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去细胞化支架材料肝素化修饰及抗凝性能研究

生物医学工程学杂志 2015年第3期32卷 594-598页

作者：包骥孙赳周永杰吴琼王宇嘉李丽姜鑫马朗谢明均石毓君步宏四川大学华西医院病理研究室成都610041 四川大学华西医院病理科成都610041 宜宾市第一人民医院普外科宜宾644000 泸州医学院临床医学系泸州646000 四川大学高分子科学与工程学院成都610065

本文旨在通过对去细胞化天然材料进行肝素化修饰,改善其作为组织工程支架材料的抗凝血性能。本文以猪肝去细胞化材料为研究对象,对材料分别进行了层层自组装(LBL)肝素化修饰、多点连接(MPA)肝素化修饰或末端连接(EPA)肝素化修饰,然后检... 详细信息

本文旨在通过对去细胞化天然材料进行肝素化修饰,改善其作为组织工程支架材料的抗凝血性能。本文以猪肝去细胞化材料为研究对象,对材料分别进行了层层自组装(LBL)肝素化修饰、多点连接(MPA)肝素化修饰或末端连接(EPA)肝素化修饰,然后检测它们的肝素化效果及抗凝血性能。结果表明,三种肝素化修饰材料的抗凝血性能与未经处理的去细胞化材料相比均有显著提高,其中EPA修饰肝素化材料的凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(APTT)均超过检测仪器最大值。同时,EPA修饰肝素化去细胞化材料修饰时间最短,肝素释放最慢,复钙时间最长。本研究结果显示EPA肝素化修饰的去细胞化材料获得了良好的抗凝血性能。

关键词：去细胞化生物材料肝素化修饰抗凝

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用于组织工程的去细胞化基质材料研究进展

功能材料 2013年第21期44卷 3065-3071页

作者：陈国宝吕永钢张小梅董单娟郭盼杨力重庆大学生物工程学院生物流变科学与技术教育部重点实验室重庆400044 重庆大学生物工程学院国家"111计划"基地重庆400044

细胞外基质在调节干细胞分化和诱导新的组织器官重建过程中扮演着重要的角色。在体外通过不同去细胞化方法获得不同来源的去细胞化基质材料,并研究它们在组织工程领域的应用,具有重要的理论意义和临床应用价值。总结了不同来源去细胞化... 详细信息

细胞外基质在调节干细胞分化和诱导新的组织器官重建过程中扮演着重要的角色。在体外通过不同去细胞化方法获得不同来源的去细胞化基质材料,并研究它们在组织工程领域的应用,具有重要的理论意义和临床应用价值。总结了不同来源去细胞化基质材料的制备方法,并分析了其在诱导干细胞分化和组织修复过程中的作用,最后探讨了目前去细胞化基质材料存在的问题和面临的挑战。

关键词：组织工程去细胞化支架材料干细胞

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去细胞化基质材料修复椎间盘的研究与进展

中国组织工程研究 2020年第22期24卷 3566-3572页

作者：金筱妤邓蓉蓉荣魏浩谢林康然南京中医药大学附属中西医结合医院江苏省南京市210028 江苏省中医药研究院骨科江苏省南京市210028 南京市溧水区中医院骨科江苏省南京市211200

背景:随着组织工程学的发展,椎间盘组织的修复与再生成为可能,将组织去细胞后的细胞外基质作为修复材料是进行椎间盘组织工程再生的重要手段。目的:总结近年来用于椎间盘再生去细胞化基质材料的制备工艺、质量控制、应用效果,并进行展... 详细信息

背景:随着组织工程学的发展,椎间盘组织的修复与再生成为可能,将组织去细胞后的细胞外基质作为修复材料是进行椎间盘组织工程再生的重要手段。目的:总结近年来用于椎间盘再生去细胞化基质材料的制备工艺、质量控制、应用效果,并进行展望。方法:检索PubMed、Web of Science和CNKI数据库等收录的有关去细胞化方法及去细胞基修复椎间盘的文章,英文检索词为"Intervertebral disc,Decellularization,Extracellular matrix,Scaffold material,Tissue engineering",中文检索词为"椎间盘,去细胞化,细胞外基质,支架材料,组织工程"。根据纳入与排除标准对所有文章进行初筛后,保留相关性较高的文章进行综述。结果与结论:目前的椎间盘去细胞化组织工程旨在最大程度地保留生理相关的生物活性物质,提高力学性能和生物相容性,降低免疫原性。去细胞化基质材料能够模拟椎间盘内细胞外基质的天然微环境,作为细胞载体能对种子细胞起到良好的诱导分化用,其修复椎间盘已经取得了一定进展,但材料的孔隙率、免疫排斥反应、植入体内方式及效果评估等问题还有待进一步的深入研究。

关键词：椎间盘退变去细胞化细胞外基质支架纤维环髓核种子细胞组织工程

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去细胞化肝脏生物支架材料的制备

南方医科大学学报 2011年第1期31卷 69-72页

作者：潘明新程远汪燕何国林胡鹏运高毅南方医科大学广东广州510282 珠江医院肝胆二科广东广州510282

目的探讨制备去细胞化肝脏生物支架(decellularize d liver biological scaffold,DLBS)的新方法,寻找适合肝脏组织工程的新型支架材料。方法 (1)采用化学去垢剂—酶联合去细胞化技术制备去细胞化全肝脏生物支架,并观察去细胞化效果;(2)D... 详细信息

目的探讨制备去细胞化肝脏生物支架(decellularize d liver biological scaffold,DLBS)的新方法,寻找适合肝脏组织工程的新型支架材料。方法 (1)采用化学去垢剂—酶联合去细胞化技术制备去细胞化全肝脏生物支架,并观察去细胞化效果;(2)DLBS与C3A及骨髓间充质干细胞体外共培养,观察DLBS细胞相容性。(3)通过四氮唑盐比色法(MTTAssay)观察DLBS对C3A的增殖作用。(4)将DLBS植入SD大鼠背部皮下,4周后处死大鼠,观察鉴定DLBS的组织相容性。结果通过HE染色、扫描电镜观察证实经过化学去垢剂—酶联合去细胞方法制备的去细胞化全肝生物支架不含细胞成分,只剩下胶原、弹性蛋白等支架成分;体外培养实验发现,L02及骨髓间充质细胞能够与DLBS粘连、生长。MTTAssay检测证实DLBS有促进C3A生长、增殖的作用。结论利用化学去垢剂—酶联合去细胞化技术制备的DLBS脱细胞彻底、细胞外基质保留较完整,并且有促进细胞粘附、增殖和分化的作用,是一种较为理想的生物支架材料。

关键词：去细胞化肝脏组织工程体外细胞培养四氮唑盐比色法

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去细胞化肝脏生物支架的应用进展

中华消化外科杂志 2015年第1期14卷 85-89页

作者：温旭东王小军夏锋第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所中国人民解放军西南肝胆外科医院重庆400038

肝脏替代治疗是目前终末期肝病最有效的治疗措施，而去细胞化肝脏生物支架拓宽了肝脏替代治疗的研究领域。目前普遍的支架制备过程是在一定的物理条件下，经灌注设备将化学试剂（去垢剂、消化酶等）注入肝脏自身的脉管结构中，达到去除... 详细信息

肝脏替代治疗是目前终末期肝病最有效的治疗措施，而去细胞化肝脏生物支架拓宽了肝脏替代治疗的研究领域。目前普遍的支架制备过程是在一定的物理条件下，经灌注设备将化学试剂（去垢剂、消化酶等）注入肝脏自身的脉管结构中，达到去除细胞成分，保留支架内ECM和超微脉管结构的目的。再将种子细胞注人到去细胞化肝脏生物支架，获得再细胞化肝脏，模拟机体内肝脏生物环境进行体外或体内培养，观察种子细胞附着情况，检测肝脏代谢功能，评估肝脏替代效果。目前，种子细胞的选取、再细胞化流程、再细胞化肝脏移植等问题仍处于探索阶段。笔者围绕去细胞化肝脏生物支架的制备与评价、检测和应用作一综述，为进一步应用于实验研究和临床实践提供参考。

关键词：去细胞化肝脏生物支架制备应用

聚乙二醇去细胞化组织工程带瓣管道的物理特性

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华中科技大学学报（医学版） 2006年第5期35卷 659-661,F0004页

作者：蒋雄刚徐鹏韩啸杨华静张凯伦华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科武汉430030

目的探讨聚乙二醇(PEG)法在生物带瓣管道准备中的应用价值,比较PEG去细胞前后带瓣管道的物理特性。方法猪主动脉瓣带瓣管道分为去细胞组和正常对照组,去细胞组用PEG和DNaseⅠ处理,苏木精-伊红染色观察去细胞情况,DNA含量测定,计算去细... 详细信息

目的探讨聚乙二醇(PEG)法在生物带瓣管道准备中的应用价值,比较PEG去细胞前后带瓣管道的物理特性。方法猪主动脉瓣带瓣管道分为去细胞组和正常对照组,去细胞组用PEG和DNaseⅠ处理,苏木精-伊红染色观察去细胞情况,DNA含量测定,计算去细胞百分率;猪主动脉带瓣管道条置于力学测试仪,测定最大负荷、最大应力、最大应变和弹性模量。结果PEG组去细胞百分率为95.32%,去细胞猪带瓣管道组织中看不到细胞成分;且细胞外基质(ECM)结构保存完整,胶原纤维排列整齐,无明显断裂,仍呈波浪状平行排列,结构紧凑,弹性纤维结构清晰,组织无明显水肿。生物力学检测,与对照组比较最大负荷、最大应力、弹性模量、最大应变等的差异均无显著性意义。结论PEG法去除细胞完全,细胞外基质保存完整,对组织机械性能无明显影响,适于构建组织工程带瓣管道。

关键词：组织工程聚乙二醇生物带瓣管道去细胞化

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大鼠去细胞化肝脏生物支架的制备及成分分析

大鼠去细胞化肝脏生物支架的制备及成分分析

作者：吴大帅郑州大学

学位级别：硕士

背景对于各种肝脏疾病导致的终末期肝衰竭,肝移植是目前医学界公认的最具明确疗效的治疗手段。因目前的供体数量远远不能满足肝移植的需求,如何解决供肝问题,成为当今器官移植领域的研究热点。去细胞化肝脏生物支架(Decellularized Live... 详细信息

背景对于各种肝脏疾病导致的终末期肝衰竭,肝移植是目前医学界公认的最具明确疗效的治疗手段。因目前的供体数量远远不能满足肝移植的需求,如何解决供肝问题,成为当今器官移植领域的研究热点。去细胞化肝脏生物支架(Decellularized Liver Bioscaffold,DLB)是目前在组织工程中提出的一个新观点,通过去细胞化实现对肝脏形态结构的三维重建,保留原来肝脏的绝大部分细胞外基质成分,包括胶原及弹性纤维等。构建一个理想的DLB,解决传统生物支架的低免疫原性、仿生性差及机械强度弱等方面的不足,最终将肝脏细胞及内皮细胞等相关细胞材料与DLB材料实现复合,体外构建适合移植的肝脏,实现对病态肝脏的部分或完全替代,将是组织工程及器官移植领域的一个里程碑。目的本实验结合以往去细胞化器官的制备方案,利用自行设计的去细胞化灌注装置通过化学及酶学相结合的方法制备大鼠DLB,并在支架制备完成后对其进行成分分析,为下一步进行种子细胞再植构建人工肝脏提供实验数据。方法1.成年SD大鼠,雌雄不限,10%水合氯醛腹腔注射麻醉。取腹部纵向切口,上至剑突,下至耻骨联合上缘,仔细分离肝脏与周围组织。于肝下下腔静脉与右肾静脉交汇处,行200U/ml肝素钠溶液全身肝素化处理。显微操作下门静脉置入20G留置针,剪开肝上及肝下下腔静脉,将生理盐水经留置针注入肝脏内,肝脏颜色逐渐变为土黄色时,停止灌注。仔细分离肝脏周围剩余组织,完整取下肝脏。2.将取下的肝脏随机分为对照组与实验组,对照组4%甲醛固定留存,实验组移入去细胞化装置中,首先用配制比例为0.02%胰蛋白酶及0.05%EDTA混合溶液灌注2h,其次用配制比例为4%Triton-X 100及0.05%EDTA混合溶液灌注20-24h,然后用1%SDS溶液灌注2h,再用配制比例为0.1%过氧乙酸及4%乙醇混合溶液灌注2h,最后用头孢唑林钠溶液灌注肝脏6h以上,DLB制备完成。3.对照组与实验组均进行固定,常规行HE染色,透射电镜扫描,同时行I型胶原蛋白、CD35、LCA及Vimentin蛋白免疫组化(immunochistochemistry,IHC)分析。结果1.灌注过程中观察到大鼠肝脏颜色由土黄色逐渐变为半透明,肝脏的脉管系统逐渐显现出来。***染色后,对照组可见大量蓝染并密集分布的细胞核及粉红色分布的细胞外基质,胶原纤维之间无明显断裂。DLB内无明显细胞核成分残留,可观察到呈粉红色并密集分布的细胞外基质。3.透射电镜扫描可见对照组细胞结构明显,清晰看到细胞核卵圆形,高尔基体、内质网等细胞器较丰富,DLB经透射电镜扫描未见明显细胞样结构残存,见大量纤维编织成网状结构,排列有序,同时可见到管状样结构等。4.对照组与DLB内的I型胶原蛋白、CD35、LCA及Vimentin蛋白免疫组化OD值结果进行统计学分析,CD35、LCA及Vimentin蛋白在对照组与DLB内差异有统计学意义,I型胶原蛋白在对照组与DLB内的差异无统计学意义。结论利用化学及酶学灌注法可以构建大鼠DLB,该方案能有效去除肝脏内细胞成分,保留细胞外基质,DLB可用于肝脏组织工程的研究。

关键词：肝脏去细胞化生物支架组织工程

去细胞化全肝生物支架循环灌注培养条件下体外细胞再植

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中国组织工程研究 2012年第18期16卷 3231-3235页

作者：胡鹏蕴程远汪艳李志国潘明新南方医科大学附属珠江医院肝胆二科再生医学研究所广东省广州市510282

背景:通过去细胞化技术制备全肝生物支架成为缓解供体短缺的新技术,优化肝脏组织的去细胞化流程成为新的课题。目的:通过去细胞化技术建立完整保留肝脏三维结构和脉管系统的全肝生物支架,利用自主设计的循环灌注培养装置实现生物支架体... 详细信息

背景:通过去细胞化技术制备全肝生物支架成为缓解供体短缺的新技术,优化肝脏组织的去细胞化流程成为新的课题。目的:通过去细胞化技术建立完整保留肝脏三维结构和脉管系统的全肝生物支架,利用自主设计的循环灌注培养装置实现生物支架体外细胞再植。方法:通过门静脉路径循环灌注去垢剂TritonX-100,十二烷基硫酸钠,并用磷酸盐缓冲液洗脱残留去垢剂。通过动态循环灌注培养装置进行支架与HepG2细胞的共培养,观察植入细胞在全肝生物支架内的功能表达。结果与结论:经去垢剂灌注后,支架呈现保持肝脏三维结构的透明结构,苏木精-伊红染色以及扫描电镜结果显示细胞成分被完全移除,Masson’sTrichrome染色可见大量胶原纤维,免疫组化结果证实纤维连接蛋白和层粘连蛋白保存完整。循环灌注培养下细胞白蛋白表达量及尿素合成量较平板培养明显提高。说明去细胞化肝脏生物支架可作为体外肝脏组织重建的基础材料,动态循环灌注方法可实现支架中细胞再植。

关键词：去细胞化生物支架循环灌注培养细胞再植肝脏

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去细胞化全肝脏生物支架的制备及初步研究

去细胞化全肝脏生物支架的制备及初步研究