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去细胞猪主动脉瓣支架及兔骨髓干细胞构建组织工程心脏瓣膜的初步研究

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中国胸心血管外科临床杂志 2005年第5期12卷 339-342页

作者：康凯谭震蒋树林谢宝栋韩振田伟忱哈尔滨医科大学附属第二医院心脏外科哈尔滨150086

目的探讨应用去细胞猪主动脉瓣支架(ace llu larized porc ine aortic va lve scaffo ld,APAV S)与兔骨髓干细胞(bone m arrow strom a l ce lls,BM SC s)体外构建组织工程瓣膜的可行性。方法采用去垢剂+核酸酶消化法处理,去除猪主动脉... 详细信息

目的探讨应用去细胞猪主动脉瓣支架(ace llu larized porc ine aortic va lve scaffo ld,APAV S)与兔骨髓干细胞(bone m arrow strom a l ce lls,BM SC s)体外构建组织工程瓣膜的可行性。方法采用去垢剂+核酸酶消化法处理,去除猪主动脉瓣细胞成分,并作去细胞前后的形态学检查和生物力学测定;在去细胞支架上种植兔BM SC s,行形态学检查和免疫组织化学染色观察。结果光学显微镜、扫描及透射电子显微镜下可见猪主动脉瓣膜中的细胞成分可完全被去除,获得完整无细胞的纤维网状支架。瓣叶去细胞前后的断裂强度(642±102g/mm2vs.636±127g/mm2)和断裂伸长率(62.2%±18.1%vs.54.4%±16.0%)差别无统计学意义(P>0.05)。种植的兔BM SC s在APAV S表面形成一层连续的细胞层。免疫组织化学检查α-平滑肌动蛋白抗体(+),CD 31(-)。结论种植兔BM SC s于APAV S上,可在体外构建组织工程心脏瓣膜。

关键词：去细胞支架骨髓干细胞心脏瓣膜组织工程

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光氧化反应增加去细胞牛颈静脉的组织稳定性

中国临床康复 2006年第13期10卷 99-101,i0005页

作者：张明胡铁辉吴忠仕胡建国徐新华胡野荣吕卫东李伟刘哲亮中南大学湘雅二医院胸心外科湖南省长沙市410011

目的:观察去细胞及去细胞后光氧化反应对牛颈静脉的组织稳定性的影响。方法:实验于2005-06/09在中南大学湘雅二医院胸心外科实验室完成。①将新鲜牛颈静脉纵形剪开成血管片,横行切取牛颈静脉血管片成6根血管条,随机分为6组,新鲜组,去细... 详细信息

目的:观察去细胞及去细胞后光氧化反应对牛颈静脉的组织稳定性的影响。方法:实验于2005-06/09在中南大学湘雅二医院胸心外科实验室完成。①将新鲜牛颈静脉纵形剪开成血管片,横行切取牛颈静脉血管片成6根血管条,随机分为6组,新鲜组,去细胞组,及根据不同的光氧化处理时间将去细胞结合光氧化处理组分为去细胞后光氧化反应12,24,36和48h组。②通过测定处理前后的组织厚度、热皱缩温度、抗张强度及组织蛋白提取分析来比较组织稳定性。结果:①各组在处理前后的厚度:去细胞处理后血管片比处理前变薄[(0.36±0.85),(0.43±0.94)mm,P去细胞再光氧化处理后的血管片厚度无明显改变(P>0.05)。②各组血管片组织稳定性评价:去细胞组热皱缩温度及抗张强度比新鲜组、去细胞后光氧化反应12h组、24h组、36h组、48h组明显降低[热皱缩温度:(69.75±0.54),(72.50±0.53),(73.80±0.59),(74.40±0.46),(75.10±0.21),(75.20±0.26)℃,P0.05);去细胞后光氧化反应组的组织蛋白提取量明显少于新鲜组及去细胞组,且随光氧化反应时间延长,组织蛋白提取量逐步减少。结论:去细胞处理降低了牛颈静脉的组织稳定性,而经光氧化进一步处理后组织稳定性增强,且随光氧化时间延长组织稳定性增强。

关键词：光化学疗法去细胞支架牛颈静脉

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去细胞猪主动脉瓣叶的获取和内皮细胞的种植

中国修复重建外科杂志 2003年第6期17卷 493-495页

作者：叶福林徐志云张宝仁韩林黄盛东王晓伟第二军医大学长海医院胸心外科上海200433

目的　探讨猪主动脉瓣叶去细胞后作为组织工程心脏瓣膜支架的可行性。　方法　经胰酶 - EDTA、表面活性剂和核酸酶处理 ,去除猪主动脉瓣叶的细胞成分 ,测定瓣叶去细胞前、后的生物力学特性 ,并在其表面种植新生牛主动脉内皮细胞 (BAECs... 详细信息

目的　探讨猪主动脉瓣叶去细胞后作为组织工程心脏瓣膜支架的可行性。　方法　经胰酶 - EDTA、表面活性剂和核酸酶处理 ,去除猪主动脉瓣叶的细胞成分 ,测定瓣叶去细胞前、后的生物力学特性 ,并在其表面种植新生牛主动脉内皮细胞 (BAECs) ;分别行大鼠皮下包埋实验。　结果　猪主动脉瓣叶中的细胞成分能完全去除 ,获得完整无细胞的纤维网状支架 ,断裂强度和断裂伸长率无明显变化 ;种植的 BAECs在去细胞瓣叶表面可形成一层连续的细胞层 ,其分泌前列环素 (PGI2 )的能力同直接种植在 2 4孔板中的比较 ,差异无统计学意义 (P>0 .0 5 )。　结论　猪主动脉瓣去细胞后获得的纤维支架可以用来构建组织工程瓣膜 ,适宜于血管内皮细胞的生长。

关键词：去细胞猪主动脉瓣叶组织工程心脏瓣膜去细胞支架内皮细胞种植

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猪主动脉组织工程瓣膜制备的初步研究

第二军医大学学报 2003年第3期24卷 242-244页

作者：叶福林徐志云张宝仁韩林黄盛东第二军医大学长海医院胸心外科解放军胸心外科研究所上海200433

目的 :初步探索猪主动脉组织工程瓣膜的制备方法。方法 :经胰酶 EDTA、表面活性剂、核酸酶处理 ,去除猪主动脉瓣的细胞成分 ,测定瓣叶去细胞前、后的生物力学特性 ,并在其表面种植BAECs。结果 :猪主动脉瓣膜中的细胞成分能完全被去... 详细信息

目的 :初步探索猪主动脉组织工程瓣膜的制备方法。方法 :经胰酶 EDTA、表面活性剂、核酸酶处理 ,去除猪主动脉瓣的细胞成分 ,测定瓣叶去细胞前、后的生物力学特性 ,并在其表面种植BAECs。结果 :猪主动脉瓣膜中的细胞成分能完全被去除 ,获得完整无细胞的纤维网状支架 ,瓣叶去细胞前、后的断裂强度和断裂伸长率无明显变化 ,瓣膜近端存留的主动脉壁中的细胞一半被去除 ;种植的BAECs在去细胞瓣膜表面、主动脉内膜形成一连续的细胞层。结论 :猪主动脉瓣膜去细胞后获得的纤维支架适宜血管内皮细胞的生长。

关键词：去细胞支架组织工程心脏瓣膜内皮细胞

猪主动脉瓣叶去细胞后种植内皮细胞的实验研究

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 922-923页

作者：叶福林徐志云张宝仁韩林第二军医大学长海医院胸心外科上海200433

组织工程心脏瓣膜的研究和临床应用有广阔的前景，天然生物源性支架因能为种植细胞提供一个黏附、生长的良好环境而受到重视。本研究采用胰酶-EDTA、表面活性剂Triton X-100、核酸酶作用于猪主动脉瓣，观察能否去除瓣叶组织中的细胞，... 详细信息

组织工程心脏瓣膜的研究和临床应用有广阔的前景，天然生物源性支架因能为种植细胞提供一个黏附、生长的良好环境而受到重视。本研究采用胰酶-EDTA、表面活性剂Triton X-100、核酸酶作用于猪主动脉瓣，观察能否去除瓣叶组织中的细胞，以及在其表面种植牛主动脉内皮细胞（bovine aortic endothelial cells，BAECs）的生长情况，探讨其用来构建组织工程瓣膜的可行性。

关键词：猪主动脉瓣叶实验研究去细胞支架组织培养人工心脏瓣膜

直接染色法观察组织工程心脏瓣膜构建中种植细胞的生长

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 223-224页

作者：叶福林刘延玲徐志云张宝仁蔡凯华韩林第二军医大学长海医院胸心外科上海200433

为了快速观察组织工程心脏瓣膜构建中种植细胞的生长状况 ,采用去细胞猪主动脉瓣叶为支架 ,将新生牛主动脉内皮细胞种植于其上 ,第 3、7天取瓣叶行 H- E直接染色 ,并以常规切片 H- E染色和扫描电镜作为对照。结果发现 ,该 3种方法观察... 详细信息

为了快速观察组织工程心脏瓣膜构建中种植细胞的生长状况 ,采用去细胞猪主动脉瓣叶为支架 ,将新生牛主动脉内皮细胞种植于其上 ,第 3、7天取瓣叶行 H- E直接染色 ,并以常规切片 H- E染色和扫描电镜作为对照。结果发现 ,该 3种方法观察所见细胞第 3、7天的生长疏密状况基本同步。提示 ,瓣叶 H-

关键词：去细胞支架组织工程心脏瓣膜 H-E染色

体外构建组织工程心脏瓣膜动物实验初步研究(英文)

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哈尔滨医科大学学报 2005年第3期39卷 240-243,246,F003页

作者：康凯谭震蒋树林谢宝栋韩振田伟忱哈尔滨医科大学第二临床医学院心脏外科黑龙江哈尔滨150086

目的探讨应用去细胞猪主动脉支架(decellularizedporcineaorticvalvescaffold,APAVS)与兔骨髓干细胞(rabbitbonemarrowstromalcells,RBMSCs)体外构建组织工程心脏瓣膜的可行性。方法采用去垢剂—核酸酶消化法处理,去除猪主动脉瓣细胞成分,并做去细胞前后的形态学检查和生物力学测定;在去细胞支架上种植兔骨髓干细胞,行形态学检查和免疫组化测定。结果光镜及电镜证实,猪主动脉瓣膜中的细胞成分可完全去除,获得完整无细胞的纤维网状支架;瓣叶去细胞前后的断裂强度和断裂伸长率无明显变化;种植的RBMSCs可在ACPAV表面形成一层连续的细胞层。结论种植RBMSCs于ACPAV上,可体外构造组织工程人工心脏瓣膜。

关键词：体外构建组织工程心脏瓣膜动物实验骨髓干细胞组织工程去细胞支架 RBMSCs

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环氧氯丙烷处理组织工程瓣膜的实验研究

环氧氯丙烷处理组织工程瓣膜的实验研究

作者：易蔚第四军医大学

学位级别：硕士

目的:目前,组织工程心脏瓣膜(TEHV)研究是瓣膜外科的热点之一,生物支架材料仍存在的钙化及衰坏等缺陷,获取具有相应功能的活性种子细胞是急待解决的问题。环氧氯丙烷(EC)是西京医院筛选的生物瓣膜防钙化剂,应用其处理的猪主动脉瓣防钙... 详细信息

目的:目前,组织工程心脏瓣膜(TEHV)研究是瓣膜外科的热点之一,生物支架材料仍存在的钙化及衰坏等缺陷,获取具有相应功能的活性种子细胞是急待解决的问题。环氧氯丙烷(EC)是西京医院筛选的生物瓣膜防钙化剂,应用其处理的猪主动脉瓣防钙化效果明显。然而EC处理对支架材料的理化性质及血液相容性,仍然研究未明。本研究针对EC处理的TEHV去细胞支架材料的防钙化效果、理化性质及血液相容性予以评价。同时,本课题取材人骨髓,分离得到内皮祖细胞(EPCs)和骨髓间充质干细胞(MSCs),体外培养、扩增、分化,并进行功能鉴定。探讨其作为种子细胞,构建TEHV的可行性和条件,为新型组织工程心脏瓣膜种子细胞的选择提供实验基础。方法: 1.采用改变渗透压和酶消化的方法制备去细胞猪主动脉瓣支架材料,HE染色鉴定其细胞去除情况。分别对EC处理、GA处理、二者联合处理及未经处理的去细胞猪主动脉瓣支架材料行茚三酮实验,胶原酶消化实验,血浆蛋白吸附实验以及血小板黏附实验,以分别探讨EC对去细胞支架材料的胶原交联度及血液相容性的影响。将支架材料植入SD大鼠体内包埋60天后取出行HE染色及免疫组化,观察支架材料钙化程度。 2.取材骨髓,分离得到内皮祖细胞(EPCs)和骨髓间充质干细胞(MSCs),体外培养、扩增、分化。内皮细胞条件培养基培养,纤维粘连蛋白包被培养皿,以EGF、VEGF等生长因子诱导EPCs分化,采用免疫组化CD31、Ⅷ因子相关抗原染色、乙酰化低密度脂蛋白(DiI-Ac-LDL)摄取试验分析评价内皮细胞功能;DMEM培养基培养扩增,以5-Aza诱导MSCs分化,采用α-SMA、Vimentin免疫组化染色鉴定其分化表达,以免疫组化Ⅰ、Ⅲ胶原染色评价其分泌功能,以探讨EPCs和MSCs作为组织工程瓣膜种子细胞的可能。结果: 1.应用胰蛋白酶、去垢剂和改变渗透压的方法处理新鲜猪主动脉瓣,得到去细胞猪主动脉瓣支架材料。HE染色显示其瓣叶、管壁及平滑肌中的细胞成分均被基本去除了,而未经去细胞处理的支架材料瓣叶、管壁及平滑肌中则存在大量细胞成分。体内包埋实验结果显示EC处理的支架材料未见明显钙化灶,少有结缔组织包绕,而GA处理的对照组支架材料组织钙化明显。去细胞猪瓣支架材料经EC或GA处理后,较未处理组茚三酮值均明显下降(p 去细胞猪瓣支架材料经EC再处理后,较单用GA处理组茚三酮值进一步下降(p 去细胞猪瓣支架材料经EC或GA处理后,未消化率较未处理组明显增加(p 去细胞猪瓣支架材料经EC处理后,未消化率进一步增加(p 去细胞猪瓣支架材料经GA处理后蛋白质吸附率较未处理组明显升高,而再经EC处理后蛋白质吸附率较GA处理组明显下降(p 去细胞猪瓣支架材料血小板黏附率较未处理组显著升高(p 细胞条件培养的EPCs呈短梭形及多角形,14 d后呈铺路石样生长,表达CD31、Ⅷ因子相关抗原、DiI-Ac-LDL摄取试验阳性。原代培养的MSCs呈多角形或梭形,4-7天后呈集落样生长,其α-SMA、Vimentin、Ⅰ、Ⅲ胶原染色均为阳性,提示可以分化为肌纤维母细胞。结论: 1.本实验针对应用胰蛋白酶、去垢剂和改变渗透压的方法处理得到的去细胞猪主动脉瓣支架材料,行体内包埋实验证明EC处理法能够有效降低支架材料钙化程度。通过茚三酮实验,胶原酶消化实验分析,EC能提高去细胞支架材料的胶原交联度。而血浆蛋白吸附实验和血小板黏附实验则验证了EC处理能够提高去细胞支架材料的血液相容性。EC处理能够进一步改善去细胞猪瓣支架材料的理化性质,有利于提高血液相容性和减缓钙化,同时对于EC处理方法在组织工程瓣膜支架材料研究中的应用提供了重要的理论依据。 2.本实验对可能成为组织工程瓣膜的种子细胞进行了诱导分化和功能检测,其形态与细胞表面标记等与文献报道基本相符,通过表达CD31、Ⅷ因子相关抗原免疫组化,DiI-Ac-LDL摄取试验鉴定,具有分化为内皮样细胞的能力。同时,分离得到MSCs,通过α-SMA、Vimentin以及Ⅰ、Ⅲ胶原免疫组化等鉴定,具有分化为肌纤维母细胞或平滑肌细胞的能力。因此,骨髓来源的MSCs和EPCs作为TEHV种子细胞,显示出巨大的潜能,为TEHV种子细胞

关键词：环氧氯丙烷组织工程瓣膜去细胞支架种子细胞