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鱼类和哺乳类RLR介导的抗病毒免疫反应的泛素化修饰调控

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水生生物学报 2020年第5期44卷 976-988页

作者：李依琳张义兵中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室武汉430072 中国科学院大学北京100049

RLR[retinoic acid-inducible geneⅠ(RIG-Ⅰ)-like Receptors]是一类表达在胞浆中的模式识别受体,在识别细胞质中经病毒复制产生的病毒RNA后,启动一系列信号级联反应,以诱导机体Ⅰ型干扰素及干扰素诱导的抗病毒基因的表达,最后达到清... 详细信息

RLR[retinoic acid-inducible geneⅠ(RIG-Ⅰ)-like Receptors]是一类表达在胞浆中的模式识别受体,在识别细胞质中经病毒复制产生的病毒RNA后,启动一系列信号级联反应,以诱导机体Ⅰ型干扰素及干扰素诱导的抗病毒基因的表达,最后达到清除机体病毒感染的目的。由于在病毒感染时机体干扰素反应必须迅速启动,当病毒清除后干扰素反应又需要立即恢复到正常本底水平,因此RLR激活的信号转导途径受到了严格的调控,其中就包括由E3泛素连接酶参与的泛素化修饰调控和由去泛素化酶参与的去泛素化修饰调控。自2003年成功鉴定出鱼类干扰素基因以来,鱼类也被发现具有保守的RLR信号转导途径诱导干扰素抗病毒免疫反应,该信号途径同样受到泛素化修饰的调控。文章总结了近年来泛素化修饰在哺乳类和鱼类RLR介导的抗病毒免疫应答通路中的调节机制。

关键词： RLR E3泛素连接酶去泛素化酶泛素化去泛素化

葡糖酸激酶IDNK在非小细胞肺癌中的功能及机制研究

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葡糖酸激酶IDNK在非小细胞肺癌中的功能及机制研究

作者：赵涛南昌大学

学位级别：硕士

葡糖酸激酶（IDNK）催化葡糖酸磷酸化生成6-磷酸葡糖酸从而进入磷酸戊糖途径,目前关于IDNK蛋白稳态调控及其在肿瘤发展中的功能研究甚少。在本项目中,我们通过蛋白质免疫印迹实验发现IDNK在非小细胞肺癌（NSCLC）细胞中的蛋白表达高于... 详细信息

葡糖酸激酶（IDNK）催化葡糖酸磷酸化生成6-磷酸葡糖酸从而进入磷酸戊糖途径,目前关于IDNK蛋白稳态调控及其在肿瘤发展中的功能研究甚少。在本项目中,我们通过蛋白质免疫印迹实验发现IDNK在非小细胞肺癌（NSCLC）细胞中的蛋白表达高于人支气管上皮细胞,临床组织样本检测也发现IDNK在非小细胞肺癌中的表达明显高于癌旁组织,这提示IDNK可能在NSCLC的发展中发挥促进作用。我们通过细胞生长和克隆集落形成实验发现敲低IDNK可以抑制非小细胞肺癌细胞的增殖;通过细胞划痕和Transwell迁移实验发现敲低IDNK抑制非小细胞肺癌细胞的迁移;质谱和蛋白质免疫共沉淀实验发现去泛素化酶UCHL1是IDNK的相互作用蛋白,UCHL1能够导致IDNK的去泛素化从而稳定IDNK蛋白水平。综上所述,我们的研究发现IDNK在NSCLC中高表达,明确了IDNK在非小细胞肺癌细胞增殖和迁移的作用,阐明了去泛素化酶UCHL1调控IDNK蛋白稳态的分子机制,为NSCLC的治疗提供新思路和新靶点。

关键词：葡糖酸激酶 UCHL1 去泛素化非小细胞肺癌

USP14调控c-Met促进非小细胞肺癌侵袭转移的机制研究

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USP14调控c-Met促进非小细胞肺癌侵袭转移的机制研究

作者：韩双泽中南大学

学位级别：硕士

研究背景:非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)侵袭转移导致高死亡率。相关研究表明,多个癌基因的基因扩增(蛋白高表达)或突变参与了NSCLC侵袭转移调控,如c-Met,EGFR和KRAS等。本课题前期研究发现c-Met在侵袭转移能力强的NS... 详细信息

研究背景:非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)侵袭转移导致高死亡率。相关研究表明,多个癌基因的基因扩增(蛋白高表达)或突变参与了NSCLC侵袭转移调控,如c-Met,EGFR和KRAS等。本课题前期研究发现c-Met在侵袭转移能力强的NSCLC细胞内高表达,但c-Met表达上调的分子机制并不清楚。利用靶向去泛素化酶的sh RNA文库筛选发现,基因沉默去泛素化酶USP14显著下调了c-Met的蛋白表达,提示USP14可能是调控c-Met蛋白,促进NSCLC侵袭转移的重要调控分子。研究方法:Western Blot检测USP14和c-Met蛋白在具有高转移能力的非小细胞肺癌细胞系中的表达水平;慢病毒介导感染高转移的非小细胞肺癌细胞A549和H1299,构建USP14敲低的稳定细胞系(A549 sh USP14,H1299 sh USP14),Western Blot检测A549 sh USP14,H1299 sh USP14稳定细胞系中USP14和c-Met蛋白的表达水平;A549和H1299转染USP14 si RNA,Western Blot检测USP14和c-Met的蛋白表达水平;Co-IP免疫共沉淀实验检测USP14对c-Met的调控作用;利用A549 sh USP14和H1299 sh USP14稳定细胞系,USP14靶向抑制剂IU1处理非小细胞肺癌细胞A549和H1299,通过Transwell侵袭实验和细胞划痕实验探究USP14和c-Met在NSCLC侵袭转移中的作用;并进一步利用裸鼠体内转移模型验证基因沉默USP14对NSCLC细胞体内侵袭转移的作用。研究结果:(1)USP14和c-Met蛋白在高转移非小细胞肺癌细胞系中高表达;(2)USP14去泛素化调控c-Met蛋白表达;(3)基因沉默USP14抑制NSCLC侵袭转移;(4)基因沉默USP14抑制NSCLC细胞在裸鼠体内侵袭转移。研究结论:去泛素化酶USP14调控c-Met促进非小细胞肺癌侵袭转移,USP14可能是抑制非小细胞肺癌侵袭转移的潜在治疗靶点。本研究共图10幅,表3个,参考文献115篇。

关键词： USP14 c-Met 去泛素化非小细胞肺癌侵袭转移

USP40通过STING调节非小细胞肺癌顺铂抵抗的研究

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USP40通过STING调节非小细胞肺癌顺铂抵抗的研究

作者：郭佳兴中南大学

学位级别：硕士

在正常情况下,DNA主要存在于细胞核和线粒体中。当外来病原体入侵或外界因素诱导的DNA损伤导致DNA进入细胞质中,核酸适配体c GAS或STING会进一步识别并结合细胞质DNA,诱导免疫刺激基因和I型干扰素的表达,并激活T细胞连接适应性免疫。基... 详细信息

在正常情况下,DNA主要存在于细胞核和线粒体中。当外来病原体入侵或外界因素诱导的DNA损伤导致DNA进入细胞质中,核酸适配体c GAS或STING会进一步识别并结合细胞质DNA,诱导免疫刺激基因和I型干扰素的表达,并激活T细胞连接适应性免疫。基于STING通路在宿主抗肿瘤免疫应答中发挥关键作用,因此,靶向STING可以提供一种新的治疗策略。泛素化修饰作为主要的蛋白质翻译后修饰之一,对调控蛋白质功能具有重要影响。STING作为重要的接头蛋白,其功能受到多种类型的泛素化修饰调控。去泛素化酶主要通过移除底物上的泛素链,从而调节蛋白的功能和命运,对STING的去泛素化酶的研究有助于调节其稳定性和功能。化疗抵抗是临床治疗中常见的一种现象,导致药物治疗的疗效降低。越来越多的证据表明泛素化-蛋白酶体系统与化疗耐药相关,因此去泛素化酶可以作为化疗耐药的有效靶点。研究目的:筛选调节STING的去泛素化酶,明确去泛素化酶对STING的调控,确定STING及其去泛素化酶对非小细胞肺癌的作用。进一步研究去泛素化酶USP40对非小细胞肺癌化疗敏感性的影响,为临床肿瘤化疗抵抗提供新的视角。研究方法:我们利用数据库中STING的表达情况对非小细胞肺癌患者生存预后进行分析。体外生物学功能实验验证STING在非小细胞肺癌中的作用。在HEK293T细胞中瞬时转染去泛素化酶质粒筛选出调节STING蛋白水平的去泛素化酶USP40,研究两者的相互作用和作用机制,探索过表达USP40后对细胞增殖、克隆形成和迁移能力的影响。进一步采用裸鼠皮下成瘤实验探讨USP40对非小细胞肺癌细胞生长的影响。此外,我们还通过RT-PCR、Western Blotting、CCK8及Transwell等实验进一步探讨USP40对非小细胞肺癌化疗抵抗的作用。研究结果:TCGA和GEO数据库分析表明,在非小细胞肺癌组织中STING的低表达预示患者的不良预后。生物学功能实验证明STING抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、克隆形成及迁移能力。筛选出调节STING的蛋白水平去泛素化酶USP40,Co-IP实验证明两者存在相互作用,免疫荧光实验证明两者存在共定位,体外泛素化实验发现USP40通过K33和K48位点稳定STING蛋白水平。体外实验证明USP40发挥抑癌作用,体内裸鼠皮下成瘤实验证明USP40的低表达加速肿瘤细胞的增殖生长。最后,我们发现USP40的低表达可以提高非小细胞肺癌对化疗药物的抵抗。结论:USP40和STING在非小细胞肺癌中均发挥抑癌基因的作用,并可以作为有效的患者生存期预示分子;USP40通过去泛素化STING抑制非小细胞肺癌的进展;USP40抑制非小细胞肺癌的化疗抵抗。图21幅,表15个,参考文献99篇

关键词： STING 去泛素化 USP40 非小细胞肺癌化疗抵抗

USP7调控多种肿瘤细胞PD-L1的表达及其机制研究

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USP7调控多种肿瘤细胞PD-L1的表达及其机制研究

作者：仇洁雅中南大学

学位级别：硕士

研究背景和目的:程序性细胞死亡受体1(PD-1)与其配体1(PD-L1)结合形成的免疫检测点通过抑制T淋巴细胞的活性和功能以及阻止细胞毒性T细胞杀伤肿瘤细胞,导致肿瘤免疫逃逸。PD-1/PD-L1免疫检查点不仅是肿瘤免疫治疗的主要靶点之一,而且PD... 详细信息

研究背景和目的:程序性细胞死亡受体1(PD-1)与其配体1(PD-L1)结合形成的免疫检测点通过抑制T淋巴细胞的活性和功能以及阻止细胞毒性T细胞杀伤肿瘤细胞,导致肿瘤免疫逃逸。PD-1/PD-L1免疫检查点不仅是肿瘤免疫治疗的主要靶点之一,而且PD-L1高表达的肿瘤患者往往对PD-1/PD-L1抗体治疗反应良好,因此,揭示调控肿瘤细胞PD-L1表达和稳定的机制具有重要的理论和临床意义。我们采用USP去泛素化酶质粒文库筛选调控PD-L1表达和稳定性的去泛素化酶,发现泛素特异性蛋白酶7(ubiquitination specific proteinase 7,USP7)是PD-L1的去泛素酶。因此,本研究对USP7调控乳腺癌、非小细胞肺癌和黑色瘤细胞PD-L1的表达作用及其机制进行了研究,并分析了USP7和PD-L1表达与三种肿瘤临床病理特征的相关性。方法:将USP家族成员表达质粒与PD-L1表达质粒共转染HEK 293细胞,采用Western blot检测PD-L1的表达水平,筛选PD-L1的去泛素化酶。以乳腺癌细胞系、非小细胞肺癌细胞系以及黑色素瘤细胞系为样本:采用免疫共沉淀(CO-IP)和Duolink邻位连接实验(PLA)检测USP7与PD-L1的相互作用;采用分子模拟和缺失突变方法分析USP7与PD-L1蛋白的相互作用域;采用蛋白合成抑制剂(CHX)处理USP7敲低的三种肿瘤细胞系及其对照细胞系,Western blot检测PD-L1的半衰期;采用蛋白酶体抑制剂MG132处理USP7敲低的三种肿瘤细胞系,Western blot检测PD-L1水平的变化,分析MG132是否回复PD-L1的表达水平;采用CO-IP检测USP7敲低三种肿瘤细胞系PD-L1的表达和泛素化水平,分析USP7是否通过泛素蛋白酶体途径调控PD-L1的表达和稳定性。采用生物信息学方法分析USP7表达与肿瘤免疫微环境中免疫细胞浸润的相关性;采用免疫组织化学检测195例乳腺癌、188例非小细胞肺癌和163例黑色素瘤患者手术切除组织USP7和PD-L1的表达水平,分析USP7和PD-L1表达水平与患者临床特征的相关性及其预测患者预后的价值。结果:采用去泛素化酶质粒文库筛选PD-L1的去泛素化酶,发现USP7显著上调PD-L1的表达;CO-IP和Duolink PLA实验证实,在乳腺癌细胞、非小细胞肺癌细胞以及黑色素瘤细胞中USP7与PD-L1相互作用;分子模拟和缺失突变分析显示,USP7的TRAF区与PD-L1 ICD区结合;USP7通过泛素-蛋白酶体途径调控乳腺癌细胞、非小细胞肺癌细胞以及黑色素瘤细胞PD-L1的表达和稳定性;生物信息学分析结果显示,USP7表达水平与乳腺癌、非小细胞肺癌和黑色素瘤免疫微环境中CD8T细胞浸润负相关;在乳腺癌、非小细胞肺癌和黑色素瘤组织中USP7和PD-L1表达水平呈正相关,USP7和PD-L1表达水平与三种肿瘤的恶性病理学特征呈正相关,USP7和PD-L1高表达肿瘤患者的无病生存率(DFS)和总生存率(OS)比USP7或PD-L1高表达的肿瘤患者差,单因素和多因素Cox回归分析显示,USP7和PD-L1联合是影响患者生存的独立预测因子。结论:(1)USP7是乳腺癌、非小细胞肺癌和黑色素瘤细胞PD-L1的去泛素化酶;(2)USP7通过泛素蛋白酶体途径调控乳腺癌、非小细胞肺癌和黑色素瘤细胞PD-L1的表达水平和稳定性;(3)USP7和PD-L1均高表达的乳腺癌、非小细胞肺癌和黑色素瘤细胞患者的预后较单个蛋白低表达的肿瘤患者差,两种蛋白联合是影响患者生存的独立预测因子。图17幅,表12个,参考文献56篇

关键词： USP7 PD-L1 泛素化去泛素化肿瘤免疫逃逸

硫酸乙酰肝素对NLRP3炎性小体的激活作用及其机制研究

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硫酸乙酰肝素对NLRP3炎性小体的激活作用及其机制研究

作者：赵莉君电子科技大学

学位级别：硕士

目的:明确硫酸乙酰肝素（Heparan Sulfate,HS）对NLRP3炎性小体的激活作用并阐明其确切机制,为HS相关疾病的发生发展机制的阐释提供新的思路,并为其药物治疗提供新的靶点。方法:（1）经PMA诱导的人单核细胞THP-1经HS单独处理或与其它信... 详细信息

目的:明确硫酸乙酰肝素（Heparan Sulfate,HS）对NLRP3炎性小体的激活作用并阐明其确切机制,为HS相关疾病的发生发展机制的阐释提供新的思路,并为其药物治疗提供新的靶点。方法:（1）经PMA诱导的人单核细胞THP-1经HS单独处理或与其它信号二诱导剂共处理后,通过ELISA法检测细胞IL-1β的分泌量来初步明确HS对NLRP3炎性小体的激活作用;（2）以MCC950为对照药,THP-1细胞在经HS和nigericin共刺激后,分别采用ELISA检测细胞IL-1β的分泌、FLICA检测caspase-1的激活、ICC观察NLRP3的寡聚化来进一步明确HS对NLRP3炎性小体的激活作用;（3）在加入NF-κB抑制剂的条件下,通过ELISA检测THP-1细胞经过HS处理后IL-1β的分泌量;采用Real-time PCR检测细胞经HS处理不同时间后NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β的基因表达水平;采用Western Blot检测细胞经HS刺激后胞浆中IκB-α、p-IκB-α和胞核中p65和ac-p65的表达,以此明确HS是否通过NF-κB介导的转录途径诱导NLRP3炎性小体预激活;（4）在加入去泛素化酶抑制剂PR-619的条件下利用ELISA检测THP-1细胞经过HS处理后IL-1β的分泌量;THP-1细胞经HS处理后,分别采用co-IP和ICC检测细胞中NLRP3泛素化水平的变化,以此明确HS是否通过去泛素化的非转录途径诱导NLRP3炎性小体预激活。结果:（1）HS单独刺激或者和ATP、MSU、PA以及LPS等共刺激THP-1细胞并不能使IL-1β的分泌水平显著升高,仅在和nigericin共刺激细胞时能浓度依赖地使IL-1β的分泌水平显著升高,表明HS的作用环节是促进NLRP3的预激活而非组装活化。（2）细胞经HS和nigericin共刺激后IL-1β分泌水平显著上升,NLRP3的寡聚化和caspase-1活性显著增强,上述效应可被NLRP3抑制剂MCC950显著抑制,表明HS和nigericin共刺激可激活NLRP3炎性小体并释放出成熟的IL-1β。（3）HS处理后细胞caspase-1和IL-1β两种基因表达水平显著升高、IκBα磷酸化、p65的乙酰化以及p65进入细胞核的量显著增加,表明HS可通过NF-κB介导的转录途径诱导NLRP3炎性小体预激活;（4）HS和nigericin共处理引起的细胞IL-1β分泌水平升高可被PR-619显著抑制,表明去泛素化调节参与了HS对NLRP3炎性小体的预激活;HS处理THP-1细胞后NLRP3的泛素化修饰水平显著降低,与泛素的细胞内共定位明显减少,表明HS通过去泛素化诱导了NLRP3炎性小体的预激活。结论:HS可启动NLRP3炎性小体的预激活,联合nigericin可激活NLRP3炎性小体;HS一方面通过NF-κB介导的转录途径促进NLRP3炎性小体的预激活,另一方面还可通过诱导NLRP3去泛素化的非转录途径启动NLRP3炎性小体的预激活。

关键词：硫酸乙酰肝素 NLRP3炎性小体预激活核因子-κB 去泛素化

USP10通过去泛素化P53调控P53的定位和稳定性

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中国肿瘤生物治疗杂志 2010年第3期17卷 332-332页

作者：王春梅李楠

P53作为一种重要的肿瘤抑制因子,在肿瘤细胞的生长、凋亡、细胞周期和衰老等过程中发挥着重要调控作用。P53表达和定位决定其生物学功能的发挥。P53的表达主要受翻译后调控,如磷酸化、甲基化和泛素化等,其中E3泛素连接酶Mdm2在调控P53... 详细信息

P53作为一种重要的肿瘤抑制因子,在肿瘤细胞的生长、凋亡、细胞周期和衰老等过程中发挥着重要调控作用。P53表达和定位决定其生物学功能的发挥。P53的表达主要受翻译后调控,如磷酸化、甲基化和泛素化等,其中E3泛素连接酶Mdm2在调控P53的表达和定位中起重要作用,Mdm2通过泛素化P53,导致P53的出核,在胞质内发生蛋白酶体依赖的降解。[第一段]

关键词： P53表达调控作用去泛素化稳定性肿瘤抑制因子 Mdm2 生物学功能泛素连接酶

BAP1稳定TRIM11调控乳腺癌细胞增殖的研究

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BAP1稳定TRIM11调控乳腺癌细胞增殖的研究

作者：张婉莹大连理工大学

学位级别：硕士

乳腺癌是全球女性死亡的主要原因,与其他国家一样乳腺癌已经成为中国女性最常患的癌症。每年的新发数量与死亡数量逐步增长,并且乳腺癌开始趋于年轻化,所以乳腺癌的治疗与预后值得深入研究。泛素化是一种常见的翻译后蛋白质修饰,可以调... 详细信息

乳腺癌是全球女性死亡的主要原因,与其他国家一样乳腺癌已经成为中国女性最常患的癌症。每年的新发数量与死亡数量逐步增长,并且乳腺癌开始趋于年轻化,所以乳腺癌的治疗与预后值得深入研究。泛素化是一种常见的翻译后蛋白质修饰,可以调节多种生理或病理过程,尤其是肿瘤的发生和凋亡。但这一种翻译后修饰是可逆的,它是由去泛素化酶这个大家族介导。BAP1属于泛素羧基末端水解酶家族,在癌症的发生发展中有着重要作用,但其在乳腺癌中所扮演的角色和分子机制还不够明确。在泛素化系统中,E3泛素连接酶的种类很多,所以使得该系统具有高特异性。TRIM11是一种E3泛素连接酶,近些年在乳腺癌的研究中发现TRIM11不只发挥E3泛素连接酶的作用,其蛋白水平的变化可以调控乳腺癌细胞的增殖。有文章表明TRIM11可以通过稳定ERα或者通过AKT/GLUT1通路来促进乳腺癌细胞增殖,但TRIM11的翻译后修饰研究较少。因此,本研究探讨了BAP1对TRIM11的翻译后修饰及对乳腺癌细胞增殖的影响。主要工作如下:1.蛋白质免疫印迹（Western Blotting）实验研究BAP1对乳腺癌细胞相关蛋白水平的影响。发现BAP1可以明显上调TRIM11的蛋白表达情况。通过梯度实验证实BAP1可以稳定TRIM11蛋白表达情况。2.免疫共沉淀和GST-Pulldown实验证明了BAP1和TRIM11有直接相互作用。免疫荧光共定位实验发现两者共定位于核内,为两者互作提供空间支持。3.通过Western Blotting实验验证TRIM11的半衰期,当过表达BAP1时可以延长TRIM11的半衰期时间。用MG132药物处理细胞使其蛋白酶体通路失去作用,发现过表达BAP1无法提高TRIM11蛋白表达水平。通过外源泛素化实验发现BAP1可以去泛素化TRIM11从而提高其蛋白稳定性。4.细胞增殖和细胞克隆形成实验结果显示,过表达TRIM11促进乳腺癌细胞增殖,当敲低BAP1时过表达TRIM11乳腺癌细胞增殖情况明显下调,而再回补BAP1的蛋白表达,乳腺癌细胞增殖情况得到明显恢复。综上所述,本论文发现TRIM11可以被BAP1去泛素化修饰,稳定TRIM11的蛋白表达,从而促进了乳腺癌细胞增殖。本研究为乳腺癌的治疗和预后药物的研发提供新的理论依据。

关键词： TRIM11 BAP1 去泛素化乳腺癌增殖

USP15稳定肺癌细胞PD-L1机理研究及小分子抑制剂筛选

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USP15稳定肺癌细胞PD-L1机理研究及小分子抑制剂筛选

作者：甘雨中南大学

学位级别：硕士

研究背景:靶向PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂已成为抗肿瘤免疫治疗的重要手段。研究发现,抗PD-1/PD-L1单克隆抗体的临床疗效与PD-L1水平有关,但肿瘤细胞中高表达PD-L1蛋白的潜在调控机制尚未明确。本研究前期发现去泛素化酶USP15直接与PD... 详细信息

研究背景:靶向PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂已成为抗肿瘤免疫治疗的重要手段。研究发现,抗PD-1/PD-L1单克隆抗体的临床疗效与PD-L1水平有关,但肿瘤细胞中高表达PD-L1蛋白的潜在调控机制尚未明确。本研究前期发现去泛素化酶USP15直接与PD-L1相互作用,可有效上调PD-L1的蛋白丰度。因此,本课题将深入研究去泛素化酶USP15调控PD-L1蛋白的分子机制,并以肺癌为模型明确USP15在抗肿瘤免疫中的关键作用。拟筛选能特异性调控USP15及PD-L1表达的小分子化合物,为肿瘤免疫治疗增敏提供研究基础。研究方法:数据库分析USP15和PD-L1蛋白在肺癌患者中的生存相关性;免疫共沉淀实验检测USP15与PD-L1的结合作用;A549转染Flag-USP15,免疫印迹实验检测USP15对PD-L1的调控作用;构建USP15敲除的稳定细胞系(HCC827 sg USP15,H460 sg USP15,LLC1 sg USP15),免疫印迹实验检测HCC827 sg USP15,H460sg USP15,LLC1 sg USP15稳定细胞系中PD-L1和USP15蛋白的表达水平;利用H460 sg USP15稳定细胞系,293T细胞转染Flag-USP15、His-Ub和GFP-PD-L1,通过内源性和外源性泛素化实验探究USP15调控PD-L1的具体机制;通过流式细胞术筛选可调控PD-L1的天然化合物;通过免疫印迹实验筛选可调控PD-L1的天然化合物;免疫共沉淀实验检测候选化合物对于USP15和PD-L1相互结合的调控作用;并进一步利用小鼠体内模型验证基因敲除USP15对肺癌细胞体内生长的调控作用。研究结果:(1)USP15和PD-L1蛋白在肺癌中存在正相关性;(2)USP15通过其去泛素化酶活性抑制PD-L1蛋白Ub-K48泛素化修饰;(3)USP15缺失激活免疫系统抑制体内肿瘤生长;(4)香紫苏内酯下调PD-L1蛋白表达。研究结论:USP15去泛素化稳定PD-L1在肺癌中的表达,基因敲除USP15增强小鼠抗肿瘤免疫。香紫苏内酯可下调PD-L1表达并抑制PD-L1与USP15的相互结合。图20幅,表3个,参考文献64篇

关键词： USP15 PD-L1 去泛素化抗肿瘤免疫化合物筛选香紫苏内酯