中国药品生物制品检定所菌苗室北京100050 江苏省血吸虫病防治研究所无锡214064

目的建立血吸虫病诊断试剂IgG免疫血清国家参考品。方法收集血吸虫病疫区粪检筛查阳性病人血清和非疫区正常人血清,经标定和验证合格,制成冻干参考品。结果冻干参考品血清效价符合要求,2家协作单位用3种免疫学方法标定,结果一致。结论... 详细信息

目的建立血吸虫病诊断试剂IgG免疫血清国家参考品。方法收集血吸虫病疫区粪检筛查阳性病人血清和非疫区正常人血清,经标定和验证合格,制成冻干参考品。结果冻干参考品血清效价符合要求,2家协作单位用3种免疫学方法标定,结果一致。结论所制备的冻干参考品可以用于血吸虫病抗体诊断试剂的检定。

关键词：血吸虫病诊断试剂参考血清

用低浓度NBT显色剂检测血清糖化蛋白和糖化低密度脂蛋白

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广州医学院学报 1997年第1期25卷 100-102页

作者：刘桦林尚猷刘丽丽广州民航医院检验科

国际载脂蛋白 A1、B 参考材料靶值的转移

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临床检验杂志 1997年第3期15卷 135-138页

作者：庄一义李勇陈铭生陆美珍王小明刘中令凌翔南京军区南京总医院生化室上海仁济医院检验科北海医学科技公司

用国产载脂蛋白（ａｐｏ）Ａ１、Ｂ免疫比浊试剂盒和生化自动分析仪，按照美国西北脂类研究实验室（ＮＷＬＲＬ）制定的国际ａｐｏＡ１、Ｂ参考材料靶值转移方案进行三期实验考核，结果证实从国际参考材料的靶值转移到本室制备的参考血... 详细信息

用国产载脂蛋白（ａｐｏ）Ａ１、Ｂ免疫比浊试剂盒和生化自动分析仪，按照美国西北脂类研究实验室（ＮＷＬＲＬ）制定的国际ａｐｏＡ１、Ｂ参考材料靶值转移方案进行三期实验考核，结果证实从国际参考材料的靶值转移到本室制备的参考血清（Ｎｏ．９６０７０１）后，本室参考血清和检测系统保持良好的准确度和精密度。ＮＷＬ－ＲＬ提供的４０份血清ａｐｏＡ１、Ｂ测定结果与其靶值相比较，相关系数分别为０．９９３和０．９９５，平均绝对偏差为１．７％和３．１％，达到方案规定的合格标准，获得了ＮＷＬＲＬ颁发的ＷＨＯ－ＩＦＣＣａｏｐＡ１、Ｂ国际标准靶值转移合格证书。

关键词：载脂蛋白A1 载脂蛋白B 标准化参考血清

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血清纤维结合蛋白检测方法探讨

南京部队医药 1995年第1期 51-52页

作者：林宝顺洪清源第180医院

本文报告一种简易、准确、重复性好的血清纤维蛋白(FN)免疫火箭电泳法。 1.材料1.1 抗血清及参考血清均由国家卫生部上海生物制品研究所提供。1.2 pH8.6的巴比妥缓冲液。1.3 琼脂凝胶:称日本产琼脂粉2g。

关键词：血清纤维结合蛋白检测方法免疫火箭电泳巴比妥缓冲液抗血清肝硬化患者琼脂板琼脂凝胶参考血清琼脂粉

肠炎沙门菌人工感染SPF鸡后排菌规律和抗体消长规律研究及应用

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肠炎沙门菌人工感染SPF鸡后排菌规律和抗体消长规律研究及应用

作者：张明悦山东农业大学

学位级别：硕士

沙门菌(Salmonella)属于肠杆菌科,是兼性厌氧的革兰氏阴性杆菌。沙门菌病是重要的食源性疾病之一,禽类是沙门菌最常见的储存宿主,禽类及其产品的污染与人类沙门菌病的暴发密切相关。肠炎沙门菌(Salmonella Enteritidis)作为最常见的血清... 详细信息

沙门菌(Salmonella)属于肠杆菌科,是兼性厌氧的革兰氏阴性杆菌。沙门菌病是重要的食源性疾病之一,禽类是沙门菌最常见的储存宿主,禽类及其产品的污染与人类沙门菌病的暴发密切相关。肠炎沙门菌(Salmonella Enteritidis)作为最常见的血清型,具有广泛的宿主谱,所有日龄的鸡易感。通常雏鸡感染沙门菌后会引发消化道急性炎症,严重者致死亡,带来重大经济损失;成年鸡常呈隐性感染,且会向环境中排菌,成为传染源;此外,种鸡感染沙门菌后,可垂直传播给子代鸡群,对种禽场造成严重危害。因此,种禽沙门菌的防控与净化对于养禽业和公共卫生安全都尤为重要。生产中常使用病原分离鉴定和血清抗体检测的方法进行沙门菌检测,但研究表明,沙门菌抗体阳性率与病原阳性率不一致,导致净化不彻底,从而影响净化进程。目前商品化抗体检测试剂主要包括平板凝集抗原和ELISA试剂盒两类,两类商品化检测试剂依据原理不同,检测效果参差不齐,因此评估筛选出特异性强、灵敏度高和稳定性好的检测试剂对提高沙门菌检测净化效率和降低生产成本尤为重要。本课题采集了人工感染的SPF鸡不同时间点的血清和拭子,分别进行血清抗体检测和肠炎沙门菌的分离鉴定,以研究肠炎沙门菌感染后的抗体产生规律和排菌规律。此外,本试验还研制了一套肠炎沙门菌阳性参考血清,对商品化平板凝集原和ELISA试剂盒进行评估,为沙门菌净化筛选出优质的抗体检测试剂。主要内容包括:1.肠炎沙门菌人工感染SPF鸡后抗体消长规律试验研究为研究肠炎沙门菌人工感染SPF鸡后抗体消长规律,对16只52日龄SPF鸡进行肠炎沙门菌标准株(CVCC3377)灌服感染,分为10 CFU/只和10 CFU/只两个剂量组,每个组8只鸡,1周后重复感染。分别在第一次人工感染后第2、5、7、9、12、14、21、28和35天采血并分离血清,用商品化B+D群ELISA试剂盒和鸡白痢、鸡伤寒平板凝集原检测血清中肠炎沙门菌抗体水平,并绘制抗体消长曲线。ELISA抗体检测结果显示:高剂量感染组和低剂量感染组的鸡只抗体动态变化规律一致,两组均在第一次人工感染后第7天开始检测出抗体阳性鸡只(1/8和3/8),平均抗体水平较低(分别为205.37和447.59);此后抗体水平不断上升,至第一次感染后28天抗体水平达到高峰;同时,高剂量感染组的同期抗体水平均高于低剂量感染组,高剂量组先于低剂量组抗体阳性率达到100%,且高剂量组100%抗体阳性率的维持时间较长。平板凝集试验检测抗体结果显示:两组分别在第一次感染后第7天和第5天开始检出抗体阳性鸡只(分别为3/8和6/8),均至第一次感染后14天凝集效价达到高峰,且在高峰前后9天内凝集效价均较高。分别在第一次感染后12天和9天抗体阳性率开始达到最高,分别为75%和100%。2.肠炎沙门菌人工感染SPF鸡后排菌规律及病原学与血清学检测结果相关性分析在采血的同日龄分别采集口腔和泄殖腔拭子进行沙门菌的病原学检测,将不同采样批次中每只鸡的拭子和血清样品分为1组,共144组。结果显示:两组均在第一次人工感染后第7天开始排菌,第一次感染21天后至试验周期结束前的两周内未检出病原,排菌期间病原阳性率为6.25%～25%。病原分离、ELISA和平板凝集的阳性率分别为7.64%、52.78%和67.36%。通过≥1种方法检测为阳性的有102组,其中,仅病原学检测阳性的组数占比0.98%,仅抗体(ELISA或平板凝集)检测阳性的组数占比89.22%,病原和抗体检测均阳性的组数占比9.80%,三种方法检测均阳性的组数占比7.84%。通过计算Kappa系数来判定不同检测方法所得结果的一致性程度,ELISA和平板凝集两种抗体检测方法和病原学检测方法检测结果的一致性程度均微弱,ELISA和平板凝集有中度一致性。结果表明:单一血清学或病原学检测方法不能检出全部阳性鸡只,检测时还应综合考虑检测结果,防止漏检。3.肠炎沙门菌参考血清的制备与应用观察单个鸡只的抗体消长曲线,选出与平均抗体消长曲线吻合度较高的鸡只,分别在抗体产生初期、上升期、高峰期和下降期选取时间点将各筛选鸡只的血清等比例混合,最终获得一组由5份混合血清组成的参考血清。用两种商品化B+D群ELISA试剂盒和一种商品化D群ELISA试剂盒检测该5份混合血清,对所制备参考血清进行标定,结果三种试剂盒所测得抗体消长曲线均符合抗体消长趋势。用制备的参考血清对不同厂家不同批次共7份商品化平板凝集原和三种常用ELISA试剂盒进行特异性、灵敏度和稳定性的评估,结果显示:评估筛选出试剂盒C与平板凝集原B和平板凝集原C的特异性、灵敏度和稳定性较高。结果表明:该方法可有效评估不同检测试剂盒的特异性、灵敏度和稳定性,成为评估筛选常用ELISA试剂盒和平板凝集原的有力工具。本试验研究了肠炎沙门菌人工感染SPF鸡后

关键词：肠炎沙门菌排菌规律抗体消长规律参考血清应用